一种蛋白芯片的制备方法技术

一种蛋白质芯片的制备方法，包括如下步骤：Ａ：准备好含有足够量的活化基团活化处理的玻璃芯片片基；Ｂ：将待点样的蛋白质抗原和质控蛋白用点样缓冲液进行梯度稀释；Ｃ：点样设计：按如下表格：Ｅ：点样：按本发明专利技术的图案设计点样，室温下（２５℃）放置３小时；Ｆ：封闭：用含１％ＢＳＡ的ＰＢＳ封闭１小时；Ｇ：干燥：在真空干燥箱内干燥后装于有干燥剂的袋中密封４℃冰箱保存，至少保存６个月。该蛋白芯片的检测结果会以“＋＋＋＋”、“＋＋＋”、“＋＋”、“＋”、“－”的图案显示出来，利于显微镜或扫描仪观察分析。与习用相比，本发明专利技术可实现生物芯片技术的普及化和结果判断方法的简单实用化的目的。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种生物芯片，尤指一种蛋白质芯片的制备方法。
技术介绍
在现阶段，临床检验人员及科研人员都习惯用“+”、“-”的形式来判定免疫学凝集试验和荧光试验的结果。例如在玻片上进行的凝集实验，就以“-”代表试验阴性；“+”代表阳性(一个加号)；“++”代表中阳性(两个加号)；“+++”代表中强阳性(三个加号)；“++++”代表强阳性(四个加号)；从“+”到“++++”的变化代表被检测物质含量的变化，以此来进行标本的半定量分析。同样，在免疫荧光技术中，更常用“+”的形式来判定显微镜下视野中荧光分子的数量。如若满视野均见荧光染色，可判为“++++”，而每个视野只看到一、两个的荧光染色，则判一个“+”；否则为“-”阴性结果。如同一份标本，经两次检测后显色由“+++”变成“+”，表示待检标本中某种抗原或抗体的量由多变少，以利于临床医生判断治疗的效果等。上述方法显示结果的共同点是均由肉眼来主观判定，人为的误差因素较多，不同的观察者，观察的结果差异很大，造成观察结果不客观。生物芯片技术的发展，使原来分多次检测的步骤只需一次即可完成，实现了高通量并行检测的目的，不但效率高，且节约试剂和人力。但就目前来说，生物芯片检测结果的判断均以荧光点的出现与否及荧光分子的数量获取为主要方法，必须依靠需要精密仪器和配套软件方可作出最后的分析，这对大多数没有精密仪器和分析软件的用户来说，无疑是不现实的，且只适用于科研，不适用于临床应用，处理结果属静态分析，而无动态分析的任何因素。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种蛋白质芯片的制备方法，其可实现生物芯片技术的普及化和结果判断方法的简单实用化。本专利技术的目的是这样实现的，其包括如下步骤 A准备好含有足够量的活化基团活化处理的玻璃芯片片基；B准备待点样的蛋白质(抗原)将待点样的蛋白质用点样缓冲液进行梯度稀释；C准备质控蛋白一般要经过多次实验，使其与标记物能够足量而稳定地结合，无论待检样品是阳性还是阴性，均能够出现质控线，当某一浓度点样后在扫描仪或显微镜下能够清楚地观察到即可，此蛋白同样用点样缓冲液进行梯度稀释；D点样设计按如下表格质控蛋白线 (抗原浓度)E点样将竖向点样蛋白和横向质控蛋白分别按上述图案点样于设计好的方格内(1×1cm大小)，室温下(25℃)放置3小时；F封闭用含1％BSA的PBS封闭1小时；G干燥在真空干燥箱内干燥后装于有干燥剂的袋中密封4℃冰箱保存，至少保存6个月。其中，所述的玻璃芯片片基为带有能与蛋白质结合的活性基团的片基。更优的，所述的玻璃芯片片基为醛基片或赖氨酸片。该蛋白芯片的检测结果会以“++++”、“+++”、“++”、“+”、“-”的图案显示出来，利于显微镜或扫描仪观察分析。所述步骤E的点样方式为用人工点样或用生物芯片点样机点样。采用上述制备方法后，将传统的临床医生普遍使用的 “+”的判断方法设计在蛋白质芯片上，并且通过普通显微镜、荧光显微镜、灰度摄相仪及生物芯片扫描分析仪均可分析结果，这种结果是客观的，彻底消除了人为因素造成的判断误差，直接在视野里或显示器上显示“++++”、 “-”的变化符号，临床人员只需登记或打印结果而已，这些变化符号本身就含有量的成分，让实验员只测一次就有一个含量的指标；另外，这种判断方法非常适合于临床疾病治疗过程中的疗效观察和治疗前后的对比分析，结果一目了然，没有模糊之处，具有动态分析的优点；比精密仪器和软件所获取的荧光分子数量等静态的、死板的方法更贴近临床实用，从而达到生物芯片技术的普及化和结果判断方法的简单实用化的目的。附图说明图1为使用本专利技术后芯片的显示结果与传统判断结果及其所代表的临床意义对比示意图。具体实施例方式实施案例最典型的为HP感染和IAA的测定用蛋白芯片。实施例1HP蛋白芯片的制备临床上大多数检测工作需要观察动态的变化过程HP蛋白芯片的制备方法包括以下步骤A准备好含有足够量的活化基团的醛基化玻璃芯片片基；B将HP抗原(如CagA)用点样缓冲液(一般为PH9.5的CB或PH7.4的PBS含40％的甘油)系列稀释，共四个浓度梯度，如1∶20、1∶40、1∶80、1∶160C准备质控蛋白一般要经过多次实验，使其与标记物能够足量而稳定地结合，无论待检样品是阳性还是阴性，均能够出现质控线，当某一浓度点样后在扫描仪或显微镜下能够清楚地观察到即可，此蛋白同样用点样缓冲液进行梯度稀释；D点样设计按如下表格质控蛋白线 (抗原浓度)(注此图案是点在1×1cm的方格内放大后的示意图)E点样将竖向点样蛋白和横向质控蛋白分别按上述图案点样于设计好的方格内(1×1cm大小)，室温下(25℃)放置3小时；F封闭用含1％BSA的PBS封闭1小时；G干燥在真空干燥箱内干燥后装于有干燥剂的袋中密封4℃冰箱保存，至少保存6个月。VacA和Ure-B的芯片制备同上法。消化性溃疡及部分胃癌的发病与幽门螺杆菌(HP)的感染有很大关系，HP感染后患者体内有HP-IgG的存在。临床上一般以根除HP作为治愈的标准。因此在治疗过程中需要监测血中HP-IgG的动态变化，直至HP-IgG消失为准。可以将HP的抗原成分CagA、VacA、Ure-B等以本专利技术的设计方法点样，制成蛋白芯片试剂，来监测相应的抗体变化。如图1所示，A代表芯片的显示结果，B代表传统的判断结果，C代表临床意义，X1表示待测物质含量为四个“+”号(强阳性)，X2表示待测物质含量为三个“+”号(中强阳性)，X3表示待测物质含量为两个“+”号(中阳性)，X4表示待测物质含量为一个“+”号(阳性)，X5表示待测物质含量为阴性；此显示为质控线，质控线在每次情况下均应出现，若不出现，则说明芯片失效。若治疗前HP-IgG测定结果为“++++”，而治疗一段时间后变成“+”说明治疗有效，可继续治疗直至检测为“-”。这样每检测一次即可同时观测HP三种抗原CAgA、VacA、Ure-B的消减情况，以使临床医生能够更好地采取治疗方案。实例2IAA+ICA+GAD三联蛋白芯片的制备IAA+ICA+GAD三联蛋白芯片的制备方法包括以下步骤A准备好含有足够量的活化基团的醛基化玻璃芯片片基；B将点样抗原(如IAA等)用点样缓冲液(一般为PH9.5的CB或PH7.4的PBS含40％的甘油)系列稀释，共四个浓度梯度，如1∶20、1∶40、1∶80、1∶160C准备质控蛋白一般要经过多次实验，使其与标记物能够足量而稳定地结合，无论待检样品是阳性还是阴性，均能够出现质控线，当某一浓度点样后在扫描仪或显微镜下能够清楚地观察到即可，此蛋白同样用点样缓冲液进行梯度稀释；D点样设计按如下表格质控蛋白线 (抗原浓度)(注此图案是点在1×1cm的方格内放大后的示意图)E点样将竖向点样蛋白和横向质控蛋白分别按上述图案点样于设计好的方格内(1×1cm大小)，室温下(25℃)放置3小时；F封闭用含1％BSA的PBS封闭1小时；G干燥在真空干燥箱内干燥后装于有干燥剂的袋中密封4℃冰箱保存，至少保存6个月。ICA和GAD可以用同样方法点样，三者可以放在一个方格内。抗胰岛素抗体(IAA)存在于胰岛素治疗的糖尿病患者血清中，接受胰岛素治疗后，IAA一般在3-6个月出现，9-12个月时达到高峰；如停止用药，则3-9个月内抗体可消减直至消失。停药后一本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蛋白芯片的制备方法，其特征在于：包括有如下步骤：Ａ：准备好含有足够量的活化基团活化处理的玻璃芯片片基；Ｂ：准备待点样的蛋白质（抗原）：将待点样的蛋白质用点样缓冲液进行梯度稀释；Ｃ：准备质控蛋白：一般要经过多次实验 ，使其与标记物能够足量而稳定地结合，无论待检样品是阳性还是阴性，均能够出现质控线，当某一浓度点样后在扫描仪或显微镜下能够清楚地观察到即可，此蛋白同样用点样缓冲液进行梯度稀释；Ｄ：点样设计：按如下表格：１∶２０１∶４０ １∶８０１∶１６０（抗原浓度）质控蛋白线　＊＊＊Ｅ：点样：将竖向点样蛋白和横向质控蛋白分别按上述图案点样于设计好的方格内（１Ｘ１ｃｍ大小），室温下（２５℃）放置３小时；Ｆ：封闭：用含１％ＢＳＡ的ＰＢＳ封闭 １小时；Ｇ：干燥：在真空干燥箱内干燥后装于有干燥剂的袋中密封４℃冰箱保存，至少保存６个月。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：林连成，
申请(专利权)人：林连成，
类型：发明
国别省市：94[中国|深圳]