黑果菝葜苷A用于治疗横纹肌肉瘤的用途制造技术

本发明专利技术公开了黑果菝葜苷A用于治疗横纹肌肉瘤的用途。本发明专利技术研究发现，黑果菝葜苷A可以显著抑制人横纹肌肉瘤RD细胞株的增殖，时间‑抑制率曲线和剂量‑抑制率曲线显示黑果菝葜苷A对人横纹肌肉瘤RD细胞株的抑制作用具有时间依赖效应和剂量依赖效应，因此具有开发成抗人横纹肌肉瘤药物的前景。

【技术实现步骤摘要】
黑果菝葜苷A用于治疗横纹肌肉瘤的用途
本专利技术涉及黑果菝葜苷A的医药用途，具体涉及黑果菝葜苷A用于治疗横纹肌肉瘤的用途。
技术介绍
癌症是严重威胁人类生存和社会发展的重大疾病和严重的公共卫生问题之一，癌症控制已成为世界各国政府的卫生战略重点。近年来，随着全球经济发展，人口老龄化，生活方式的改变以及生态环境的变化，癌症的发病率和死亡率总体呈上升趋势，癌症负担日益加剧。人横纹肌肉瘤是起源于横纹肌细胞或向横纹肌细胞分化的间叶细胞的一种恶性肿瘤，是儿童软组织肉瘤中最常见的一种。人横纹肌肉瘤发病率次于恶性纤维组织细胞瘤和脂肪肉瘤，居软组织肉瘤的第三位，严重威胁着人类健康。目前，人横纹肌肉瘤的治疗仍是肿瘤领域的重大挑战之一，因此，寻找有效的治疗药物尤为迫切。黑果菝葜苷A是最早从黑果菝葜中分离得到一种天然化合物(舒积成等，黑果菝葜中2个新化学成分，中国中药杂志，2018年05期)，后来发现在其他植物中也存在。现有技术没有发现黑果菝葜苷A用于治疗横纹肌肉瘤的报导。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了提供黑果菝葜苷A用于治疗横纹肌肉瘤的用途。实现上述目的的技术方案如下：黑果菝葜苷A用于制备抗人横纹肌肉瘤的药物的生物医药用途。一种抗人横纹肌肉瘤的药物，以黑果菝葜苷A为活性成分，并用药学上可以接受的辅料制备成药学上可以接受的剂型。优选地，辅料可以为固体辅料或液体辅料。优选地，剂型可以为片剂、胶囊、颗粒剂、注射剂。有益效果：本专利技术研究发现，黑果菝葜苷A可以显著抑制人横纹肌肉瘤RD细胞株的增殖，时间-抑制率曲线和剂量-抑制率曲线显示黑果菝葜苷A对人横纹肌肉瘤RD细胞株的抑制作用具有时间依赖效应和剂量依赖效应，因此具有开发成抗人横纹肌肉瘤药物的前景。附图说明图1为黑果菝葜苷A对人横纹肌肉瘤RD细胞的剂量-抑制率曲线。图2为黑果菝葜苷A对人横纹肌肉瘤RD细胞的时间-抑制率曲线。图3为黑果菝葜苷A对人横纹肌肉瘤RD细胞中凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达的影响。具体实施方式一、试验材料人横纹肌肉瘤RD细胞株购自美国ATCC公司，液氮冻存。黑果菝葜苷A纯度不低于98％，配制成药物溶液备用。DMEM培养液、胎牛血清购自Gibco。青霉素、链霉素购自Sigma。CCK8检测试剂盒购自南京碧云天生物。二、试验方法1、细胞培养将液氮冻存的人横纹肌肉瘤RD细胞株按照常规方法复苏后悬浮培养在含10％胎牛血清、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素的DMEM培养液中，在37℃、5％CO2、饱和湿度的恒温培养箱中培养，每2～3d换液传代，取对数生长期的细胞进行实验。2、CCK8法测定黑果菝葜苷A对人横纹肌肉瘤RD细胞的增殖抑制作用取对数生长期的人横纹肌肉瘤RD细胞，消化重悬后制成密度为5×104/mL的细胞悬浮液，按照每孔200μL的接种量接种于96孔板，适应性培养24h后，将培养基更换为含1、2、5μM黑果菝葜苷A的完全培养基，每个浓度设3个复孔，另设不含细胞的培养液为空白组，置于37℃、5％CO2、饱和湿度的恒温培养箱中继续培养24、48、72h后，每孔加入10μL的CCK8试剂，孵育4h后在酶联免疫检测仪450nm波长处测定每孔OD450值，取3孔平均值，计算增殖抑制率，并绘制时间-抑制率曲线和剂量-抑制率曲线。增殖抑制率(％)＝[1－(OD药物组－OD空白组)/(OD对照组－OD空白组)]×100％。3、WB法测定黑果菝葜苷A对人横纹肌肉瘤RD细胞中凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达影响取对数生长期的人横纹肌肉瘤RD细胞，消化重悬后制成密度为1×105/mL的细胞悬浮液，以每孔2mL接种于6孔板中，适应性培养24h后，将培养基更换为含有2μM黑果菝葜苷A的完全培养基，并设不加药培养的细胞为对照组，置于37℃、5％CO2、饱和湿度的恒温培养箱中继续培养48h后，收集细胞，PBS洗涤，裂解液裂解，测定蛋白浓度，各组取30μg蛋白进行SDS-PAGE电泳，转膜，5％脱脂奶粉封闭，加入Bcl-2、Bax、GAPDH一抗4℃孵育过夜，洗膜，加入辣根过氧化物酶标记的二抗室温孵育2h，显色，灰度扫描分析。4、统计学分析采用软件SPSS17.0进行统计学分析处理，计量数据以均数±标准差表示，组间比较采用t检验，多组间比较采用方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。三、试验结果不同浓度黑果菝葜苷A(1、2、5μM)不同时间(24、48、72h)对人横纹肌肉瘤RD细胞的增殖抑制率和增殖抑制率曲线如表1和图1～2所示，可以发现黑果菝葜苷A可以显著抑制人横纹肌肉瘤RD细胞株的增殖，时间-抑制率曲线和剂量-抑制率曲线显示黑果菝葜苷A对人横纹肌肉瘤RD细胞株的抑制作用具有时间依赖效应和剂量依赖效应。表1不同浓度黑果菝葜苷A不同时间对人横纹肌肉瘤RD细胞的增殖抑制率图3为黑果菝葜苷A对人横纹肌肉瘤RD细胞中凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达的影响。Bcl-2、Bax是调控凋亡最重要的细胞因子，Bcl-2抑制细胞凋亡，Bax则促进细胞凋亡。图3WB图可以发现，黑果菝葜苷A显著下调Bcl-2蛋白表达，上调Bax蛋白表达，黑果菝葜苷A具有显著的促进人横纹肌肉瘤RD细胞凋亡的作用。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.黑果菝葜苷A用于制备抗人横纹肌肉瘤的药物的生物医药用途。/n

【技术特征摘要】
1.黑果菝葜苷A用于制备抗人横纹肌肉瘤的药物的生物医药用途。


2.一种抗人横纹肌肉瘤的药物，其特征在于：以黑果菝葜苷A为活性成分，并用药学上可以接受的辅料制备成药学上可以接受的剂型...

【专利技术属性】
技术研发人员：于海涛，杨晓旭，
申请(专利权)人：南京赛尔健生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32