一种靶向PSCA的嵌合抗原受体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种靶向PSCA的嵌合抗原受体及其应用，所述嵌合抗原受体包括抗原结合结构域、跨膜结构域和信号转导结构域；所述抗原结合结构域包括抗PSCA单链抗体；所述信号转导结构域包括OX40、CD3ζ和TLR1。本发明专利技术的嵌合抗原受体不仅对PSCA阳性肿瘤细胞具有靶向作用，而且可以高效激活T细胞、消除调节性T细胞免疫抑制作用、促进记忆性T细胞的形成，构建的表达嵌合抗原受体的T细胞具有显著增强的肿瘤细胞杀伤能力。

【技术实现步骤摘要】
一种靶向PSCA的嵌合抗原受体及其应用
本专利技术属于生物医药
，涉及一种靶向PSCA的嵌合抗原受体及其应用。
技术介绍
嵌合抗原受体T细胞亦称为CAR-T细胞，是利用基因工程技术将特异性识别抗原的单链可变区(scFv)与T细胞共刺激和激活信号(如CD28、4-1BB、OX40、CD3ζ等)相串联，表达于T细胞上，从而赋予T细胞特异性识别靶标蛋白的功能，并针对表达靶标蛋白的细胞产生杀伤作用。将制备好的CAR-T细胞回输到肿瘤患者体内，通过发挥CAR-T细胞靶向特定肿瘤抗原的功效，从而达到消除肿瘤细胞的目的。近年来，随着肿瘤免疫学理论和临床技术的发展，嵌合抗原受体T细胞疗法(ChimericantigenreceptorT-cellimmunotherapy，CAR-T)成为最有发展前景的肿瘤免疫疗法之一。目前，CAR-T细胞疗法已经广泛应用于治疗B细胞恶性肿瘤，靶向CD19的CAR-T细胞是CAR-T疗法治疗B细胞恶性肿瘤的先驱，为治疗B细胞恶性肿瘤提供了有效方案。然而，CAR-T疗法始终面临着肿瘤复发、抗药的问题。因此，有必要对嵌合抗原受体进行进一步改进，不仅提高嵌合抗原受体对肿瘤抗原的靶向结合能力，而且提高嵌合抗原受体对T细胞的活性激活功能。
技术实现思路
针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术提供了一种靶向PSCA的嵌合抗原受体及其应用，所述嵌合抗原受体不仅对PSCA阳性肿瘤细胞具有靶向作用，而且可以高效激活T细胞，在治疗实体瘤方面具有广阔的前景。为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：第一方面，本专利技术提供了一种嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包括抗原结合结构域、跨膜结构域和信号转导结构域；所述抗原结合结构域包括抗PSCA单链抗体；所述信号转导结构域包括OX40、CD3ζ和TLR1。本专利技术中，采用抗PSCA单链抗体作为抗原结合结构域，与信号传导结构域连接后构建嵌合抗原受体，对肿瘤细胞具有明显的靶向作用，对T细胞具有高效的激活作用。优选地，所述抗原结合结构域包括SEQIDNO:1所示的氨基酸序列；SEQIDNO:1：DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVRFIHWYQQKPGKAPKRLIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWSSSPFTFGQGTKVEIKGSTSGGGSGGGSGGGGSSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDYYIHWVRQAPGKGLEWVAWIDPENGDTEFVPKFQGRATISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCKTGGFWGQGTLVTVSSEPKSCDKTHTCPPC。优选地，所述跨膜结构域包括CD28和/或CD8α。优选地，所述嵌合抗原受体还包括信号肽。优选地，所述信号肽包括CD8α信号肽。优选地，所述嵌合抗原受体由CD8α信号肽、抗PSCA单链抗体、CD8α、OX40、CD3ζ和TLR1串联组成。优选地，所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示；SEQIDNO:2：MALPVTALLLPLALLLHAARPDIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVRFIHWYQQKPGKAPKRLIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWSSSPFTFGQGTKVEIKGSTSGGGSGGGSGGGGSSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDYYIHWVRQAPGKGLEWVAWIDPENGDTEFVPKFQGRATISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCKTGGFWGQGTLVTVSSEPKSCDKTHTCPPCTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCRDQRLPPDAHKPPGGGSFRTPIQEEQADAHSTLAKIRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRNIPLEELQRNLQFHAFISYSGHDSFWVKNELLPNLEKEGMQICLHERNFVPGKSIVENIITCIEKSYKSIFVLSPNFVQSEWCHYELYFAHHNLFHEGSNSLILILLEPIPQYSIPSSYHKLKSLMARRTYLEWPKEKSKRGLFWANLRAAINIKLTEQAKK。第二方面，本专利技术提供了一种编码基因，所述编码基因编码第一方面所述的嵌合抗原受体。优选地，所述编码基因包括抗PSCA单链抗体编码序列。优选地，所述编码基因还包括CD8α信号肽编码序列、CD8α编码序列、OX40编码序列、CD3ζ编码序列和TLR1编码序列。第三方面，本专利技术提供了一种表达载体，所述表达载体为含有第二方面所述的编码基因的慢病毒载体。第四方面，本专利技术提供了一种重组慢病毒，所述重组慢病毒为转染有第三方面所述的表达载体和辅助质粒的哺乳细胞。第五方面，本专利技术提供了一种嵌合抗原受体T细胞，所述嵌合抗原受体T细胞表达第一方面所述的嵌合抗原受体。优选地，所述嵌合抗原受体T细胞的基因组中整合有第二方面所述的编码基因。优选地，所述嵌合抗原受体T细胞包括第三方面所述的表达载体和/或第四方面所述的重组慢病毒。第六方面，本专利技术提供了一种第五方面所述的嵌合抗原受体T细胞的制备方法，所述方法包括将第一方面所述的嵌合抗原受体的编码基因导入T细胞的步骤。第七方面，本专利技术提供了一种第一方面所述的嵌合抗原受体、第二方面所述的编码基因、第三方面所述的表达载体、第四方面所述的重组慢病毒或第五方面所述的嵌合抗原受体T细胞在制备疾病治疗药物中的应用。优选地，所述疾病包括肿瘤。优选地，所述肿瘤包括肝癌、肺癌、乳腺癌、胃癌、肾母细胞瘤、神经胶质瘤、神经母细胞瘤、黑色素瘤、鼻咽癌、间皮质瘤、胰岛细胞瘤、视网膜母细胞瘤、胰腺癌、子宫肌瘤、宫颈癌或甲状腺癌中的任意一种或至少两种的组合。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：(1)本专利技术构建的嵌合抗原受体采用抗PSCA单链抗体作为抗原结合结构域，与信号传导结构域OX40、CD3ζ和TLR1连接后构建嵌合抗原受体，对肿瘤细胞具有明显的靶向作用，对T细胞具有显著提高的激活活性，消除调节性T细胞免疫抑制作用、促进记忆性T细胞的形成；(2)本专利技术构建的表达嵌合抗原受体的T细胞对PSCA阳性肿瘤细胞具有显著的清除杀伤作用。附图说明图1为WT、αPSCA-CAR-T、αPSCA-CAR-T1-T对K562和K562-PSCA的杀伤效率；图2为WT、αPSCA-C本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体包括抗原结合结构域、跨膜结构域和信号转导结构域；/n所述抗原结合结构域包括抗PSCA单链抗体；/n所述信号转导结构域包括OX40、CD3ζ和TLR1。/n

【技术特征摘要】
1.一种嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体包括抗原结合结构域、跨膜结构域和信号转导结构域；
所述抗原结合结构域包括抗PSCA单链抗体；
所述信号转导结构域包括OX40、CD3ζ和TLR1。


2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述抗原结合结构域包括SEQIDNO:1所示的氨基酸序列。


3.根据权利要求1或2所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述跨膜结构域包括CD28和/或CD8α；
优选地，所述嵌合抗原受体还包括信号肽；
优选地，所述信号肽包括CD8α信号肽。


4.根据权利要求1-3任一项所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体由CD8α信号肽、抗PSCA单链抗体、CD8α、OX40、CD3ζ和TLR1串联组成；
优选地，所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。


5.一种编码基因，其特征在于，所述编码基因编码权利要求1-4任一项所述的嵌合抗原受体；
优选地，所述编码基因包括抗PSCA单链抗体编码序列；
优选地，所述编码基因还包括CD8α信号肽编码序列、CD8α编码序列、OX40编码序列、CD3ζ编码序列和TLR1编码序列。


6.一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤朝阳，秦乐，吴迪，邓殷健，吴海鹏，王翠花，冯世忠，冯嘉昆，其他发明人请求不公开姓名，
申请(专利权)人：广东昭泰体内生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44