高密度脂蛋白中的胆固醇的测定方法以及试剂技术

试样中的高密度脂蛋白中的胆固醇的测定方法，其特征在于：在含有非离子性表面活性剂、聚阴离子以及白蛋白的水性介质中，使试样和ｉ）胆固醇酯水解酶以及胆固醇氧化酶、或者ｉｉ）胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶以及胆固醇脱氢酶反应，测定生成的过氧化氢或者还原型辅酶。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及试样中的高密度脂蛋白(以下简称HDL)中的胆固醇的测定方法、测定用试剂以及测定用试剂盒。
技术介绍
生物中的脂蛋白按照其比重，可以分为高密度脂蛋白、低密度脂蛋白(以下，简称为LDL)、极低密度脂蛋白(以下，简称为VLDL)、乳糜微粒(CM)，主要由于脱辅基蛋白的种类不同，因此，各自在生物体中的作用有很大差别，脂质组成也是各种各样的。其中，已知知道HDL与为了从包括动脉管壁的各组织接受胆固醇而除去蓄积在细胞内的胆固醇的作用有关，并且是以冠状动脉硬化症为代表的各种动脉硬化症的危险预防要素，其在血液中的水平是预知动脉硬化性疾病病发的有效指示。以前的HDL中的胆固醇(以下，简称HDL胆固醇)的测定方法是由利用超离心方法、免疫化学的方法、电泳法、沉淀法等级分操作和胆固醇定量操作2步骤组成。然而，级分操作的操作复杂，且需要很长时间，而且还存在安全性的问题。因此，带有这些级分操作的测定方法的效率非常差，是不适于实用化的方法。近年来，为了解决上述问题，报道了各种测定方法。例如，已经知道了下列方法在含有胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶以及胆汁酸盐、胆汁酸衍生物或者琥珀酸二辛酯磺酸盐的缓冲液中，使血清或者血浆与该酶反应，在使VLDL以及LDL中的胆固醇率先反应成HDL胆固醇，测定生成的过氧化氢后，向反应液添加非离子类的含有聚环氧乙烷氧化物基团的表面活性剂，使HDL胆固醇和该酶反应，特异性地对HDL胆固醇进行鉴别定量的方法(特开昭62-69999号公报)；通过在特定的pH以及特定的温度下，在含有来自胰脏的胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、胆汁酸组的表面活性剂以及非离子类表面活性剂的缓冲液中，使血清与该酶反应而测定HDL胆固醇的方法(特开昭63-126498号公报)。在专利文献2中记载的测定方法中，首先，LDL胆固醇和该酶进行反应，接着，HDL胆固醇和该酶进行反应，可以测定HDL胆固醇。然而，这些测定方法需要长时间进行测定，而且，对于HDL胆固醇未必是特异性地测定方法。作为使HDL以外的脂蛋白凝聚而测定HDL胆固醇的方法，已经公知了下列方法，例如，使用硫酸葡聚糖等使HDL以外的脂蛋白凝聚的试剂、2价的金属盐以及经过化学修饰的酶的测定方法(特开平8-131197号公报)、使用聚阴离子等与HDL以外的脂蛋白形成复合体的试剂和聚环氧乙烷-聚环氧丙烷缩合物等不溶解脂蛋白的表面活性剂的测定方法(特开平8-201393号公报)、使用硫酸葡聚糖等聚阴离子、2价的金属盐、特定的非离子表面活性剂以及与来自试样的白蛋白不同的白蛋白的测定方法(特开平9-285298号公报)、对血清或者血浆中的HDL胆固醇进行测定的方法，其特征在于利用含有脂蛋白分离剂(硫酸葡聚糖等聚阴离子和镁离子等2价阳离子的组合)处理血清或者血浆，并且不对所得混合液进行固体以及液体的分离处理，并在阴离子表面活性剂(烷基磺酸或者胆汁酸或其衍生物)的存在下，使所得混合液与胆固醇酯酶以及胆固醇氧化酶反应，并对生成的过氧化氢进行测定(特开平8-116996号公报)、向生物试样中添加聚阳离子等与HDL以外的脂蛋白质形成复合体的物质和不溶解脂蛋白的特定的表面活性剂后，以酶进行测定HDL胆固醇的方法(特开平8-201393号公报)等。然而，这些使HDL以外的脂蛋白凝聚的HDL胆固醇的测定方法虽然与现有的标准方法具有良好的关联性，但是，存在下列问题由反应产生的凝聚物引起的浊度而导致的不精密度、在对反应室进行碱洗涤的时候，与反应液中的金属盐的反应生成的金属氢氧化物的沉淀而引起对自动分析装置的过度载荷等。作为不使HDL以外的脂蛋白凝聚而测定HDL胆固醇的方法，例如，已经公知了下列方法在胆汁酸或其盐以及白蛋白存在下，使生物试样和来自胰脏的胆固醇酯酶以及胆固醇氧化酶反应，并通过测定由该酶反应消耗或者产生的化合物而测定生物试样中的HDL胆固醇的方法(国际公开第97/40376号小册子)、在对HDL级分具有选择性的HLB值为16以上的非离子性表面活性剂的存在下，使优先作用于HDL级分的脂蛋白脂酶和/或胆固醇酯酶以及胆固醇氧化酶反应，测定试样中的HDL胆固醇的方法(国际公开第00/52480号小册子)等。另外，还公知了如下方法利用酰基聚环氧乙烷脱水山梨糖醇酯优先地把HDL以外的脂蛋白中的胆固醇转化成过氧化氢，除去产生的过氧化氢后，通过添加聚环氧乙烷烷基醚，以酶进行测定HDL胆固醇的方法(特开平9-299号公报)。然而，在这些不使HDL以外的脂蛋白凝聚的HDL胆固醇的测定方法中，有时存在下列问题HDL以外的脂蛋白中胆固醇的不完全除去或者由对于HDL以外的脂蛋白中的胆固醇的非特异反应而引起的测定值的不准确性。另外，当利用光学方法测定试样中的特定物质时，在来自M蛋白血症或者骨髓瘤等患者的试样中，由不溶性蛋白引起的混浊带来光学影响，这一点成为很大的问题。为了避免这种光学上的影响，一般公知如下方法使反应液中的盐类成为高浓度，使由不溶性蛋白引起的浊度消除。然而，在HDL胆固醇的测定中，由于存在高浓度的盐类，有时对HDL胆固醇特异性会下降或者进一步引起所含酶的失活，因此，在高浓度盐类的存在下测定HDL胆固醇大多情况会非常困难。专利技术的公开本专利技术的目的是提供能够简便、且正确测定的HDL胆固醇的测定方法、测定用试剂以及测定用试剂盒。本专利技术涉及下述～。试样中的高密度脂蛋白中的胆固醇的测定方法，其特征在于在含有非离子性表面活性剂、聚阴离子以及白蛋白的水性介质中，使试样和i)胆固醇酯水解酶以及胆固醇氧化酶、或者ii)胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶以及胆固醇脱氢酶反应，测定生成的过氧化氢或者还原型辅酶。如所述的测定方法，其中，水性介质进一步含有胆汁酸衍生物。如所述的测定方法，其中，胆汁酸衍生物为阴离子性胆汁酸衍生物。如～任一项所述的测定方法，其中，非离子性表面活性剂为聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺。如～任一项所述的测定方法，其中，聚阴离子为硫酸葡聚糖或其盐。高密度脂蛋白中胆固醇的测定用试剂，其特征在于含有非离子性表面活性剂、聚阴离子、白蛋白、胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶以及过氧化氢测定用试剂。高密度脂蛋白中胆固醇的测定用试剂，其特征在于含有非离子性表面活性剂、聚阴离子、白蛋白、胆固醇酯水解酶、胆固醇脱氢酶以及氧化型辅酶。如所述的试剂，其中，进一步含有还原型辅酶测定用试剂。如～任一项所述的试剂，其中，进一步含有胆汁酸衍生物。如所述的试剂，其中，胆汁酸衍生物是阴离子性胆汁酸衍生物。如～任一项所述的试剂，其中，非离子表面活性剂为聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺。如～任一项所述的试剂，其中，聚阴离子为硫酸葡聚糖或其盐。高密度脂蛋白中胆固醇的测定用试剂盒，由第一试剂以及第二试剂组成，其特征在于第一试剂、第二试剂的其中之一或者两者都含有聚阴离子、非离子性表面活性剂、白蛋白以及过氧化氢测定试剂，在第二试剂中含有胆固醇氧化酶。高密度脂蛋白中胆固醇的测定用试剂盒，其特征在于包括含有聚阴离子的第一试剂和含有胆固醇氧化酶的第二试剂，第一试剂、第二试剂的其中之一或者两者都含有胆固醇酯水解酶、非离子性表面活性剂、白蛋白以及过氧化氢测定试剂。高密度脂蛋白中胆固醇的测定用试剂盒，由第一试剂以及第二试剂组成，其特征在于第一试剂、第二试剂的其中之本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：片山有基，藤中真由美，
申请(专利权)人：协和梅迪克斯株式会社，
类型：发明
国别省市：