脂肪酸结合蛋白的用途和卒中风险程度预测方法技术

本发明专利技术描述了一种用于早期诊断卒中的方法，该方法使用一种包括荧光修饰的脂肪酸结合蛋白的试剂。在结合情况和未结合情况下记录荧光差别。将来自血液的未结合脂肪酸的水平升高用作卒中的指示。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及通过对体液例如全血、血浆和血清中未结合游离脂肪酸的测量来诊断卒中。
技术介绍
卒中(stroke)被定义为脑组织的血流量中断。这种中断可以是大脑特殊部位的中断或者是例如当心脏泵送血液完全失败时，实际上所有血液流动的降低。更频繁的是情况是，当流向大脑特殊部分的血流被大脑血管的阻塞或者破裂所中断时，卒中发生。血管的阻塞，例如通过栓塞或者通过通常形成在将血液提供给大脑的动脉中的血栓，被称为缺血性卒中。通常经由动脉瘤的脑血管破裂被称作出血性卒中。对于缺血性卒中的情况，血流量的中断可能是暂时的；这被称作暂时性缺血事件(TIA)。在这种情况下，患者通常不会经历临床上或者可以测量到的有害结果，但是却处于继发卒中的高风险中。相反，其阻塞在数小时内没有被溶解的患者会受到永久性损伤，常常会引起死亡。这是脑细胞(组织)死亡的结果，所述的这些脑细胞(组织)通常由如今被阻塞的血管来提供养料和氧气。通过计算机断层扫描(CT扫描)或者通过核磁共振(MRI)可以检测所述组织的死亡或者梗塞，但是只有在卒中(第一症状)开始很多小时以后才可以进行这种检测。在出血的情况下，大脑开始充满导致组织破坏的血液。在发达国家，卒中是死亡的第三原因。仅在美国，每年大约有750,000个新病例。在美国，治疗卒中的费用和因由卒中引起的死亡和发病所导致的生产力损失是大约400亿美元。对于卒中，唯一可用的治疗是向患者给予血栓溶解剂例如组织纤维蛋白酶原激活物(t-PA)，该激活物通过将有助于形成凝块的蛋白酶解来破坏此凝块。因为如果使用得太晚会产生有害作用(出血)，所以T-PA只能在第一症状出现的3小时内使用。而且，t-PA只能用于缺血性卒中；在出血性卒中中使用t-PA通常会引起死亡。因此，如果诊断迅速并且只有在排除出血性卒中的情况下，才可以使用血栓溶解疗法。目前的诊断方法实际上完全依赖于临床症状，通常靠的是急诊大夫的意见。如果大夫怀疑卒中并认为患者可能是血栓溶解剂治疗的候选者，那么随后必须让患者进行CT扫描以排除出血(CT扫描可以在早期进行检测)。通常，由于这些决定和手续需要时间，极少数具有候选资格的患者可以接受血栓溶解疗法。因此，长期存在着这样的需要能够进行简单且快速的验血，其能够确定在个体中出现或者未出现缺血性卒中，并可以区别缺血性和出血性卒中。本专利技术描述的测定体液例如血液、血清或者血浆中未结合游离脂肪酸的诊断方法，涉及简单的、廉价的、实际上即时的、而且容易达到的测量方法，该方法很有可能揭示缺血事件。专利技术概述本专利技术的专利技术者发现，未结合游离脂肪酸在卒中期间升高。这一发现提供了一条检测和诊断卒中的便利途径，而且可以将缺血性卒中与其它呈现出类似症状的情况诸如出血性卒中、偏头痛和抽搐发作区分开来。在一个实施方案中，描述了在哺乳动物中检测卒中的方法，该方法包括下列步骤提供来自哺乳动物的体液样品，该哺乳动物呈现出与缺血性卒中相符合的症状；将所述样品与一种水溶液和一种试剂混合，该试剂包括使用荧光部分标记的脂肪酸结合蛋白，其中该试剂在一种水溶液中显示出第一荧光，并且当脂肪酸结合蛋白与脂肪酸结合之后，在一种水溶液中显示出一种可以被测量到的不同的第二荧光；和在将体液样品与水溶液和所述的试剂混合以后测量第二荧光，以确定体液样品中未结合游离脂肪酸的浓度。在一个优选的实施方案中，体液选自全血、血清和血浆。在另一个实施方案中，描述了一种使用体液水平的未结合游离脂肪酸来监测患者的卒中治疗过程的方法，该方法包括下列步骤在整个卒中治疗过程中的不同时间，测量来自所述患者体液样品中的未结合游离脂肪酸的水平；将所测得到未结合游离脂肪酸水平与未结合游离脂肪酸的阈值水平相比较，其中的阈值水平由测定无卒中症状正常群体体液中的未结合游离脂肪酸所确定；和在卒中治疗过程中的任意特定时间点，确定来自患者体液样品的未结合游离脂肪酸水平是否趋向于表示治疗成功的来自正常群体的未结合游离脂肪酸的阈值水平。在一个实施方案中，描述了一种在呈现与卒中相符合症状的患者中确定出现卒中的方法，该方法包括下列步骤测量来自所述患者体液样品中的未结合游离脂肪酸的水平；将所测得到未结合游离脂肪酸水平与未结合游离脂肪酸的阈值水平相比较，其中的阈值水平由测定无卒中症状正常群体体液中的未结合游离脂肪酸所确定；和确定是否来自患者体液样品中的未结合游离脂肪酸相对于来自正常群体的未结合游离脂肪酸阈值水平升高，其中相对升高指示卒中风险增高。在一个实施方案中，体液可以是血液、血清、或者血浆。在一个实施方案中，测量步骤还包括下列步骤将体液样品与一种水溶液和一种试剂混合，该试剂包括使用荧光部分标记的脂肪酸结合蛋白，其中该试剂在一种水溶液中显示出第一荧光，并且当脂肪酸结合蛋白与脂肪酸结合之后，在一种水溶液中显示出一种可以被测量到的不同的第二荧光；和在将体液样品与该水溶液和所述的试剂混合以后测量第二荧光，以确定体液样品中未结合游离脂肪酸的浓度。在一个实施方案中，在不同于所述试剂显示第一荧光的波长处，进行第二荧光的测量步骤。在一个优选的实施方案中，测量第二荧光的波长是大约420nm-大约460nm，而且所述试剂显示第一荧光的波长是大约495-大约560nm。在一个优选的实施方案中，脂肪酸结合蛋白是大鼠肠脂肪酸结合蛋白、人脂肪细胞脂肪酸结合蛋白、或者大鼠心脏脂肪酸结合蛋白。荧光部分可以选自但不限于阿奎罗丹(acrylodan)，丹子基(danzyl)氮丙啶，4--N-甲氨基]-7-硝基苯-2-噁-1，3-二唑酯(IANBDE)，或者4--N-甲氨基]-7-硝基苯-2-噁-1，3-二唑(IANBDA)。在一个优选的实施方案中，混合和测量步骤中的试剂是被阿奎罗丹标记的脂肪酸结合蛋白，并且该脂肪酸结合蛋白是一种突变体蛋白，其选自但不限于在残基27，81，82或者84具有Cys或者在残基72具有丙氨酸的大鼠肠脂肪酸结合蛋白，或者在残基27具有赖氨酸的大鼠心脏脂肪酸结合蛋白。在一个最优选的实施方案中，混合和测量步骤中的试剂是被阿奎罗丹标记的大鼠肠脂肪酸结合蛋白。在一个备选的优选实施方案中，所述试剂是在残基72具有丙氨酸的、被阿奎罗丹标记的大鼠肠脂肪酸结合蛋白。在一个实施方案中，指示卒中的未结合脂肪酸的浓度，超过确定自非缺血群体的未结合游离脂肪酸的浓度平均值两个标准差单位。在另一个实施方案中，指示卒中的未结合脂肪酸的浓度，超过确定自非缺血群体的未结合游离脂肪酸的浓度平均值两倍。在一个实施方案，所述方法还包括下列步骤测量血液样品中的总游离脂肪酸和自蛋白；和确定总游离脂肪酸与白蛋白的比率。也可以使用其它结合脂肪酸的蛋白，在一个实施方案中，在呈现与卒中相符合的症状的患者中，确定卒中出现的方法可以包括下列步骤将体液样品与一种水溶液和一种试剂混合，该试剂包括使用荧光部分标记的白蛋白，该荧光部分可以是例如7-羟基香豆素或者氨茴酰，其中所述的试剂在一种水溶液中显示出第一荧光，并且当白蛋白与脂肪酸结合之后，在一种水溶液中显示出一种可以被测量到的不同的第二荧光；和在将体液样品与该水溶液和所述的试剂混合以后测量第二荧光，以确定体液样品中未结合游离脂肪酸的浓度。在一个实施方案中，描述了一种高危出血患者的鉴定方法，其包括下列步骤测定来自患者的体液样品中的未结合游离脂肪酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种在哺乳动物中检测卒中的方法，其包含下列步骤：提供来自哺乳动物的体液样品，该哺乳动物呈现出与缺血性卒中相符合的症状；将所述样品与一种水溶液和一种试剂混合，该试剂包括使用荧光部分标记的脂肪酸结合蛋白，其中该试剂在一种水溶液中 显示出第一荧光，并且当脂肪酸结合蛋白与脂肪酸结合之后，在一种水溶液中显示出一种可以被测量到的不同的第二荧光；和在将所述体液样品与所述的水溶液和所述的试剂混合以后测量所述的第二荧光，以确定在所述体液样品中未结合游离脂肪酸的浓度。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：艾伦克莱费尔德，
申请(专利权)人：艾伦克莱费尔德，
类型：发明
国别省市：US[美国]