CCP多肽系列的制备及其应用制造技术

本发明专利技术是一种ＣＣＰ多肽及其应用。ＣＣＰ多肽按以下步骤制备：１）计算氨基酸的亲水性值，水处理指数以及高级结构出现的频率，根据蛋白质结构推算出最具有抗原性的位点，从而推选出合成肽链的序列，即：ＳＨＱＥＳＴＸＧＲＳＲＧＲＳＧＲＳＧＳ；２）上述肽链采用Ｆｍｏｃ化学法合成目的肽，目的肽的序列为：ＨＱＣＨＱＥＳＴＸＧＲＳＲＧＲＳＧＲＳＧＳ。以ＣＣＰ多肽作为抗原检测类风湿性关节炎的酶联免疫方法。本发明专利技术的类风湿性关节炎诊断试剂盒可使诊断特异性由原来方法的５０％提高到８０％，大大提高类风湿性关节病的早期诊断率，采用医院实验室常用的ＥＬＩＳＡ方法，操作简单，试剂稳定，重复性好，特异性强，可成为类风湿诊断的常规检测方法。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医学
，具体地说是CCP多肽系列的制备及其应用于类风湿关节炎诊断试剂盒。
技术介绍
类风湿关节炎是一种致畸性自身免疫性疾病，在发病两年内即可出现不可逆的骨关节破坏，近来认为早期治疗，可缓解和控制病情，减少骨关节破坏并改善预后。现行的类风湿诊断标准常用以下几种1、类风湿因子(RF)测定(1)胶乳凝集试验RF是一种主要发生于类风湿关节炎患者体内的抗人变性IgG抗体，可与IgG的FC段结合。将变性IgG包被于聚苯乙烯胶乳颗粒上，此致敏胶乳在与待测血清中的RF相遇时，即可发生肉眼可见的凝集。(2)IgG、IgA、IgM类ELISA间接法RF测定RF主要为IgM类的抗体，但也有IgG、IgA类。测定IgG、IgA、IgM类RF通常用ELISA间接法，即用热凝聚免疫IgG包被反应板微孔，加入检样后，再分别加抗人IgG、IgA、IgM酶标记抗体，使反应后再与底物呈色。(3)RF因子定量测定通过抗原—抗体反应引起的透射光强度变化对类风湿因子进行终点比浊测定。2、核抗体测定RF患者血中含有以细胞核成分为靶抗原的自身抗体。在以小鼠肝细胞或某些培养细胞(如人喉癌上皮细胞Hep-2)作抗原片时，该抗体可与细胞核成分结合，通过间接免疫荧光技术可以检出。以上四种方法在类风湿性关节炎诊断中均缺乏敏感性(40～50％)和特异性(50～60％)，不利于早期诊断，而且与多种自身免疫性疾病存在交叉重复，较难鉴别诊断。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种对类风湿性关节炎诊断和鉴别诊断具有高特异性检测的类风湿性关节炎诊断试剂盒。本专利技术针对类风湿性关节炎诊断和鉴别诊断，实验室尚无特异性高的检测方法，不利于早期诊断，通过人工合成环瓜氨酸肽CCP，使诊断特异性大大提高。CCP是类风湿诊断特异因子抗核周因子、抗角蛋白抗体、抗聚角蛋白微丝蛋白抗体的共同抗原决定簇。本专利技术的CCP多肽序列按以下步聚制备1)计算氨基酸的亲水性值，水处理指数以及高级结构出现的频率，根据蛋白质结构推算出最具有抗原性的位点，从而推选出合成肽链的序列，即SHQESTXGRSRGRSGRSGS2)上述肽链采用Fmoc化学法合成目的肽，目的肽的序列为HQCHQESTXGRSRGRSGRSGS。以上所述的CCP多肽序列的应用是以CCP多肽作为抗原检测类风湿性关节炎的酶联免疫方法。将CCP多肽用于制备类风湿性关节炎的诊断式剂盒的制备方法如下(1)权利要求1所制备的CCP多肽以适当浓度包被于微空板，4℃孵育过夜；(2)以0.05％PBS-T(磷酸盐缓冲液加2％吐温)洗板3次，加入2％.牛血清的白蛋白封闭液封闭2小时，得诊断试剂盒，包装，放置冰箱备用；该试剂盒的使用方法如下1、将被检血清标本用2％BSA稀释100倍后加样到已包被好的微孔板中。2、将反应板放置37℃湿温孵育1.5小时。3、取出用PBS-T洗板3次后，加入2％的BSA按1∶1000稀释的碱性磷酸酶标记的IgG二抗，放置37℃湿温孵育1小时。4、取出反应板加入对硝基苯磷酸钠的二乙醇胺缓冲液反应用20分钟，加入2mol/l硫酸终止反应。5、结果判断反应完毕后在405nm波长下读取A值。其结果为待测标本A值＞正常标本X±2S为阳性阈值。本专利技术的类风湿性关节炎诊断试剂盒可使诊断特异性由原来方法的50％提高到80％，大大提高类风湿性关节病的早期诊断率，采用医院实验室常用的ELISA方法，操作简单，试剂稳定，重复性好，特异性强，敏感度低(可用其它方法进行弥补)可成为类风湿诊断的常规检测方法。具体实施方案实施例1本专利技术的CCP多肽序列的制备按以下步聚进行1)根据filaggrinr的一级结构，计算氨基酸的亲水性值，水处理指数以及高级结构出现的频率，根据蛋白质结构推算出最具有抗原性的位点，推选出合成肽链的序列，即SHQESTXGRSRGRSGRSGS(19肽)。2)上述肽链采用Fmoc化学法合成目的肽，目的肽的序列为HQCHQESTXGRSRGRSGRSGS(21肽)。以CCP多肽作为抗原检测类风湿性关节炎的酶联免疫方法是将CCP多肽用于制备类风湿性关节炎的诊断式剂盒，其制备方法如下(1)将以上所制备的CCP多肽(抗原)以浓度为10μg/ml包被于96微孔板，4℃孵育过夜；(2)以0.05％PBS-T(磷酸盐缓冲液加2％吐温)洗板3次，加入2％。牛血清的白蛋白封闭液封闭2小时，得诊断试剂盒，包装，放置冰箱备用；使用前，检测该试剂盒的特异性、敏感性、重复性等。权利要求1.一种CCP多肽序列的制备，其特征在于按以下步聚制备1)计算氨基酸的亲水性值，水处理指数以及高级结构出现的频率，根据蛋白质结构推算出最具有抗原性的位点，从而推选出合成肽链的序列，即SHQESTXGRSRGRSGRSGS2)上述肽链采用Fmoc化学法合成目的肽，目的肽的序列为HQCHQESTXGRSRGRSGRSGS。2.根据权利要求1所述的CCP多肽序列的应用，其特征在于以CCP多肽作为抗原检测类风湿性关节炎的酶联免疫方法。3.根据权利要求2所述的CCP多肽序列的应用，其特征在于是将CCP多肽用于制备类风湿性关节炎的诊断式剂盒，其制备方法如下(1)将权利要求1所制备的CCP多肽包被微孔板，4℃孵育过夜；(2)以0.05％PB-ST洗板3次，加入2％.牛血清的白蛋白封闭液封闭2小时，得诊断试剂盒，包装，放置冰箱备用；全文摘要本专利技术是一种CCP多肽及其应用。CCP多肽按以下步骤制备1)计算氨基酸的亲水性值，水处理指数以及高级结构出现的频率，根据蛋白质结构推算出最具有抗原性的位点，从而推选出合成肽链的序列，即SHQESTXGRSRGRSGRSGS；2)上述肽链采用Fmoc化学法合成目的肽，目的肽的序列为HQCHQESTXGRSRGRSGRSGS。以CCP多肽作为抗原检测类风湿性关节炎的酶联免疫方法。本专利技术的类风湿性关节炎诊断试剂盒可使诊断特异性由原来方法的50％提高到80％，大大提高类风湿性关节病的早期诊断率，采用医院实验室常用的ELISA方法，操作简单，试剂稳定，重复性好，特异性强，可成为类风湿诊断的常规检测方法。文档编号C07K11/00GK1491959SQ02133648公开日2004年4月28日 申请日期2002年8月20日 优先权日2002年8月20日专利技术者张 杰, 张 杰 申请人:昆明广博科技有限公司本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种ＣＣＰ多肽序列的制备，其特征在于按以下步聚制备：１）计算氨基酸的亲水性值，水处理指数以及高级结构出现的频率，根据蛋白质结构推算出最具有抗原性的位点，从而推选出合成肽链的序列，即：ＳＨＱＥＳＴＸＧＲＳＲＧＲＳＧＲＳＧＳ２） 上述肽链采用Ｆｍｏｃ化学法合成目的肽，目的肽的序列为：ＨＱＣＨＱＥＳＴＸＧＲＳＲＧＲＳＧＲＳＧＳ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张杰，
申请(专利权)人：昆明广博科技有限公司，
类型：发明
国别省市：53[中国|云南]