放射性核素靶向乳腺癌前哨淋巴结转移示踪剂及制备方法技术

本发明专利技术提供了放射性核素靶向乳腺癌前哨淋巴结转移示踪剂及制备方法，该示踪剂包括细胞角蛋白19(CK19)单抗和高锝，高锝通过2‑巯基乙醇进行反应偶联在CK19单抗上。其制备方法为：将CK19单抗与2‑巯基乙醇进行混合反应，然后加入小分子右旋糖苷混合均匀后，加入葡庚糖酸钠、氯化亚锡、高锝酸钠进行反应，采用PD‑10柱分离获得。采用本发明专利技术制备的示踪剂能够通过在体检测前哨淋巴结的转移状况能够有效减少患者的局部创伤，为外科医生提供有利的决策依据，缩短患者的手术时间。

【技术实现步骤摘要】
放射性核素靶向乳腺癌前哨淋巴结转移示踪剂及制备方法
本专利技术属于生物医药
，涉及放射性核素靶向乳腺癌前哨淋巴结转移示踪剂及制备方法。
技术介绍
公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。目前，检测乳腺癌前哨淋巴结的转移状况均需要通过前哨淋巴结示踪剂对前哨淋巴结进行定位后再将其取出，对离体的前哨淋巴结进行病理分析、分子病理检查或者细胞学检测。然而，本专利技术专利技术人研究发现，前哨淋巴结示踪剂(美兰、核素和荧光)只有定位前哨淋巴结的作用，而没有提示是否存在转移灶的作用，离体前哨淋巴结的组织病理检查和细胞学检查将大大增加病理科医生的工作量，也将大大增加患者的医疗经济支出；另外，前哨淋巴结的术中快速冰冻病理检查和术后常规病理诊断都需要较长的时间，这将会极大延长手术时间并影响外科医生的手术决策。因此，目前临床实践中急需要一种能够靶向定位乳腺癌前哨淋巴结转移的在体检测方法。
技术实现思路
为了解决现有技术的不足，本专利技术的是提供放射性核素靶向乳腺癌前哨淋巴结转移示踪剂及制备方法，采用本专利技术制备的示踪剂能够通过在体检测前哨淋巴结的转移状况能够有效减少患者的局部创伤，为外科医生提供有利的决策依据，缩短患者的手术时间。为了实现上述目的，本专利技术的技术方案为：一方面，一种放射性核素靶向乳腺癌前哨淋巴结转移示踪剂，包括细胞角蛋白19(CK19)单抗和高锝，高锝通过2-巯基乙醇进行反应偶联在CK19单抗上。另一方面，一种放射性核素靶向乳腺癌前哨淋巴结转移示踪剂的制备方法，将CK19单抗与2-巯基乙醇进行混合反应，然后加入小分子右旋糖苷混合均匀后，加入葡庚糖酸钠、氯化亚锡、高锝酸钠进行反应，采用PD-10柱分离获得。本专利技术的有益效果为：本专利技术将靶向淋巴结转移灶的CK19单抗与前哨淋巴结放射性核素示踪剂99mTc结合，当该示踪剂在乳腺癌患者体内注射后就会通过引流淋巴管引流至区域淋巴系统，示踪剂中的CK19单抗与淋巴结转移灶中肿瘤细胞表面的CD19分子特异性结合，同时放射性核素也定位到该前哨淋巴结内部，通过放射性伽马线探测仪对该区域进行探测时就能够发现放射性浓集的淋巴结，从而实现在体确定前哨淋巴结转移的目的，如果提示为前哨淋巴结无转移那么将会豁免腋窝的任何有创操作。通过在体检测前哨淋巴结的转移状况能够有效减少患者的局部创伤，为外科医生提供有利的决策依据，缩短患者的手术时间，大大减轻病理科医生的工作量，降低患者的医疗支出。附图说明构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。图1为本专利技术实施例1的示踪剂99mTc-CK19单抗制备过程、与前哨淋巴结结合及进行乳腺癌腋窝前哨淋巴结转移检测的示意图；图2为本专利技术实施例中99mTc-CK19单抗中单抗分子完整性及免疫活性检测的结果图，P为蛋白质分子量标记，M为利妥昔单抗，1为99mTc-CK19单抗；图3为采用本专利技术实施例中99mTc-CK19单抗中单抗分子术前SPECT显像图，发现也为核素浓集的前哨淋巴结；图4采用本专利技术实施例中99mTc-CK19单抗中单抗分子术中快速病理检查结构图，确诊前哨淋巴结查见癌转移。具体实施方式应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本专利技术提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本专利技术的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。鉴于现有前哨淋巴结示踪剂没有提示是否存在转移灶的作用的，本专利技术提出放射性核素靶向乳腺癌前哨淋巴结转移示踪剂及制备方法。本专利技术的一种典型实施方式，提供了一种放射性核素靶向乳腺癌前哨淋巴结转移示踪剂，包括细胞角蛋白19(CK19)单抗和高锝，高锝通过2-巯基乙醇进行反应偶联在CK19单抗上。本专利技术中以2-巯基乙醇作为偶联剂将高锝偶联在CK19单抗上，其中可以作为偶联剂的不仅包括2-巯基乙醇，还包括γ-氨丙基三乙氧基硅烷、氯化铜，然而，仅有2-巯基乙醇能够将高锝与CK19单抗偶联。本专利技术的另一种实施方式，提供了一种放射性核素靶向乳腺癌前哨淋巴结转移示踪剂的制备方法，将CK19单抗与2-巯基乙醇进行混合反应，然后加入小分子右旋糖苷混合均匀后，加入葡庚糖酸钠、氯化亚锡、高锝酸钠进行反应，采用PD-10柱分离获得。该实施方式的一些实施例中，CK19单抗与2-巯基乙醇的摩尔比为1:1450～1550。该实施方式的一些实施例中，CK19单抗与2-巯基乙醇的反应条件为3～5℃避光反应。该实施方式的一些实施例中，CK19单抗与2-巯基乙醇反应的时间为0.5～1.5小时。该实施方式的一些实施例中，CK19单抗与小分子右旋糖苷的质量比为1:35～45。该实施方式的一些实施例中，加入小分子右旋糖苷混合后进行冷冻干燥获得冻干品。制成冻干品更容易储存备用，而且冻干品的化学稳定性比溶液更好。小分子右旋糖苷是葡萄糖赋形剂，在冻干品制备过程中起支撑作用。在一种或多种实施例中，向冻干品加入PBS溶液混合后，加入葡庚糖酸钠、氯化亚锡、高锝酸钠进行反应。在一种或多种实施例中，冻干品与PBS溶液的加入比例为1:0.09～0.11，g：L。在一种或多种实施例中，冻干品与葡庚糖酸钠、氯化亚锡、高锝酸钠的添加比例为1:0.9～1.1:4.5～5.5:0.9～1.1，mg：mg：μg：mL，高锝酸钠的放射性活度为0.9～1.1mCi。为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本专利技术的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本专利技术的技术方案。实施例1(1)配制CK19单抗与2-巯基乙醇的混合溶液。(2)制备CK19单抗、2-巯基乙醇、小分子右旋糖苷的冻干品；(3)将放射性99mTc标记到CK19单抗上制备新型示踪剂99mTc-CK19单抗；(4)检测99mTc-CK19单抗的放射性化学纯度，并检测CK19单抗蛋白分子完整性及免疫活性；(5)将99mTc-CK19单抗注射于乳腺癌患者患侧皮下组织内，通过放射性伽马线探测仪连续在体检测同侧腋窝区域淋巴结的放射性浓集情况，根据腋窝淋巴结放射性浓集情况判断淋巴结中有无乳腺癌转移灶。如果发现放射性浓集淋巴结则说明该淋巴结存在转移，那么需要进一步的腋窝处理(腋窝淋巴结清扫或放疗)；如果未发现放射性浓集淋巴结则说明腋窝不存在转移淋巴结，那么就无需进一步的腋窝处理。原理如图1所示。步本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种放射性核素靶向乳腺癌前哨淋巴结转移示踪剂，其特征是，包括CK19单抗和高锝，高锝通过2-巯基乙醇进行反应偶联在CK19单抗上。/n

【技术特征摘要】
1.一种放射性核素靶向乳腺癌前哨淋巴结转移示踪剂，其特征是，包括CK19单抗和高锝，高锝通过2-巯基乙醇进行反应偶联在CK19单抗上。


2.一种放射性核素靶向乳腺癌前哨淋巴结转移示踪剂的制备方法，其特征是，将CK19单抗与2-巯基乙醇进行混合反应，然后加入小分子右旋糖苷混合均匀后，加入葡庚糖酸钠、氯化亚锡、高锝酸钠进行反应，采用PD-10柱分离获得。


3.如权利要求2所述的放射性核素靶向乳腺癌前哨淋巴结转移示踪剂的制备方法，其特征是，CK19单抗与2-巯基乙醇的摩尔比为1:1450～1550。


4.如权利要求2所述的放射性核素靶向乳腺癌前哨淋巴结转移示踪剂的制备方法，其特征是，CK19单抗与2-巯基乙醇的反应条件为3～5℃避光反应。


5.如权利要求2所述的放射性核素靶向乳腺癌前哨淋巴结转移示踪剂的制备方法，其特征是，CK19单抗与2-巯基乙醇反应的时间为0.5～1.5小时。


6.如权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：丛斌斌，王永胜，曹晓珊，孙晓蓉，刘治国，高永生，李孟柯，刘雁冰，赵桐，周鹏鹏，吴爽，梁颖，
申请(专利权)人：王永胜，
类型：发明
国别省市：山东;37