检测人类受试者中的毛滴虫感染的试剂盒制造技术

披露了一种检测受试者阴道毛滴虫感染的方法和试剂盒。在该方法中，从受试者中获得体液样本，比如阴道拭子样品或尿液，使之与特异性针对毛滴虫粘附素多肽的抗体接触，如果受试者受到毛滴虫感染，则形成抗体粘附素多肽复合体。复合体存在或不存在分别证实了受试者毛滴虫感染的存在、缺乏存在或缺乏，如果是阴道拭子样品，可靠性至少为８０％，如果是尿液样品，可靠性至少是４０％。优选的测试试剂盒使用了干燥条、夹心测定法、模式。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
专利说明毛滴虫检测的方法和装置 专利
本专利技术涉及一种检测毛滴虫感染的免疫测定方法和试剂盒。 参考文献Alderete et al.，Infect.Immun.，40284-291，1983Alderete et al.，Infect.Immun.，49463-468，1985.Alderete et al.，Infect.Immun.，5270-75，1986.Alderete et al.，Infect.Immun.，53285-293，1986.Alderete et al.，Infect.Immun.，53697-699，1986.Alderete et al.，Infect.Immun.，551037-1041，1987.Alderete and Garza，Infection and Immunity，56(1)28-33，1988.Alderete and Garza，Infection and Immunity，56(10)2256-2562，1988.Alonzo and Pepe，Statistics in Medicine，182987-3000，1999.Arroyo et al.，Molecular Microbiology，6(7)853-862，1992.Arroyo et al.，Arch Med Res 26(4)36-369，1995.Arroyo et al.，Molecular Microbiology，7(2)299-309，1993.Cuatrecasas，J.Biol.Chem.，2453059，1970.Lehker et al.，Journal of Exp.Med.，174311-318，1991.van Der Schee C.，et al.J.Clin Microbiol.1999 Dec37(12)4127-30Wasserheit，J.N.，Sex.Trans.Dis.，1961-77，1992.Yap et al.，Genitouria.Med.，71402-404，1995.Zhang et al.，Ann.Epidemoil.，5325-332，1995.
技术介绍
毛滴虫是感染人和动物的原生动物寄生虫。存在15种以上的毛滴虫。阴道毛滴虫(T.vaginalis)是能引起男性和女性滴虫病病症(或”trichomonosis”或”trich”)的毛滴虫的一种。该寄生虫通过性传播并且是目前世界上最普遍的非病毒性性传播疾病(STD)动因。据估计，在美国每年有5至8百万妇女患滴虫病，有25％的性活跃期妇女可以在任何特定的时间被感染。 在男性中，据估计滴虫病占非衣原体、非淋球菌尿道炎的17％。在妇女中，临床症状多种多样，从无症状携带到症状明显的阴道炎；并且感染能够不确定地持续。严重的症状包括带有恶臭排泄物的腹痛并伴随有疼痛和不适感，类似于阴道酵母菌感染。男性则多倾向于平均4个月持续无症状状态，而在受感染的男子中有文献记载的疾病包括尿道炎、前列腺炎、阴茎头包皮炎以及其他疾病。 人受到毛滴虫感染会导致严重的健康后果。毛滴虫分泌一种能降解阴道抗体、保护性细胞层和免疫应答细胞的蛋白酶，因而增加了受感染妇女对其他性传播疾病的易感性。研究显示，感染阴道毛滴虫的女性患HIV的危险是原来的2-10倍，男性精子中HIV和毛滴虫均为阳性的比例是HIV为阳性的6倍，因此增加了感染同伴的可能性(Wasserheit，1992)。并且，毛滴虫感染增加了患子宫颈癌的危险，并且能反过来影响受精和怀孕(Yap et al.，1995；Zhang etal.1995)。幸运的是，如果寄生虫感染能够被成功的检测的话，则在多数病人能够得到治疗。 目前，毛滴虫病的诊断依赖于对从女性阴道腔或男子尿道中提取的活体组织进行的检测和形态学识别。识别通过显微检测盐水湿涂片(Mount)标本，直接目测活生物体而完成。尽管当阳性时高度特异，在无症状或轻微症状患者中或之前的24小时内进行过冲洗的妇女中，湿涂片法检测常常为阴性。湿涂片显微镜法的整体灵敏性或可靠性为58％(Weise et al.)，并且可低至30％。湿涂片显微镜法也可以尝试使用尿液样品，然后用离心方式浓缩沉淀中的所有毛滴虫，然后重悬收集的毛滴虫并检测。当用湿涂片显微镜法对尿液样品进行检测时，效率极低，灵敏性低至7％(与培养法的40％相比较)(vander schee c.，et al.j.clin microbial.1999 dec；37(12)4127-30)。此外，对于任何描述过的样品类型，使用湿涂片显微镜法的检测是主观的、烦琐的、费时的，并且需要经过专门训练的人员参与。 通过泌尿生殖器样品的培养可以提高被检测的数量。遗憾的是，该步骤需要几天才能完成(典型的为2-5天)并且必须在专门的实验室和由受过培训的人员进行操作。此外，这两种方法都要求样品中的寄生虫在被检测之前是活体，因此限制了某些样品类型的适宜性。比如，尿液对于以培养为基础的毛滴虫诊断就是不适当的样品培养基，尽管比起湿涂片法具有更高的敏感度(Mohamed etal.Sex.Transmitted Infect.，2001.77(1)78-9)。利用PCR，人们进行了诸多尝试来改进对尿液以及其它样品类型中毛滴虫的诊断技术。尽管PCR比起湿涂片或培养法具有更具潜力的灵敏性(根据上述文献为87％)，但在什么样的引物序列是毛滴虫特异方面仍然缺乏科学的一致性(PCR不是FDA允许的诊断方法)。并且，在差异样本和临床污染样本中的假阳性问题也阻碍了该技术的应用。高度扩增的样本可以提供阳性结果但并非指示了实际的感染，而是当作代表了先前感染的痕量。此外，PCR是具有许多操作和程序控制的高技术工序，需要昂贵的设备，并且不能进行即时(point of care)诊断；所有这些因素妨碍其作为一种对毛滴虫进行实际诊断方法的适宜性。 一种通过溶解样品中的微生物并且释放出其中的核苷酸的毛滴虫感染检测方法已经被披露。毛滴虫的存在通过将释放的核苷酸同探针杂交而得以确定。该方法涉及大量操作和贵重的仪器设备，其灵敏度低于湿涂片显微镜法。 毛滴虫的高频感染与不能及时处理导致不利后果的可能性相结合，解释了对于快速、灵敏和精确诊断测试毛滴虫感染以及评价治疗效果能力的需求。诊断测试方法应该适用于各种被估计包含毛滴虫样品，无论该样品是否包含活体，尤其是，应该允许对尿液(取样自男子和女性)和阴道拭子(Swab)样品进行检测。此外，该方法应该具有高度可靠性，如对感染个体产生阳性结果。 专利技术概述 一方面，本专利技术包括一种检测受试者阴道毛滴虫感染的方法。在实践该方法的过程中，获得受试体的体液样品，如尿液或阴道拭子样品，使之与针对毛滴虫粘附素多肽的特异性抗体接触，如果该受试体感染了毛滴虫，则会形成抗体-粘附素多肽复合体。当临床样品是阴道拭子样品，则以复合体存在或不存进行的检测具有至少80％的可靠性，有代表性的可靠性可达90％，当临床样品是尿液的可靠性大于40％。 更广泛地讲，本专利技术可用于检测哺乳动物的毛滴虫感染，如母牛或其他家养动物。例如，母牛中的Tt.foetus感染，使用抗阴道毛滴虫粘附素蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测人类受试者阴道毛滴虫感染的方法，其对于女性受试者的阴道拭子样品的可靠性大于８０％，对于女性或男性受试者尿液样品的可靠性超过４０％，所述方法包括，从受试者获得阴道拭子样品或尿液样品，将样品与特异性抗毛滴虫粘附素多肽的抗 体接触，通过上述的接触，如果受试者受到毛滴虫感染则会形成抗体－粘附素多肽复合体，和检测上述的复合体的存在或缺乏，从而以特定的可靠性分别检测受试者毛滴虫感染的存在或缺乏。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：JP阿尔德雷特，PC卡斯特拉，
申请(专利权)人：埃克森诺托普诊断公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]