一种采用高效液相色谱检测甲磺酸卡莫司他有关物质的方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种采用高效液相色谱检测甲磺酸卡莫司他有关物质的方法，其中色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相A是庚烷磺酸钠和三氟乙酸的混合溶液；流动相B是乙腈、甲醇、乙醇、四氢呋喃任一种或者两种的混合液；稀释剂是纯水或其与甲醇、乙腈、乙醇、四氢呋喃任一种或两种的混合溶液；该方法可用于甲磺酸卡莫司他有关物质的测定和在合成工艺中使用4‑二甲氨基吡啶作为催化剂和N,N‑二甲基甲酰胺作为精制溶剂的药物中残留量的测定的应用。

【技术实现步骤摘要】
一种采用高效液相色谱检测甲磺酸卡莫司他有关物质的方法及应用
本专利技术属于医药
，具体提供了一种采用高效液相色谱检测甲磺酸卡莫司他有关物质的方法，该检测方法采用液相色谱法。
技术介绍
甲磺酸卡莫司他（英文名：CamostatMesilate）化学名成为2-(二甲基氨基)-2-氧代乙基4-(4-胍基苯甲酰氧基)苯乙酸酯甲磺酸盐，分子式为C20H22N4O5•CH3SO3H，分子量为494.52，CAS登录号:59721-29-8。其结构如式I所示：甲磺酸卡莫司他是一种非肽类蛋白抑制剂。口服后甲磺酸卡莫司他迅速作用于机体的激肽生成系统，纤维蛋白溶解系统、凝血系统及补体系统，抑制这些体系的酶活性的异常亢进，从而控制慢性胰腺炎的症状，缓解疼痛，降低淀粉酶值。临床上用于治疗胰腺炎。近期，德国学者通过体外论证，发现甲磺酸卡莫司他在抑制蛋白酶TMPRSS2的同时，可能对COVID-19有预防保护作用。因此甲磺酸卡莫司他有可能可以预防新冠病毒。甲磺酸卡莫司他的合成工艺是以对羟基苯乙酸（1）和对氨基苯甲酸（4）为起始原料。对羟基苯乙酸（1）和氯代乙酰二甲胺（2）反应得到中间体4-羟基-苯乙酸[2-（二甲基氨基）-2-氧代乙基）]酯（3）；对氨基苯甲酸（4）和单氰胺反应，得到对胍基苯甲酸盐酸盐（5）。中间体3和中间体5通过酯化反应，得到4-(4-胍基苯甲酰氧基)苯乙酸[2-(二甲基氨基)-2-氧代乙基]酯盐酸盐（6）。中间体6通过饱和碳酸氢钠溶液处理得到4-(4-胍基苯甲酰氧基)苯乙酸[2-(二甲基氨基)-2-氧代乙基]酯碳酸盐（7），再通过甲磺酸酸化得到4-(4-胍基苯甲酰氧基)苯乙酸[2-(二甲基氨基)-2-氧代乙基]酯甲磺酸盐（8），即甲磺酸卡莫司他；对羟基苯乙酸和对氨基苯甲酸是合成甲磺酸卡莫司他的起始物料，杂质C、杂质J、中间体3、中间体5是合成甲磺酸卡莫司他的工艺杂质，对羟基苯乙酸、中间体3和5、杂质C、杂质J同时也是甲磺酸卡莫司他的降解杂质。对氨基苯甲酸为中间体5的合成起始物料，并且中间体5不会降解成对氨基苯甲酸，故无需在甲磺酸卡莫司他里控制。甲磺酸卡莫司他杂质谱极其复杂，稳定性差，容易降解。为了保证用药安全，对甲磺酸卡莫司他进行有关物质控制是十分必要的。杂质C为4-(4-胍基苯甲酰氧基)苯乙酸甲磺酸盐，其结构式如下：杂质J为4-(4-(4-胍基苯甲酰氧基)胍基苯甲酰氧基)苯乙酸[2-(二甲基氨基)-2-氧代乙基]酯三氟乙酸盐，其结构式如下：
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种高效液相色谱法检测甲磺酸卡莫司他有关物质的方法，该方法可用于甲磺酸卡莫司他有关物质的测定和在合成工艺中使用4-二甲氨基吡啶作为催化剂和N,N-二甲基甲酰胺作为精制溶剂的药物中残留量的测定的应用。色谱条件如下：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相A是庚烷磺酸钠和三氟乙酸的混合溶液；流动相B是乙腈、甲醇、乙醇、四氢呋喃任一种或者两种的混合液，稀释剂是纯水或其与甲醇、乙腈、乙醇、四氢呋喃任一种或两种的混合溶液；检测器为紫外检测器，二极管阵列检测器中的一种；以一定量的样品浓度进样分析。优选地，所述的稀释剂为纯水与乙腈的混合溶液。进一步，所述的纯水与乙腈的混合溶液为70%~98%乙腈水溶液，所述百分数为体积分数。优选地，所述的流动相A中庚烷磺酸钠为0.05%~0.5%，所述百分数为质量分数；三氟乙酸为0.05%~0.1%，所述百分数为体积分数。优选地，所述的流动相B为乙腈。优选地，所述的流动相A和流动相B按梯度洗脱，按表1优选梯度设置如下：表1梯度洗脱优选地，所述色谱柱为WatersXbridgeRP18，流速为0.5-1.2ml/min，柱温为30~40℃。优选地，所述检测器为二极管阵列检测器，检测波长为230nm和265nm双波长。优选地，所述的样品浓度为1.0~2.5mg/ml。本专利技术进一步公开了该检测方法在合成工艺中溶剂残留量的测定方面的应用，所述的合成工艺指的是：使用4-二甲氨基吡啶作为催化剂和N,N-二甲基甲酰胺作为精制溶剂的合成工艺。实验结果显示该方法具有良好的专属性、灵敏度、精密度和准确度。本专利技术提供的甲磺酸卡莫司他有关物质的检测方法采用高效液相色谱法实现了同时对对羟基苯乙酸、中间体3、5、工艺杂质及降解杂质进行快速准确测定，具有较高的灵敏度和专属性，操作简捷，分离度符合标准（所有杂质峰之间分离度均大于2.0，杂质峰与主峰的最小分离度为2.0）。因此，可用于甲磺酸卡莫司他的质量控制，同时还能在合成工艺中使用4-二甲氨基吡啶作为催化剂和精制溶剂为N,N-二甲基甲酰胺的药物中其残留量的测定，具有现实意义。本专利技术主要解决了甲磺酸卡莫司他有关物质测定中不能将所有杂质完全分离和部分杂质不易保留的问题，重点考察了本专利所述检测方法的专属性、灵敏度和准确度。主要的难点在于增加不易保留杂质的保留时间，可以达到准确定量，使强保留化合物具有非常高的检测灵敏度，并且保证所有化学性质非常的杂质完全达到基线分离。甲磺酸卡莫司他有关物质仅被日本药典收录，该方法采用专属性差、灵敏度低、准确度较差的波层色谱法。专利所诉检测方法具有非常高的创新性和新颖性。附图说明图1为稀释剂定位溶液液相色谱图；图2为中间体5定位溶液液相色谱图；图3为中间体3定位溶液液相色谱图；图4为杂质C定位溶液液相色谱图；图5为杂质J定位溶液液相色谱图；图6为对羟基苯乙酸定位溶液液相色谱图；图7为甲磺酸卡莫司他定位溶液液相色谱图；图8为混合溶液液相色谱图；图9为对羟基苯乙酸线性和范围图；图10为中间体3线性和范围图；图11为中间体5线性和范围图；图12为杂质C线性和范围图；图13为杂质J线性和范围图；图14为甲磺酸卡莫司他线性和范围图。具体实施方式下面通过具体的实施方案叙述本专利技术。除非特别说明，本专利技术中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本专利技术的范围，本专利技术的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本专利技术实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本专利技术的保护范围。本专利技术所用原料及试剂均有市售。实施例11）实验条件Agilent1260-DAD高效液相色谱仪；色谱柱：WatersXbridgeRP184.6×150mm3.5μm；流速：1.0mL/min；柱温：35℃；进样量：10μL；样品浓度：1mg/ml；稀释剂：90%乙腈水溶液；检测波长：230nm和265nm;流动相A：庚烷磺酸钠为0.075%（质量分数），三氟乙酸的体积分数为0.本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种采用高效液相色谱检测甲磺酸卡莫司他有关物质的方法，其特征在于：所述检测方法的色谱条件如下：/n色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相A是庚烷磺酸钠和三氟乙酸的混合溶液；流动相B是乙腈、甲醇、乙醇、四氢呋喃任一种或者两种的混合液，稀释剂是纯水或其与甲醇、乙腈、乙醇、四氢呋喃任一种或两种的混合溶液；/n所述的流动相A和流动相B按梯度洗脱，梯度设置如下：/n

【技术特征摘要】
1.一种采用高效液相色谱检测甲磺酸卡莫司他有关物质的方法，其特征在于：所述检测方法的色谱条件如下：
色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相A是庚烷磺酸钠和三氟乙酸的混合溶液；流动相B是乙腈、甲醇、乙醇、四氢呋喃任一种或者两种的混合液，稀释剂是纯水或其与甲醇、乙腈、乙醇、四氢呋喃任一种或两种的混合溶液；
所述的流动相A和流动相B按梯度洗脱，梯度设置如下：



所述流动相的流速为0.2-1.2ml/min；
所述色谱柱选自：KromasilC18、ODS-C18、ThermoSyncronisC18、ThermoHypersilGOLDC18、WaterssymmetryC18、WatersRPC18、AgilentXDBC18、AgilentEclipsePlusC18、ShimadzuGLODSC18、WatersBEHC18、WatersXbridgeRP18；
所述色谱柱的柱温为20~60℃；以一定样品浓度进样，所述样品浓度为0.5~4mg/ml；
检测器为紫外检测器，二极管阵列检测器中的一种；所述检测器的检测波长为210~280nm。


2.权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所...

【专利技术属性】
技术研发人员：张慕军，石涛，雷勇胜，邓瑶，崔轶达，丁文宇，刘桂霞，史可吟，
申请(专利权)人：天津泰普制药有限公司，天津药物研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12