本发明专利技术提供检测和量化血清样品及其它类型样品中的ＰＳＭＡ、ＰＳＭＡ’和其它前列腺标记物用于区别前列腺癌、良性前列腺增生和阴性诊断。还提供了诊断性检测编码细胞溶解产物和其它样品来源中的前列腺标记物核酸（如ｍＲＮＡ）。除多重检测／定量这些基于蛋白质和核酸的标记外，本发明专利技术还包括生物芯片、试剂盒和整合系统。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
版权通知按照37C.F.R.§1.71(e)，申请人指出本公开的一部分包含受版权保护的材料。版权所有人不反对任何人传真复制本专利文件或专利公开，因为它已出现在专利和商标局专利档案或记录中，然而在别的方面却无论怎样都保留所有的版权。与相关申请的相互参照按照35U.S.C.§§119和/或120，及任何其它适用的法规或规则，本申请要求2000年11月20日提交的USSN 60/252，452的利益和优先权，其内容纳入本公开作为参考文献。关于联邦政府资助的研究和开发对专利技术权的声明本专利技术得到国家癌症研究所CA85067和弗吉尼亚前列腺中心的支持。政府对本专利技术拥有一定的权利。专利技术的背景前列腺癌是人类最常见的非皮肤癌。对于非转移型前列腺癌，不象非器官局限型疾病，尤其是如果雄激素剥夺治疗失败，一般尚有有效的治疗方案(Crawford等，(1989)“在前列腺癌中用和不用氟他胺的亮丙瑞林的控制试验”，N.Engl.J.Med.321419-424和Lepor等，(1982)“激素治疗对男性晚期前列腺癌患者生存的影响”J.Urol.128335-340)。因此该病的早期诊断是绝对必要的。目前使用的某些前列腺癌筛查方法是高度侵袭性的，且对早期检测通常缺乏足够的敏感性。例如，在直肠指诊期间，医生们试图通过直肠壁触摸前列腺来发现前列腺异常，如肿块或前列腺肿大。膀胱镜检查是另一种常用的侵袭性前列腺癌诊断技术，该技术对检测早期前列腺癌一般也缺乏足够的敏感性。侵袭性较低的前列腺癌诊断方法包括检测其标记的差异性存在，如各种体液中的前列腺特异性抗原(PSA)生物标记。诊断试验的效果一般取决于其特异性和选择性。对任何条件提高真阳性和真阴性诊断百分率的方法是医学目的所需的。就前列腺癌而论，目前的诊断试验不完全令人满意，因为它们提供了显著数量的假阳性和假阴性结果。例如，虽然目前所有的以PSA为基础的试验广泛认为是一种最佳癌标记，它常常不能正确地区别良性(如良性前列腺增生，BPH)和恶性前列腺疾病，而且可能对一些明显的前列腺癌作出假阴性诊断(Osterling(1991)“前列腺特异性抗原前列腺腺癌的最有用肿瘤标记的批判性评价”，J.Urol.145907-923和Pannek和Partin(1998)“在临床确定的前列腺癌中PSA对分期和预后预测的作用及激离PSA的百分率，Sem.Urol.Oncol.16100-105)。事实上，证据表明改进检测、诊断和预后中没有一种标记是有效的在。其它标记，如前列腺特异性膜抗原(PSMA)例如在原发性和转移性前列腺癌中的差异存在，，表明单检测此标记或与其它标记(如PSA)联合可用来诊断前列腺癌。PSMA是一种750个氨基酸，100Kda跨膜糖蛋白(Israeli等，(1993)“编码前列腺特异性膜抗原的互补DNA的分子克隆”，Cancer Res.53227-30)。例如，通过免疫组织化学，Western印迹和RT-PCR在前列腺组织中检测到高的PSA表达，在如脑、唾液腺、小肠和循环的瘤细胞中检测到较弱的表达，参见例如，Israeli等，(1994)“前列腺特异性膜抗原的表达”，Cancer Res.541807-1811，Israeli等(1994)“灵敏的嵌套式逆转录聚合酶链反应检测循环性前列腺瘤细胞前列腺特异性膜抗原和基于前列腺特异性抗原试验的比较”，Cancer Res.546306-6310，和Wright等(1995)“前列腺特异性膜抗原在正常、良性和恶性前列腺组织中的表达”，Urologic Oncology 118-28。使用酶联免疫吸附试验(ELISA)还检测了各种样品中的PSMA。参见SOKOLOFF等，(2000)“前列腺特异性膜抗原的单克隆双夹心试验在组织、精液和尿中的水平”，Prostate 43150-157。此外，还鉴定到一种截短的PSMA，即PSMA’缺乏N一未端序列或跨膜区(Su等，(1995)“交替剪接的变体或前列腺特异性膜抗原RNA作为潜在性测量或进展的表达率”，CancerRes.551441-1443)。然而，这些技术中没有一种已成功地用来可靠地量化血清中PSMA或PSMA’的量，或者用来确定PSMA或PSMA’水平和前列腺癌或BPH之间的清楚相关性。由于缺乏灵敏的量化体液中PSMA和PSMA’的免疫测定方法，阻碍了确定PSMA和PSMA’作为临床或预后性生物标记的临床用途的努力。本专利技术提供了一种可靠的系统以量化PSMA和/或PSMA’蛋白质或其编码核酸以及说明它们作为前列腺癌和BPH的诊断/预后标记的潜在用途。本专利技术还提供了一个创新性平台以快速和同时检测和测量除PSMA和/或PSMA’以外的其它标记。在完全阅读了以下公开内容后，这些和其它特点将变得显而易见。专利技术概述已发现蛋白质，如PSMA和PSMA’和/或编码这些蛋白质核酸(如mRNA)可作为前列腺癌(CAP)或良性前列腺增生中的标记与阴性诊断进行比较的功能。与阴性诊断相比，这些标记可在各方面、更经常地检测到，不太经常地检测到或有差别地检测到。在患者样品中，单独或联合测定这些标记提供了信息，即诊断医师可相其与可能诊断为前列腺癌、良性前列腺增生或与阴性诊断(如正常或无疾病)相关连。更具体地，PSMA和PSMA’的量高于正常范围与前列腺癌诊断正相关，而PSMA和PSMA’的量低于正常范围与良性前列腺增生或前列腺炎正相关性。这些标记的特征在于其分子量通过层析分离结合质谱可与其它样品组分(如其它蛋白质)相分辨。在较佳实施例中，分辨的方法包括表面增强的激光解吸/电离(SELDI)质谱，其中在向分析物提供其解吸和电离的能源中，质谱探针的表面起着积极的作用，基于亲和力捕获表面增强的LDI免疫测定提供了开发临床诊断试验的明显优点，包括量化除相关核酸以外的PSMA和PSMA’，其它基于蛋白质的前列腺标记的能力，以及同时检测和测量多种PSMA同种型和其它前列腺标记的能力。在一个方面，本专利技术提供了量化样品中PSMA或PSMA’的方法。此方法包括分级分离测试样品，分离含有PSMA/PSMA’的样品和使用气相离子光谱法测定样品中的PSMA/PSMA’。在一个实施例中，此方法包括(a)使样品与基质结合的吸附剂接触，此吸附剂能捕获样品中的PSMA或PSMA’，和(b)用气相离子光谱法量化捕获的PSMA或PSMA’。虽然可任选使用许多不同类型的样品，但优选的样品包括血清和细胞裂解物(如衍生自前列腺组织或细胞)。在一个实施例中，此方法还包括分级分离样品中的生物分子以收集包括PSMA或PSMA’的样品组分，其中该样品组分用作(a)中的样品。例如，使用电泳、透析、过滤、离心等任选地分级分离生物分子。在另一个实施例中，使用高效液相层析、亲和层析、离子交换层析、大小排阻层析等分级分离生物分子。在又一实施例中，使用(i)将样品中的生物分子，分离成一维或二维的点阵列，其中各点含有一个或多个生物分子和(ii)从阵列中选择和取出怀疑含有PSMA或PSMA’的点。任选地，该方法还包括用酶消化所选点中的生物分子然后用气相离子光谱法分析所选点。此外，该方法通常包括与对照比较检测的或定量的PSMA或PSMA’的量。定量检测PSMA或PSMA’的方法还本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种量化样品中ＰＳＭＡ或ＰＳＭＡ’的方法，其特征在于，所述方法包括：（ａ）使样品与至少一种能捕获ＰＳＭＡ或ＰＳＭＡ’的基质结合的吸附剂接触，从而捕获样品中的ＰＳＭＡ或ＰＳＭＡ’；和（ｂ）用气相离子光谱法量化捕获的ＰＳＭＡ或Ｐ ＳＭＡ’。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：GL小赖特，
申请(专利权)人：东弗吉尼亚医学院，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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