人骨髓基质细胞来源的泛素样分子及其编码序列和用途制造技术

本发明专利技术涉及了一种人骨髓基质细胞来源的新型泛素样分子（ｂｏｎｅ　ｍａｒｒｏｗ　ｓｔｒｏｍａｌ　ｃｅｌｌ－ｄｅｒｉｖｅｄ　ｕｎｉｑｕｉｔｉｎ－ｌｉｋｅ，ＢＭＳＣ－ＵｂＰ）。本发明专利技术提供编码此蛋白分子的多核苷酸和经重组技术产生这种蛋白分子的方法。本发明专利技术还公开了编码这种新型泛素样分子的多核苷酸的用途。本发明专利技术还证实了ＢＭＳＣ－ＵｂＰ在细胞分化过程中表达改变的特征。ＢＭＳＣ－ＵｂＰ用于疾病的诊断及治疗，特别是可用于癌症的诊断和治疗。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学领域，具体地说，本专利技术涉及新的编码人泛素样分子BMSC-UbP多肽的多核苷酸，以及此多核苷酸编码的多肽。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的用途和制备。具体地说，本专利技术的多肽是一种新的泛素样分子。
技术介绍
骨髓基质细胞作为造血微环境的主要成分，对造血系统的分化和维持至关重要。除了与造血干细胞的直接作用，它们还可以通过分泌大量的细胞因子调控造血干细胞的分化。在一定程度上，某些白血病的发生与骨髓微环境的异常有关。骨髓基质细胞除了参与对造血的调控，目前还发现具有多种生物学功能，诸如，通过分泌趋化因子，生长因子，细胞因子调控免疫系统的发育和自稳；骨髓基质细胞作为间叶细胞，保留了多分化潜能，能够被诱导分化为成骨细胞，脂肪细胞，肌肉细胞，神经元细胞以及髓鞘细胞等；并且在一定的外界因素诱导下分化为抗原提呈细胞，刺激T细胞活化。因此研究骨髓基质细胞来源相关分子的生物学功能有助于探讨白血病的发病机制、细胞分化、组织形成、免疫调控以及损伤修复，是当前免疫学研究的热点。泛素(Ubiquitin，Ub)-蛋白酶体(Proteasome)体系是目前发现的细胞内蛋白和外来蛋白降解的主要途径，对细胞的周期进程、转录调控、抗原加工提呈以及凋亡等生理过程具有重要的调控作用。因此，泛素-蛋白酶体体系在免疫应答过程中发挥着十分重要的作用。Ub是一种76个氨基酸的小分子多肽，通过其C末端的甘氨酸残基与蛋白质分子中的ε氨基酸组的赖氨酸残基结合。Ub可以作为单体，与底物蛋白质分子结合，也可以通过其内部的赖氨酸残基与其他Ub结合，形成携带多Ub链的蛋白质分子。蛋白质分子上的Ub，作为识别信号可以被靶向到蛋白酶体内降解，多Ub链能够大大提高靶向效率。将Ub结合到底物分子上需要2-3步酶的催化过程首先，Ub与Ub活化酶(E1)之间通过硫脂键结合，使Ub活化；然后Ub通过转酰基作用转移到Ub偶联酶(Ubcs或E2s)上，后者将Ub分子结合到底物蛋白分子上，或者再经过Ub连接酶(E3s)的作用与底物分子结合。在真核生物中，E1s没有特异性，只有少数的几种；然而，E2s和E3s的种类很多，具有特异性。E2s和E3s的多样化表明蛋白质分子的泛素化过程具有特异性，不同的底物需要不同的E2s和E3s。目前的研究还表明，除了以上描述的经典泛素化体系(即Ub参与的泛素化过程)外，真核细胞内还存在着其他蛋白降解的催化体系，能催化其他与泛素类似的分子与靶分子结合。目前称这种与泛素类似的分子为泛素样分子(Ubiquitin-like molecules，Ub1)。目前国外学者已经发现了多种新的Ub1，这些Ub1分子不仅在结构上与Ub相似，而且在与靶蛋白结合的过程中，也需要功能上与E2s和E3s的类似酶系。目前，有关Ub和Ub1体系在免疫调控方面的研究主要集中在以下三个方面一是Ub和Ub1体系在抗原加工方面的作用，研究表明，MHC限制性抗原肽的加工，需要依赖Ub-蛋白酶体介导的蛋白降解过程；二是参与了NF-κB的活化，即Ub和Ub1(主要是国外学者发现的两种新的Ub1分子Nedd8和SUMO)体系参与了NF-κB前体的翻译后加工和NF-κB的核转位，并通过对IκB分子相互拮抗的泛素化样作用，调控了NF-κB的活化。三是还参与了免疫细胞的分化发育及凋亡的调控过程，如P53功能的发挥就依赖于P53的泛素化，而控制两条凋亡通路，此外Ub和Ub1s还通过对调控细胞周期进程的分子-细胞周期蛋白(Cyclin)和CDK抑制因子，NF-κB分子，Bc1-2家族的特定分子的泛素化影响着细胞的凋亡。因此，发现新的泛素样分子对于认识机体免疫细胞的作用机制等具有重要价值。泛素样分子在肿瘤的发生、生长过程中发挥重要调控作用，并可能在抗肿瘤、抗炎症反应、抗感染以及免疫功能调节等多个领域的免疫诊断和免疫治疗方面具有重要的开发和应用价值。因此，本领域迫切需要开发新的人骨髓基质细胞来源的泛素样分子。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种新的人骨髓基质细胞来源的泛素样蛋白以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一目的是提供编码这些多肽的多核苷酸。本专利技术的另一目的是提供生产这些多肽的方法以及该多肽和编码序列的用途。在本专利技术的第一方面，提供新颖的分离出的BMSC-UbP多肽，该多肽是人骨髓基质细胞来源的，它包含具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。较佳地，该多肽选自下组(a)具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽；(b)将SEQ ID NO2氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有维持白细胞分化功能的由(a)衍生的多肽。在本专利技术的第二方面，提供编码分离的这些多肽的多核苷酸，该多核苷酸包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少80％相同性(a)编码上述人BMSC-UbP的多核苷酸；和(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码具有SEQ ID NO2所示氨基酸序列的多肽。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中85-1224位的序列；(b)具有SEQ ID NO1中1-1352位的序列。在本专利技术的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。在本专利技术的第四方面，提供了制备人BMSC-UbP蛋白的方法，该方法包含(a)在表达条件下，培养上述被转化或转导的宿主细胞；(b)从培养物中分离出人BMSC-UbP蛋白。在本专利技术的第五方面，提供了与上述的人BMSC-UbP多肽特异性结合的抗体。还提供了可用于检测的核酸分子，它含有上述的多核苷酸中连续的15-1352个核苷酸。在本专利技术的第六方面，提供了模拟、促进、拮抗人BMSC-UbP多肽活性的化合物，以及抑制人BMSC-UbP多肽的表达的化合物。还提供了筛选和/或制备这些化合物的方法。较佳地，该化合物是人BMSC-UbP多肽的编码序列或其片段的反义序列。在本专利技术的第七方面，提供了检测样品中是否存在BMSC-UbP蛋白的方法，它包括将样品与BMSC-UbP蛋白的特异性抗体接触，观察是否形成抗体复合物，形成了抗体复合物就表示样品中存在BMSC-UbP蛋白。在本专利技术的第八方面，提供了一种检测与人BMSC-UbP多肽异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，该方法包括检测细胞样品中编码所述BMSC-UbP多肽表达量。在本专利技术的第九方面，提供了本专利技术多肽和编码序列的用途。例如本专利技术多肽可被用于筛选促进人BMSC-UbP多肽活性的激动剂，或者筛选抑制人BMSC-UbP多肽活性的拮抗剂、或者被用于肽指纹图谱鉴定。本专利技术的人BMSC-UbP蛋白的编码序列或其片段，可被作为引物用于PCR扩增反应，或者作为探针用于杂交反应，或者用于制造基因芯片或微阵列。在本专利技术的第十方面，提供了一种组合物，它含有安全有效量的本专利技术的人BMSC-UbP多肽或其激动剂、拮抗剂以及药学上可接受的载体。这些药物组合物可治疗肿瘤、炎症、神经系统和心血管病等病症。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。附图说明图1是本专利技术的人BMSC-UbP蛋白的结本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的人ＢＭＳＣ－ＵｂＰ多肽，其特征在于，它包含：具有ＳＥＱＩＤＮＯ：２氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘书逊，李楠，曹雪涛，
申请(专利权)人：第二军医大学免疫学研究所，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]