测定结缔组织生长因子的方法技术

本发明专利技术涉及检测和测量结缔组织生长因子（ＣＴＧＦ）的方法以及诊断和检测多种ＣＴＧＦ相关疾病和紊乱。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及结缔组织生长因子(CTGF)的检测和测量以及各种CTGF相关疾病和紊乱的诊断和检测。
技术介绍
结缔组织生长因子(CTGF)是有丝分裂、趋化和胞外基质诱导因子用于成纤维细胞和其它结缔组织细胞或其它能产生胞外基质的细胞。CTGF多肽和基因序列鉴定自一些种类，包括人。(参见例如Ryseck等，(1991)Cell Growth Differ 2225-233；国际出版号WO 00/27868，2000年5月18日出版；Bradham等，(1991)J Cell Biol1141285-1294)。人CTGF是1047个核苷的可读框编码的349个残基多肽，相对全长cDNA，起始位点在约核苷130且TGA终止位点在约核苷1177。(参见例如，美国专利号5,408,040；GenBank登录号NP001892)病理上，CTGF参与的情况中结缔组织过度生长且胞外基质过度沉积，包括疾病如纤维化和皮肤及主要器官的过度创伤、癌症、全身硬化症、血管发生、动脉硬化、动脉粥样硬化症、糖尿病肾病和肾高血压。(参见例如，美国专利号5,408,040；国际出版号WO 01/15729，2001年3月8日出版)此外，CTGF片段与一些生物活性相关。(参见例如，国际出版号WO 00/36939，2000年10月12日出版；国际出版号WO 00/36936，2000年6月22日出版；美国专利号5,876,730；Brigstock等，(1997)J Biol Chem 27220275-20282；Ball等，(1998)Biol Reprod59828-835)尽管存在关于CTGF及其不同生物活性和疾病相关联的知识，没有可靠检测区别和不同于CTGF片段的CTGF的方法和测量确定生物样品中CTGF和CTGF片段水平的方法。例如，目前检测CTGF的方法依赖肝素分离和浓缩CTGF多肽，或包括不区分多种CTGF片段的ELISA试验。(参见例如，Sato等，(2000)J Rheumatology27149-153；Tamanti等，(1998)Biochem Biophys Res Commun 251748-752；和Riser等，(2000)J Am Soc Nephrol 1125-38)因此，需要有助于检测、测量和测量生物样品中CTGF和多种CTGF形式如CTGF片段水平的试验系统。具体的是，需要选择性鉴定不同于CTGF的具体CTGF片段的方法，可鉴定和测量不同疾病状态中包含的具体CTGF片段。专利技术概述本文描述了检测CTGF和CTGF片段的方法，测量CTGF和CTGF片段水平的方法，诊断、确定预测和监控多种CTGF相关情况、疾病或紊乱疗效的方法。一方面，本专利技术提供了检测CTGF的方法。在一个实施方案中，所述方法包括检测样品中CTGF N-末端片段的存在，其中CTGF N-末端片段不同于CTGF C-末端片段和CTGF。在另一个实施方案中，所述方法包括检测样品中CTGF C-末端片段的存在，其中CTGF C-末端片段不同于CTGF N-末端片段和CTGF。在另外一个实施方案中，在另一个实施方案中，所述方法包括检测样品中CTGF的存在，其中CTGF不同于CTGF N-末端和C-末端片段。专利技术进一步提供测量CTGF水平的方法。一方面，所述方法包括测量样品中CTGFN-末端片段的水平，其中CTGF N-末端片段不同于CTGF C-末端片段和CTGF。另一方面，所述方法包括测量样品中CTGF C-末端片段的水平，其中CTGF C-末端片段不同于CTGF N-末端片段和CTGF。另外一方面，所述方法包括测量样品中CTGF的水平，其中CTGF不同于CTGF N-末端和C-末端片段。在一些实施方案中，所述方法包括使样品接触第一种特异性结合CTGF区域的试剂、分离试剂、测量结合的CTGF的水平。此外，所述方法可进一步包括加入第二试剂，它选自特异性结合第一试剂的第二试剂或特异性结合与第一试剂结合区域不同的CTGF区域的第二试剂、除去未结合的第二试剂、测量结合的第二试剂的量。在具体实施方案中，第一和第二试剂是抗CTGF抗体，结合CTGF、CTGF N-末端片段或CTGF C-末端片段的不同区域。在其它具体实施方案中，第一或第二试剂是任选连接载体的肝素。本专利技术还涉及诊断CTGF相关疾病的方法。在一个实施方案中，所述方法包括获得样品、测量样品中CTGF N-末端片段的水平并与CTGF N-末端片段的标准水平比较，其中样品中CTGF N-末端片段量增加或减少指示CTGF相关疾病的存在。在另一个实施方案中，所述方法包括获得样品、测量样品中CTGF C-末端片段的水平并与CTGF C-末端片段的标准水平比较，其中样品中CTGF C-末端片段量增加或减少指示CTGF相关疾病的存在。在另外一个实施方案中，所述方法包括获得样品、测量样品中CTGF的水平并与CTGF的标准水平比较，其中样品中CTGF量增加或减少指示CTGF相关疾病的存在。例如，样品中CTGF N-末端片段增加也许指示纤维化疾病如肾纤维化、肝纤维化、心脏纤维化、硬皮病和炎性关节疾病。还提供了预测CTGF相关疾病的方法。一方面，所述方法包括获得样品、检测样品中CTGF N-末端片段或CTGF C-末端片段或CTGF的水平，与标准水平比较，其中确定水平和标准水平间的差异指示CTGF相关疾病的预测。例如，样品中相较标准更高水平的CTGF N-末端片段可指示情况较差的预测，如癌症、糖尿病、器官移植、腹膜透析或心肌梗塞。还提供了监控CTGF相关疾病的方法。在一个实施方案中，所述方法包括在时间第一点从受试者中获得第一个样品，在时间第二点从受试者中获得第二个样品，比较第一个样品中CTGF N-末端片段的水平和第二个样品中CTGF N-末端片段的水平，其中第一个样品中CTGF N-末端片段水平和第二个样品中CTGF N-末端片段水平间的差异指示CTGF相关疾病的进展。同样考虑类似的方法，其中比较第一个和第二个样品中CTGF C-末端片段的水平或CTGF的水平。本专利技术还涉及监控治疗CTGF相关疾病的疗法功效的方法。在多种实施方案中，所述方法包括从受试者获得样品，受试者患CTGF相关疾病并接受对此疾病的`治疗；测量样品中CTGF或CTGF N-末端片段或CTGF C-末端片段的水平；比较CTGF或CTGF N-末端片段或CTGF C-末端片段的水平和标准水平，其中样品中确定的水平和标准水平间的差异指示CTGF相关疾病疗法的疗效。另一方面，标准水平通过测量样品中CTGF、CTGF N-末端片段或CTGF C-末端片段的水平来确定，样品在较早时间点或治疗开始前从相同受试者获得。在任何前述方法中，样品可获自任何来源。一方面，样品获自哺乳动物，在一个具体实施方案中哺乳动物是人。在一个实施方案中，样品可以是体液如尿或血浆。此外，检测或测量CTGF的方法可结合另外标记的检测和测量以进一步确定对受试者情况的诊断、预测等。例如，测量尿中清蛋白分泌率与测量CTGF N-末端片段结合，可进一步确定肾疾病。专利技术进一步提供用于检测CTGF的存在或测量CTGF水平的试剂盒。所述试剂盒可用于例如诊断CTGF相关疾病。在一些实施本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测量样品中含ＣＴＧＦＮ－末端片段的多肽水平的方法，其特征在于，所述方法包括：（ａ）在适于结合的条件下使样品接触特异性结合ＣＴＧＦＮ－末端片段区域的第一试剂；（ｂ）分离第一试剂；和（ｃ）测量结合第一试剂的多肽水平。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：SL维茨，WR尤辛格，
申请(专利权)人：法布罗根股份有限公司，
类型：发明
国别省市：US[]