妇女体液样品中涉及存在唾液酸酶或氨酰基脯氨酸二酞酶活性的病理风险确定的酶检验方法技术

本发明专利技术描述了妇女体液样品中涉及存在唾液酸酶和／或氨酰基脯氨酸二酞酶活性的病理风险的确定方法，该方法依次包括以下步骤：ａ）确定所述体液样品中唾液酸酶和／或氨酰基脯氨酸二酞酶活性水平；ｂ）比较所述唾液酸酶和／或氨酰基脯氨酸二酞酶活性水平和所述活性的前置值范围；ｃ）计算风险因子。这种方法对于准确和可靠地评价妇女体液样品中涉及唾液酸酶和／或氨酰基脯氨酸二酞酶活性的病理风险特别有效。因此这种方法为医生提供了一种有效工具以决定是否进行药理学治疗。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术描述了用于妇女体液样品中涉及唾液酸酶和/或氨酰基脯氨酸二酞酶活性的病理风险的评价方法。特别地，本专利技术提供的方法用于定性和定量地确定病理风险，所述病理如低出生体重(LBW)，早产(PTD)，膜早期破裂，羊膜内感染，自然流产，子宫内膜炎，分娩后感染或者妇科手术术后感染，上生殖道感染(PID)，这些病理风险可引起不育症，宫颈炎，对乳头瘤病毒(HPV)和人免疫缺陷病毒(HIV)引起的病毒感染的性传播疾病易感性，HIV感染的垂直传播。主要由早产(PTD)引起的低出生体重(LWB)是导致新生儿发病、死亡和长期婴儿神经障碍的主要风险因子。对于大部分的低出生体重病例还未得到公认的因果因子，这使得目前的预防方案不够有效。然而一些研究已经表明细菌性阴道病(BV)与早产(PTD)、低体重婴儿的早产、前期和后期流产有关系，并且通常与母系并发症有关，与未患有BV情况相比，相关风险可从1.4倍增加到6.9倍。另外近年来细菌性阴道病与性获得HIV病毒感染和垂直母婴HIV传播的风险增高有关。细菌性阴道病在西欧未妊娠妇女中的发病率为约10％，在西欧妊娠妇女中的发病率为约15％，在美国妊娠妇女中的发病率为10-30％，在非洲血统有色人种妇女中的发病率超过30％，在就诊于性传播疾病门诊的妇女中的发病率超过60％。总之，值得注意的是在暴露于HIV病毒增高的风险的个体中，患有BV的妇女中只有一小部分会产生不利妊娠后果或者获得HIV感染，因此需要一种选择性指示剂用于对处于增高的风险并需要治疗的患者的个体化。细菌性阴道病是由不同菌种引起的，这些菌种包括阴道加德纳氏菌(G.vaginalis)，拟杆菌属菌种(Bacteroides spp.)，普雷沃氏菌属菌种(Prevotella spp.)和动弯杆菌属菌种(Mobiluncus spp.)，解脲脲枝原体(Ureaplasma urealyticum)和人枝原体(Mycoplasmahominis)。细菌性阴道病的发病机理仍不清楚，并且这种病理条件的存在经常不易被诊断。特别地，还不知道是什么引发了从正常乳酸杆菌集群到变化的阴道菌群的转变，也还不知道阴道微生物菌群变化的何种程度才是真正病理状况的指标。细菌性阴道病的一个至关重要的论点是阴道加德纳氏菌与厌氧菌的协同作用。在95％以上的细菌性阴道病病例中发现高滴定度的阴道加德纳氏菌，而在未患有细菌性阴道病的妇女中也发现低滴定度的阴道加德纳氏菌。然而已经论证了阴道加德纳氏菌集群和细菌性阴道病状况之间的严格相关性。唯一被全部定性的由阴道加德纳氏菌释放的毒力因子为β-溶血毒素(Gvh)，其分子量为约59,000道尔顿。此外，研究已显示约半数未妊娠妇女对Gvh产生免疫应答，在阴道粘膜水平产生IgA抗体。患有BV的妇女不产生抗Gvh IgA抗体主要由于IgA的失活，且这种现象与高的阴道唾液酸酶活性水平有关。这种失活源自IgA结构的被破坏，这种结构的被破怀可能是由厌氧菌释放的一群因子的水解作用所导致。目前还未知在患有细菌性阴道病的妇女亚群中，抗微生物宿主防御的哪些因子是妥协的，或者哪些毒力因子激发了IgA的裂解。首先，还未知这种状况是否与BV并发症的增高的风险有关。这种不确定定义使得临床医生面对的问题为是否对患有细菌性阴道病的妇女实施药理学治疗。已知有两种不同的药物用于治疗细菌性阴道病甲硝唑和克林霉素。这两种药物的主要缺点在于其副作用，尤其是甲硝唑能引起胃肠综合症，并且被认为是致畸剂，因此不推荐用于妊娠期，另外克林霉素能引起腹泻和可能致命的假膜性结肠炎。另外这两种药物都能引起酵母菌性阴道炎。基于以上原因，非常需要开发出一种方法用于确定病理并发症风险，所述病理并发症如低出生体重(LBW)，早产(PTD)，自然流产，膜早期破裂，子宫内膜炎，获得性HIV感染，获得性HPV感染(其可导致子宫颈上皮内瘤形成)，上生殖道感染(PID)，分娩后感染或者妇科手术术后感染。本专利技术提供一种可靠方法，通过为医生配备一种有价值的工具用于决定是否实施药理学治疗，以解决上述并发症风险的确定问题。通过主要权利要求所描述的病理风险的确定方法解决了这个问题。本专利技术方法的进一步的特征和先进性会通过随后的优选实施例的描述变得更加突出，这些特征和先进性是在指示性的描述中给出的，但不限于这些描述。为建立本专利技术的方法，对临床病例进行了研究并且与不具有公认的病理状况的妇女对照组进行了比较。特别地，对116名生产低出生体重婴儿(LBW)的妇女，86名发生早产(PTD)的妇女和417名妊娠期间具有正常体重婴儿(NTD)的妇女进行了检查。检查了所有这些妇女阴道液样品中的唾液酸酶和/或氨酰基脯氨酸二酞酶的活性，此外对所述唾液酸酶和氨酰基脯氨酸二酞酶活性水平进行了评价。唾液酸酶是由细菌产生的酶，并且出现在几种疾病的发病机理中。这些酶激发包括IgA的各种糖蛋白的唾液酸酶的水解，改变免疫应答。氨酰基脯氨酸二酞酶是由细菌产生的利于细胞浸润的蛋白水解酶。这些酶可激活细胞因子和其它免疫介质。唾液酸酶活性的确定是通过将50μl阴道液样品与50μl的底物在pH5.0进行培养，使用方法见Cauci等人，美国妇科学杂志(Am JObstat Gynecol)，1998；178511-515页的描述。用底物转化产生的毫微摩尔甲氧苯酚表示具体活性，并对照纯甲氧苯酚标准曲线进行计算。唾液酸酶活性水平的评价如下低于0.19nmol甲氧苯酚的值为无活性，等于或者大于0.19nmol甲氧苯酚的值为+1截断值，等于或者大于0.38nmol甲氧苯酚的值为+2截断值，等于或者大于2.50nmol甲氧苯酚的值为+3截断值，等于或者大于5.0nmol甲氧苯酚的值为+4截断值。氨酰基脯氨酸二酞酶活性的确定方法见Cauci等人，传染病杂志(J Infect Dis)，1998；1781698-1706页的描述。氨酰基脯氨酸二酞酶活性水平的评价如下低于22mOD值为无活性，等于或者大于22mOD值为+1截断值，等于或者大于44mOD值为+2截断值，等于或者大于1000mOD值为+3截断值，等于或者大于2000mOD值为+4截断值。使用健康对照人群(没有任何一种阴道症状和除了乳酸杆菌以外的微生物阴道集群)中测得的平均值加上一个标准偏差计算唾液酸酶和氨酰基脯氨酸二酞酶活性的+1截断值。对+1截断值加倍得到+2截断值。对+4截断值减半得到+3截断值。特别地，为建立本专利技术的方法，所述唾液酸酶和氨酰基脯氨酸二酞酶活性与LBW和PTD有关。下面表1显示的分析数据分别为生产低出生体重婴儿(LBW)，早产(PTD)或者正常足月分娩(NTD，对照组)妇女的百分数，粗体数据表示LBW或者PTD妇女的百分数与NTD妇女的百分数的比值(让步比，OR)。使用SPSS计算机统计程序对此值进行计算和用标准因子进行修正。特别地，阴道液样品的获得取自妇女妊娠期的前3个月和第4-6月，并且优选妊娠期的第7整周到第24整周。按照以下标准这些组妇女被进一步分组，阴道液样品中单独唾液酸酶的活性，单独氨酰基脯氨酸二酞酶的活性，这些酶的活性并且pH≥4.7，这些酶的活性和细菌性阴道病(BV)的病理状况，或者这些酶的活性和阴道加德纳氏菌细菌。表1阳性％OR测量参数 NTD LBW 本文档来自技高网...

【技术保护点】
妇女体液样品中涉及存在唾液酸酶和／或氨酰基脯氨酸二酞酶活性的病理风险的确定方法，该方法依次包括以下步骤：ａ）确定所述体液样品中唾液酸酶和／或氨酰基脯氨酸二酞酶活性水平；ｂ）比较所述唾液酸酶和／或氨酰基脯氨酸二酞酶活性和所述活 性的前置值范围；ｃ）计算风险因子。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：萨比纳考兹，
申请(专利权)人：尤尼拜尔有限公司，
类型：发明
国别省市：IT[意大利]