一种高通量检测环境中二恶英类化学物质的方法技术

本发明专利技术公开了一种高通量检测环境中二恶英类化学物质的方法。其步骤是：首先是探针的设计；其次是探针的退火；第三是探针的固定；第四是提取含有ＡｈＲ和ＡＲＮＴ受体蛋白的ＳＤ小鼠肝脏胞液；第五是将ＳＤ小鼠肝脏细胞液与含有二恶英类化学物质待测样品混合；第六是ＦＩＴＣ的荧光检测。根据荧光值增加的多少来确定样品中二恶英类化学物质的含量。本发明专利技术能快速准确的检测二恶英类化学物质，检测成本低，应用前景广泛。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种高通量检测环境中二恶英类化学物质的方法，包括下列步骤：Ａ、探针的设计：分别设计生物素修饰和ＦＩＴＣ荧光修饰探针，序列分别为５‘－ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＧＣＴＣＴＴＣＴＣＡＣＧＣＡＡＣＴＣＣＧ－３’和５’－ＣＧＧＡＧＴＴＧＣＧＴＧ ＡＧＡＡＧＡＧＣＣ－３’，生物素修饰的目的是使探针能够利用生物素和链霉亲和素的结合作用固定在链霉亲和素修饰的３８４孔板上；Ｂ、探针的退火：将探针分别溶解于超纯水中，终浓度为１０－２０μＭ，将两探针等比例混合后９０－９６℃处理５－１０ ｍｉｎ、５０－６０℃退火２０－３０ｍｉｎ后，稀释至５００ｐＭ使用；Ｃ、探针的固定：退火后的探针加入链霉亲和素修饰的３８４孔板，利用生物素和链霉亲和素的特异作用使探针在１２－１６℃下过夜或３５－３７℃１小时固定；Ｄ、提取含有Ａ ｈＲ和ＡＲＮＴ受体蛋白的ＳＤ小鼠肝脏胞液；Ｅ、将ＳＤ小鼠肝脏胞液与不同浓度的ＤＭＳＯ、２，３，７，８－ＴＣＤＤ混合，ＤＭＳＯ的浓度范围是０．１ｐＭ－１０００ｐＭ，２，３，７，８－ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｏｄｉｂｅｎｚｏ－ｐ－ｄｉｏｘｉｎ 的浓度范围是０．１ｐＭ－２００ｐＭ，１，２，３，７，８－ｐｅｎｔａｃｈｌｏｒｏｄｉｂｅｎｚｏ－ｐ－ｄｉｏｘｉｎ的浓度范围是１ｐＭ－５０００ｎＭ，１，２，３，４，７，８－ｈｅｘａｃｈｌｏｒｏｄｉｂｅｎｚｏ－ｐ－ｄｉｏｘｉｎ的浓度范围是０．０１ｎＭ－１０ｎＭ，２０－２５℃避光作用１－２小时后，将样品与ＨＥＤＧＫｂｕｆｆｅｒ混合，加入固定有探针的链霉亲和素修饰的３８４孔板内，２０－２５℃避光反应１－２小时；Ｆ、ＦＩＴＣ的荧光检测：采用Ｂｉｏ－ＴｅｔＭｕｌｔｉ－Ｄｅｔ ｅｃｔｉｏｎＭｉｃｒｏｐｌａｔｅＲｅａｄｅｒＳｙｎｅｒｇｙＨＴ检测ＦＩＴＣ的荧光值，根据荧光值确定待测样品中二恶英或其结构类似物的含量。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周亚凤，张先恩，游璠，黄智，张治平，
申请(专利权)人：中国科学院武汉病毒研究所，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]