山核桃内果皮提取物在制备抗卵巢癌产品中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种山核桃内果皮提取物在制备抗卵巢癌产品中的应用，山核桃内果皮提取物由如下步骤制备得到：步骤(1)、选取充分成熟、外表光滑无裂缝且无异味的山核桃，将山核桃去壳、剥离山核桃内果皮；步骤(2)、将山核桃内果皮粉碎，得到山核桃内果皮粉；步骤(3)、将山核桃内果皮粉用甲醇水溶液提取，得到甲醇提取物；步骤(4)、将甲醇提取物过滤、干燥，即得到具有抗卵巢癌活性的山核桃内果皮提取物。本发明专利技术提取物表现出了对人卵巢癌细胞：OVCAR‑3更高的选择毒性，具有良好的抗癌活性。可以预期发展为抗卵巢癌产品，为山核桃赋予了新的开发和利用价值，对推动山核桃产业和医药工业的发展具有积极作用。

【技术实现步骤摘要】
山核桃内果皮提取物在制备抗卵巢癌产品中的应用
本专利技术涉及植物有效成分提取、生物医药
，具体涉及一种山核桃内果皮提取物在制备抗卵巢癌产品中的应用。
技术介绍
卵巢癌是发病率位于第二的女性生殖恶性肿瘤，其病死率在妇科肿瘤中居于首位。在全球范围内，每年约有23万人被确诊为卵巢癌，每年造成15万人死亡(S.Lheureux,M.Braunstein,A.M.OzaEpithelialovariancancer:evolutionofmanagementintheeraofprecisionmedicine，CACancerJ.Clin.,69(2019),pp.280-304.)。目前，卵巢癌治疗主要采用手术治疗和化疗为主，效果有限，患者5年和10年生存率仅为32％和15％(KimJ,ParkEY,KimO,SchilderJM,CoffeyDM,ChoCH,etal.Celloriginsofhigh-gradeserousovariancancer.Cancers2018；10(11):pii:E433.)。原因在于虽然绝大部分卵巢癌患者初期使用以铂类药物为主的化学治疗可以取得良好效果，但后期往往会由于耐药性而复发(FerreroA,DittoA,GiordaG,GadducciA,GreggiS,DanieleA,FusoL,PanuccioE,ScaffaC,RaspagliesiF,SismondiP1,BigliaN.Secondarycytoreductivesurgeryforisolatedlymphnoderecurrenceofepithelialovariancancer:amulticenterstudy.EurJSurgOncol,2014,40(7):891-898.)。因而筛选新的具有活性的化疗药物，尤其是低毒且疗效好的抗肿瘤生物活性物质，对保护和提高肿瘤患者免疫力，减轻放化疗的毒副作用，具有重要意义。山核桃(CaryacathayensisSarg.)属胡桃科(Juglandaceae)山核桃属(CaryaNutt.)植物。全国每年产量2万余吨，浙、皖两省分布较广，浙江山核桃主产于浙皖交界天目山区。山核桃果皮由外果皮、中果皮和内果皮三层结构组成。山核桃仁的果肉上会覆盖一层红褐色的薄皮，这层薄皮就是山核桃的内果皮。目前对山核桃外果皮、中果皮功能性研究较多，而内果皮涉及较少。至今尚未见到利用山核桃内果皮抗癌特别是卵巢癌的相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种山核桃内果皮提取物在制备抗卵巢癌产品中的应用，以解决现有技术的不足。本专利技术采用以下技术方案：一种山核桃内果皮提取物在制备抗卵巢癌产品中的应用，所述山核桃内果皮提取物由如下步骤制备得到：步骤(1)、选取充分成熟、外表光滑无裂缝且无异味的山核桃，将山核桃去壳、剥离山核桃内果皮；步骤(2)、将步骤(1)得到的山核桃内果皮粉碎，得到山核桃内果皮粉；步骤(3)、将步骤(2)得到的山核桃内果皮粉用甲醇水溶液提取，得到甲醇提取物；步骤(4)、将步骤(3)得到的甲醇提取物过滤、干燥，即得到具有抗卵巢癌活性的山核桃内果皮提取物。进一步地，所述产品为药物或保健品或食品。进一步地，步骤(1)选取的山核桃使用20～50℃的温水浸泡30-40min后再去壳。进一步地，步骤(2)山核桃内果皮粉碎后过60～80目筛。进一步地，步骤(3)甲醇水溶液为80～85v/v％的甲醇水溶液。进一步地，步骤(3)山核桃内果皮粉和甲醇水溶液料液比为1g：10～12ml。进一步地，步骤(3)提取的方式为超声波辅助提取，提取功率为200～240W，提取温度为20～25℃，提取时间为2～2.5h，提取次数为1～2次。进一步地，步骤(4)采用离心的方式过滤杂质，转速为5000～6000r/min，时间为8～10min。进一步地，步骤(4)离心过滤得到的滤液旋转蒸发之后再真空干燥。进一步地，步骤(4)离心过滤得到的滤液于40～45℃旋转蒸发，蒸发至溶液即将蒸干，再于40～45℃真空干燥12～24h。本专利技术的有益效果：本专利技术制得的山核桃内果皮提取物表现出了对人卵巢癌细胞OVCAR-3更高的选择毒性，具有良好的抗癌活性，可以预期发展为抗卵巢癌产品，为山核桃赋予了新的开发和利用价值，对推动山核桃产业和医药工业的发展具有积极作用。附图说明图1是山核桃内果皮提取物对卵巢癌细胞OVCAR-3及卵巢正常细胞IOSE364存活率的影响。图2是山核桃内果皮提取物对卵巢癌细胞OVCAR-3及卵巢正常细胞IOSE364凋亡率的影响。图3是山核桃内果皮提取物对卵巢癌细胞OVCAR-3凋亡流式细胞仪分析结果图。图4是山核桃内果皮提取物对卵巢正常细胞IOSE364凋亡流式细胞仪分析结果图。图5是山核桃内果皮提取物对OVCAR-3细胞caspase-3/7酶活性的影响。图6是山核桃内果皮提取物对内源性途径相关蛋白表达影响的蛋白印记图。图7是山核桃内果皮提取物对内源性途径相关蛋白：Puma表达的影响。图8是山核桃内果皮提取物对内源性途径相关蛋白：Bax表达的影响。图9是山核桃内果皮提取物对内源性途径相关蛋白：Bad表达的影响。图10是山核桃内果皮提取物对内源性途径相关蛋白：cleavedPARP表达的影响。图11是山核桃内果皮提取物对p53蛋白表达的影响。图12是山核桃内果皮提取物对OVCAR-3细胞中VEGF的影响。图13是山核桃内果皮提取物对HIF-1α蛋白表达影响的蛋白印记图。图14是山核桃内果皮提取物对HIF-1α蛋白表达的影响。图15是山核桃内果皮提取物对HIF-1α-VEGF通路抑制VEGF分泌的影响。图16是山核桃内果皮提取物对PTEN途径相关蛋白表达影响的蛋白印记图。图17是山核桃内果皮提取物对PTEN途径相关蛋白：PTEN表达的影响。图18是山核桃内果皮提取物对PTEN途径相关蛋白：NFKB表达的影响。具体实施方式下面结合实施例和附图对本专利技术做更进一步地解释。下列实施例仅用于说明本专利技术，但并不用来限定本专利技术的实施范围。实施例1：山核桃内果皮提取物的制备(1)原料的选择和处理选取充分成熟、外表光滑无裂缝且无异味的临安本地山核桃，将山核桃用40℃左右的温水浸泡30min，目的是使种子和种皮能够更方便的剥离。去壳，使果肉与果壳(外果皮和中果皮)分离，得到山核桃仁后，再人工剥离种子与种皮，得到的种皮即为山核桃的内果皮，经液氮粉碎，过60目筛，得到山核桃内果皮粉，用密封袋密封，-80℃保存备用。(2)山核桃内果皮提取物的制备将山核桃内果皮粉用80v/v％的甲醇水溶液按料液比1g:10ml溶解，经超声波辅助提取，提取功率为240W，提取温度为25℃，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种山核桃内果皮提取物在制备抗卵巢癌产品中的应用，其特征在于，所述山核桃内果皮提取物由如下步骤制备得到：/n步骤(1)、选取充分成熟、外表光滑无裂缝且无异味的山核桃，将山核桃去壳、剥离山核桃内果皮；/n步骤(2)、将步骤(1)得到的山核桃内果皮粉碎，得到山核桃内果皮粉；/n步骤(3)、将步骤(2)得到的山核桃内果皮粉用甲醇水溶液提取，得到甲醇提取物；/n步骤(4)、将步骤(3)得到的甲醇提取物过滤、干燥，即得到具有抗卵巢癌活性的山核桃内果皮提取物。/n

【技术特征摘要】
1.一种山核桃内果皮提取物在制备抗卵巢癌产品中的应用，其特征在于，所述山核桃内果皮提取物由如下步骤制备得到：
步骤(1)、选取充分成熟、外表光滑无裂缝且无异味的山核桃，将山核桃去壳、剥离山核桃内果皮；
步骤(2)、将步骤(1)得到的山核桃内果皮粉碎，得到山核桃内果皮粉；
步骤(3)、将步骤(2)得到的山核桃内果皮粉用甲醇水溶液提取，得到甲醇提取物；
步骤(4)、将步骤(3)得到的甲醇提取物过滤、干燥，即得到具有抗卵巢癌活性的山核桃内果皮提取物。


2.根据权利要求1所述的山核桃内果皮提取物在制备抗卵巢癌产品中的应用，其特征在于，所述产品为药物或保健品或食品。


3.根据权利要求1或2所述的山核桃内果皮提取物在制备抗卵巢癌产品中的应用，其特征在于，步骤(1)选取的山核桃使用20～50℃的温水浸泡30-40min后再去壳。


4.根据权利要求1或2所述的山核桃内果皮提取物在制备抗卵巢癌产品中的应用，其特征在于，步骤(2)山核桃内果皮粉碎后过60～80目筛。


5.根据权利要求1或2所述的山核桃内果皮提取物在制备抗卵巢癌产品中的应用，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：何志平，吴峰华，叶林林，刘兴泉，刘畅，吴绍珍，王乾依，林菊，
申请(专利权)人：浙江农林大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33