CD40L核酸适配体在制备抗aGVHD效应的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了CD40L核酸适配体在制备抗aGVHD效应的药物中的应用，属于生物医学技术领域。本申请的发明专利技术人经过试验发现，C40L核酸适配体在小鼠体内可以长时间循环并不影响其生存，能够预防aGVHD的发生发展，而且促进移植后小鼠的造血重建和免疫力的恢复，在免疫重建优于临床药物ATG。因此，CD40L核酸适配体可以用于制备抗aGVHD效应的药物，既开辟了CD40L核酸适配体新的应用领域，也开辟了新的抗aGVHD效应的药物，具有广阔的应用空间。

【技术实现步骤摘要】
CD40L核酸适配体在制备抗aGVHD效应的药物中的应用
本专利技术涉及CD40L核酸适配体在制备抗aGVHD效应的药物中的应用，属于生物医学

技术介绍
异基因造血干细胞移植(AllogeneicHematopoieticStemCellsTransplantation,allo-HSCT)是治愈白血病等恶性血液病、重症再生障碍性贫血和遗传性血液病的最有效方法。当前制约allo-HSCT疗效的最主要因素是其术后并发症移植物抗宿主病(GraftVersusHostDisease,GVHD)，GVHD不仅影响移植后生存，还严重影响患者的生活质量。依据人类白细胞抗原(HumanLeukocyteAntigen,HLA)相合程度和供者来源等不同，移植后大约30％-80％的受者出现急性GVHD(AcuteGraftVersusHostDisease,aGVHD)；30％-70％存活100天以上的受者可出现慢性GVHD(ChonicGraftVersusHostDisease,cGVHD)。近半数患者直接或间接因GVHD而致死。aGVHD的发生是一个复杂的病理过程，至今没有完全阐述清楚，Ferrara和deeg等人将发病进程总结为三个阶段：1)启动：移植前预处理方案中的放疗或化疗造成组织损伤，诱发炎症介质释放，如细胞因子TNF-a、IL-6、IL-1等；它们不但增强主要组织相容性复合体(MHC)蛋白的表达信号，还促使抗原提呈细胞(APC)的活化及共刺激分子的表达。2)活化与扩增：供者受者活化的抗原提呈细胞同时活化幼稚T细胞，促其分化为效应T细胞、记忆性T细胞、细胞毒性T细胞等。3)效应：活化的供体T细胞迁移到aGVHD靶器官(肝、肺、肠、皮肤等)通过Fas/FasL、穿孔素、颗粒酶及细胞因子攻击受者靶器官。最近一些新的研究表明:中性粒细胞也为GVHD发生发展做贡献，通过裂解趋化因子和产生活性氧族来促进T细胞活化，增强预处理方案引起的组织损伤。有报道说肠道浸润的中性粒细胞水平与肠道GVHD的严重程度息息相关。更有发现证明GVHD的严重等级与靶器官浸润的白细胞数量有关，特别是T细胞(CD4+)和中性粒细胞。迄今，预防和治疗GVHD的工作不断有新的研究发现，各种类型的药物相继出现免疫抑制剂如抗人胸腺免疫球蛋白(ATG)、环磷酰胺等，信号通路阻断剂如硼替佐米、CTLA4-Ig等；还有一些调节表观遗传学、细胞自杀基因疗法等。这些方法多可以改善GVHD，但是彻底治愈的手段还需要进一步研究。大量研究表明CD40-CD40L信号通路是激活T细胞的重要共刺激信号之一，它们相互作用能够刺激抗原提呈细胞，增强其他共刺激信号如B7的表达。1996年，Larsen等率先在小鼠心脏移植模型中发现应用抗CD40L单克隆抗体(monoclonalantibody，mAb)阻断CD40-CD40L信号通路可预防急性排斥反应及自身反应性抗体的产生。Guillonneau等在大鼠的心脏移植中，通过给移植心脏局部注射CD40Ig，发现可以诱导受体移植物长期存活，产生Treg细胞，诱导CD8+CD45RClowTreg的发育，该细胞可以介导移植免疫耐受，确保移植物在受体中长期存活。2000年，Brossart等报道了可溶性CD40L信号传导可以诱导RelB核定位，并抑制IL-10R上调，促使CD83+树突细胞(DC)成熟，考虑阻断CD40-CD40L这条通路可以增强IL-10对DC功能的抑制作用，减低免疫排斥作用。探索至今在啮齿动物中，CD40L单抗阻断CD40/CD40L通路诱导外周和中枢耐受，建立稳定嵌合体诱导持久免疫耐受效果明显。但是，随之而来的非人类灵长类动物肾移植血栓病发症中止了它的应用前景。本专利技术的申请人通过指数富集配体系统进化技术(SELEX)筛选获得高特异性识别、高亲和力结合免疫T细胞表面标志物CD40L的寡聚核苷酸序列，命名为C10或者CD40L核酸适配体。它与抗体功能相似，而且具有免疫原性低不易引起机体免疫反应、分子量低容易穿透组织等自身独特优势。前期研究显示CD40L核酸适配体的通过适应性折叠特异性高亲和力的识别结合不同构造的CD40L蛋白。但没有CD40L核酸适配体可以用于制备抗aGVHD效应的药物的相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的不足，提供CD40L核酸适配体在制备抗aGVHD效应的药物中的应用。本申请的专利技术人经过试验发现，C40L核酸适配体在小鼠体内可以长时间循环并不影响其生存，能够预防aGVHD的发生发展，而且促进移植后小鼠的造血重建和免疫力的恢复，在免疫重建优于临床药物ATG。因此，CD40L核酸适配体可以用于制备抗aGVHD效应的药物，既开辟了CD40L核酸适配体新的应用领域，也开辟了新的抗aGVHD效应的药物，具有广阔的应用空间。本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：CD40L核酸适配体在制备抗aGVHD效应的药物中的应用，所述CD40L核酸适配体具有SEQIDNO1所示核苷酸序列。SEQIDNO1：agcatagagacatctgctatccttggctcaggtccctctctccggtatgcggctccatcctagactccagacttcaggta。本专利技术的原理是：本专利技术通过建立aGVHD小鼠模型，在活体环境内开发CD40L核酸适配体治疗aGVHD的功能，并提供其在活体微环境中的稳定性、功效等数据，发现CD40L核酸适配体可以用于制备抗aGVHD效应的药物，从而为移植免疫提供新的生物标志和治疗策略。本专利技术的CD40L核酸适配体在制备抗aGVHD效应的药物中的应用的有益效果：本申请的专利技术人经过试验发现，C40L核酸适配体在小鼠体内可以长时间循环并不影响其生存，能够预防aGVHD的发生发展，而且促进移植后小鼠的造血重建和免疫力的恢复，在免疫重建优于临床药物ATG。因此，CD40L核酸适配体可以用于制备抗aGVHD效应的药物，既开辟了CD40L核酸适配体新的应用领域，也开辟了新的抗aGVHD效应的药物，具有广阔的应用空间。在上述技术方案的基础上，本专利技术还可以做如下改进。进一步，所述CD40L核酸适配体的剂量为0.125μmol/kg体重。采用上述进一步的有益效果是：本专利技术的实施例中，是用100μl的25μmol/L的CD40L核酸适配体装入胶囊微注泵后植入皮下，每只小鼠的剂量约为2.5nmol。又因为每只小鼠体重约为20g，所以CD40L核酸适配体的剂量大约是0.125μmol/kg体重。本申请的专利技术人经过试验发现，在抗aGVHD效应的药物中采用上述剂量的CD40L核酸适配体，可以有效起到抗aGVHD效应。进一步，所述抗aGVHD效应的药物包括CD40L核酸适配体和药物可接受的载体。采用上述进一步的有益效果是：本专利技术的CD40L核酸适配体可以和药物可接受的载体一起制成抗aGVHD效应的药物。进一步，所述载体为缓释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、吸收促进剂、吸附载本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.CD40L核酸适配体在制备抗aGVHD效应的药物中的应用，所述CD40L核酸适配体具有SEQ ID NO 1所示核苷酸序列。/n

【技术特征摘要】
1.CD40L核酸适配体在制备抗aGVHD效应的药物中的应用，所述CD40L核酸适配体具有SEQIDNO1所示核苷酸序列。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，在所述抗aGVHD效应的药物中，所述CD40L核酸适配体的剂量为0.125μmol/kg体重。


3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗aGVHD效应的药物包括CD40L核酸适配体和药物可接受的载体。


4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述载体为缓释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、吸收促进剂、吸附载体、表面活性剂和润滑剂中的任意一种或两种以上的混合物。

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【专利技术属性】
技术研发人员：杨婷，胡建达，骆晓峰，任金华，张钰鑫，庄悠然，朱浩杰，吴雪琼，陈秋茹，曾雁玲，肖敏，陈少桢，陈永铨，林康昵，陈敏敏，李芊，陈志哲，
申请(专利权)人：杨婷，
类型：发明
国别省市：福建;35