EGFR基因第19号外显子E746-A750dell缺失突变检测试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种EGFR基因第19号外显子E746‑A750dell缺失突变检测试剂盒，具有这样的特征，包括：用于对EGFR基因进行扩增的第一引物组，该第一引物组包括第一上游引物与第一下游引物，其中，第一上游引物的序列为GGATTTCCTTGTTGGCTTTCGGAGATGTTTTG，第一下游引物的序列为ATGCCTCCATTTCTTCATCC。

【技术实现步骤摘要】
EGFR基因第19号外显子E746-A750dell缺失突变检测试剂盒
本专利技术涉及一种基因检测试剂盒，具体涉及一种EGFR基因第19号外显子E746-A750dell缺失突变检测试剂盒。
技术介绍
E746-A750dell缺失突变是肺癌的一种，为EGFR第19号外显子缺失突变。EGFR表达于正常上皮细胞表面，而在一些肿瘤细胞中常过表达，EGFR的过表达与肿瘤细胞的转移、侵润、预后有关。因此，检测E746-A750dell缺失有助于筛选适合人群用于靶向治疗，以及判断酪氨酸激酶抑制剂(TKI)药物的疗效。现有技术中，一般采用荧光定量与二代测序相结合的方法对E746-A750dell缺失突变进行检测。但是，上述方法对于实验环境要求非常严格，操作起来十分复杂，并且检测成本高，应用、推广起来较为困难。
技术实现思路
本专利技术是为了解决上述问题而进行的，目的在于提供一种EGFR基因第19号外显子E746-A750dell缺失突变检测试剂盒。本专利技术提供了一种EGFR基因第19号外显子E746-A750dell缺失突变检测试剂盒，具有这样的特征，包括：用于对EGFR基因进行扩增的第一引物组，该第一引物组包括第一上游引物与第一下游引物，其中，第一上游引物的序列为GGATTTCCTTGTTGGCTTTCGGAGATGTTTTG，第一下游引物的序列为ATGCCTCCATTTCTTCATCC。在本专利技术提供的EGFR基因第19号外显子E746-A750dell缺失突变检测试剂盒中，还可以具有这样的特征，还包括：用于对EGFR基因进行扩增的第二引物组，该第二引物组包括第二上游引物与第二下游引物，其中，第二上游引物的序列为GCCTAGACGCAGCATCATAA，第二下游引物的序列与第一下游引物的序列相同。在本专利技术提供的EGFR基因第19号外显子E746-A750dell缺失突变检测试剂盒中，还可以具有这样的特征：其中，第一上游引物的浓度为8μM～12μM，第一下游引物在的浓度为8μM～12μM。在本专利技术提供的EGFR基因第19号外显子E746-A750dell缺失突变检测试剂盒中，还可以具有这样的特征，还包括：其中，PCR混合液，其中，PCR混合液由PCR缓冲液、三磷酸脱氧核苷酸、TaqDNA聚合酶、KCL以及UDG酶混合而成。在本专利技术提供的EGFR基因第19号外显子E746-A750dell缺失突变检测试剂盒中，还可以具有这样的特征：其中，PCR混合液中PCR缓冲液的浓度为20mM，三磷酸脱氧核苷酸的浓度为500μM，TaqDNA聚合酶的浓度为0.1U，KCL的浓度为100mM，UDG酶的浓度为0.1U/μL。专利技术的作用与效果根据本专利技术所涉及的EGFR基因第19号外显子E746-A750dell缺失突变检测试剂盒，因为该试剂盒包括第一引物组，第一引物组具有第一上游引物，该第一上游引物包括23个碱基，其中前29个碱基与EFGR序列完全互补，后3个碱基(TTG)与746-A750dell缺失后的碱基相互补并且与746-A750dell野生型的碱基不互补，因此通过该第一上游引物能够对746-A750dell缺失的DNA进行特异性扩增，然后只需要对扩增产物进行测序后就能够判断所检测的DNA是否发生了EGFR基因第19号外显子E746-A750dell缺失突变。此外，通过本专利技术的试剂盒对DNA进行E746-A750dell缺失突变检测时，只需要进行PCR以及测序即可，这一过程仅需普通实验环境即可进行，操作方法简单易行，成本低，易于推广应用。附图说明图1是本专利技术的实施例二中用第二引物组对纯野生型DNA进行检测的检测结果图；图2是本专利技术的实施例二中用第二引物组对野生型DNA：突变型DNA＝1:1的混合DNA进行检测的检测结果图；图3是本专利技术的实施例二中用第二引物组对野生型DNA：突变型DNA＝1:10的混合DNA进行检测的检测结果图；图4是本专利技术的实施例二中用第二引物组对野生型DNA：突变型DNA＝1:100的混合DNA进行检测的检测结果图；图5是本专利技术的实施例二中用第一引物组对纯野生型DNA进行检测的检测结果图；图6是本专利技术的实施例二中用第一引物组对野生型DNA：突变型DNA＝1:1的混合DNA进行检测的检测结果图；图7是本专利技术的实施例二中用第一引物组对野生型DNA：突变型DNA＝1:10的混合DNA进行检测的检测结果图；以及图8是本专利技术的实施例二中用第一引物组对野生型DNA：突变型DNA＝1:100的混合DNA进行检测的检测结果图。具体实施方式为了使本专利技术实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，以下实施例结合附图对本专利技术EGFR基因第19号外显子E746-A750dell缺失突变检测试剂盒作具体阐述。以下实施例中，所使用的DNA提取试剂盒(血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒(DP304)，购自天根生化科技(北京)有限公司)为市售试剂盒。<实施例一>本实施例提供了一种EGFR基因第19号外显子E746-A750dell缺失突变检测试剂盒，用于对DNA进行EGFR基因第19号外显子E746-A750dell缺失突变检测，包括第一引物组、第二引物组以及PCR混合液。第一引物组包括第一上游引物和第一下游引物。第一上游引物的序列为GGATTTCCTTGTTGGCTTTCGGAGATGTTTTG。第一上游引物的前29个碱基与能够与DNA上的EFGR序列完全互补，后3个碱基(TTG)与746-A750dell缺失突变后的碱基相互补并且与746-A750dell野生型(即，未发生746-A750dell缺失突变)的碱基不互补，因此，第一上游引物能够对746-A750dell缺失突变的DNA进行特异性扩增。第一下游引物的序列为ATGCCTCCATTTCTTCATCC。第一下游引物为EGFR基因161111-161131区域的互补序列。因此，该第一下游引物对746-A750dell缺失突变与野生型无区分作用。第一上游引物的浓度为8μM～12μM，第一下游引物的浓度为8μM～12μM。在本实施例中，第一上游引物的浓度为10μM，第一下游引物的浓度为10μM。所以，通过第一引物组能够对发生了746-A750dell缺失突变的DNA进行扩增。第二引物组包括第二上游引物与第二下游引物。第二上游引物的序列为GCCTAGACGCAGCATCATAA。第二上游引物为EGFR基因160395-160414区域的碱基。因此，该第二上游引物对746-A750dell缺失突变与野生型无区分作用。第二下游引物的序列与第一下游引物的序列相同。所以，通过第二引物组既能够对发生了746-A750dell缺失突变的DNA进行扩增，又能够对未发生746-A750dell缺失突变的(野生型)DNA进行扩增。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种EGFR基因第19号外显子E746-A750dell缺失突变检测试剂盒，其特征在于，包括：/n用于对EGFR基因进行扩增的第一引物组，该第一引物组包括第一上游引物与第一下游引物，/n其中，所述第一上游引物的序列为GGATTTCCTTGTTGGCTTTCGGAGATGTTTTG，/n所述第一下游引物的序列为ATGCCTCCATTTCTTCATCC。/n

【技术特征摘要】
1.一种EGFR基因第19号外显子E746-A750dell缺失突变检测试剂盒，其特征在于，包括：
用于对EGFR基因进行扩增的第一引物组，该第一引物组包括第一上游引物与第一下游引物，
其中，所述第一上游引物的序列为GGATTTCCTTGTTGGCTTTCGGAGATGTTTTG，
所述第一下游引物的序列为ATGCCTCCATTTCTTCATCC。


2.根据权利要求1所述的EGFR基因第19号外显子E746-A750dell缺失突变检测试剂盒，其特征在于，还包括：
用于对EGFR基因进行扩增的第二引物组，该第二引物组包括第二上游引物与第二下游引物，
其中，所述第二上游引物的序列为GCCTAGACGCAGCATCATAA，
所述第二下游引物的序列与所述第一下游引物的序列相同。


3.根据权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁晓飞，孙开宇，
申请(专利权)人：苏州举健生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32