测定银杏叶组合物中总黄酮含量的方法技术

本发明专利技术涉及测定银杏叶组合物中总黄酮含量的方法。在本发明专利技术方法中用芦丁配成标准溶液，用分光光度法进行检验，按照标准曲线法计算得到待测样品中总黄酮含量。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物药制剂，具体涉及一种银杏叶组合物及其制备方法与应用。银杏(Ginkgo Biloba)是现存种子植物中最古老的一种，也是可上溯到2亿多年前二叠纪时的银杏家族的唯一幸存者。在中国，银杏叶制剂用于治疗已有5000多年了，也就是说，从中草药的最早起源就开始用于治疗了。自六十年代以来，银杏叶的植药提取物在很多国家用于治疗脑血管及周围血管疾病，如德国、法国、日本和韩国。
技术介绍
银杏叶中的主要有效成份是黄酮类化合物，它包括至少14种不同的化合物，例如黄酮醇、黄酮、黄烷酮和双黄酮等等，这些化合物中，黄酮苷和黄酮醇苷包括山萘素、槲皮素和异鼠李素与葡萄糖或鼠李糖结合物，是市场上用于治疗目的的银杏叶提取物(Tebonin、Tanakan、Roekan或“EGb761”)中最显著的组分，实验表明黄酮苷和黄酮醇苷为有力的抗氧剂，可清除氧自由基从而避免由于年龄老化而引起的细胞和组织损伤，它们会严重影响大脑功能，包括记忆力和注意力，参见J.Pincemail等人，La Presse Medicale Vol.15(1986)，1475-1479；J.Robak等人，Biochem Pharmacol Vol 37(1988)，837-841和J.Kleijnen与 P.Knipschild Ginkgo biloba(Drug Profiles)，the Lancet3401136(1992)，另外，黄酮苷和黄酮醇苷也可改善周围血管循环，含有高浓度活性成分黄酮苷的银杏叶提取物的制备工艺在(专利)DE-B1767 098和DE-B 21 17 429中都有描述，这些制备物为银杏叶单一成份提取物。除黄酮外，银杏叶中另一主要活性成份是萜内酯，包括银杏内酯A、B、C、J、M和白果内酯，银杏内酯为含有内酯结构的萜类，参见K.Nakanishi，Pure和Applied Chemistry，Vol.14(1967)89-113；M.Maruyama等人，Tetrahedron Letters(1967)，299-302及303-319和K.Okabe等人，Ginkgolides，J chem.Soc.(1967)，2201-2206，它们是20个碳的笼状分子，含有一个叔丁基和六个5元环A至F，所述六个五元环包括一个螺[4.4}壬烷，一个四氢呋喃环和三个内酯环，不同银杏内酯结构仅是螺壬烷骨架上C1，C3或C7上羟基数目和位置不同。最近发现，由于它们拮抗血小板活化因子(PAF)的特性，银杏内酯A、B、C和M特别是白果内酯B能有效治疗血小板活化因子诱发的疾病如哮喘、支气管炎、老年性痴呆、过敏、心功能失调、风湿病等等以及其它循环系统疾病，参见美国专利号4,734,280；P.Braquet，Drug of the Future，12，643，1987；V Lamant等人，Biochem Pharmacol Vol.36(1987)2749-52；K.Becker等人，Biomed Biochim Acta Vol 47(1988)10-11；P.Braquet等人，J Ethnopharmacol Vol.32(1991)135-9和B.Steinke等人，Planta Med Vol 59(1993)155-60银杏内酯A和B可增加脑血流量而对大脑起保护作用，参见J.Krieglstein等人，European Journal ofPharmaceutical Sciences Vol.3(1995)39-48，美国专利号5,002,965描述了一种使用银杏内酯防止器官移植中排斥反应的方法。DE-A3338995和相关美国专利号4,571,407使用白果内酯，一种结构与银杏内酯相关的倍半萜内酯，参见K.Nakanishi等人，R.T.Major等人和K.Weinges等人，J.Am.chem Soc.，Vol.93，1971，3544-3546治疗脑病，脑水肿，脱鞘神经病和脊髓病，在中脑动脉闭合前使用白果内酯在梗塞部位，皮质和梗塞面积明显减小，参见J.Krieglstein等人，European Journal of Pharmaceutical Sciences Vol.3(1995)39-48.实验表明白果内酯有助于复原动物的运动神经，参见C.Bruno等人，Planta Med 59，1993，302-307。另外，体外和体内实验证明白果内酯具有抑制卡氏肺囊虫生长的特性，参见C.Atzori等人，Antimicrobe Agents Chemother 37(7)1993，1492-1496。美国专利号5,264,216采用白果内酯能治疗下列病菌的某些感染阴道毛滴虫、大肠杆菌、乳酸杆菌，卡氏肺囊虫、金黄色葡萄球菌、类链球菌。白果内酯抗卡氏肺囊虫感染活性主要用于治疗艾滋病并发感染。除上述化合物外，银杏叶至少含有12种烷基酚酸化合物，包括银杏酸(漆树酸)，它是6-烷基水杨酸，烷基为正13碳到正19碳有0-3个双键的烷基基团，参见J.L.Gellermann等人，Phytochemistry，Vol.15(1976)，1959-1961和Analytic.Chem.，Vol.40(1968)，739-743。同毒常青藤中刺激物结构相仿，银杏酸是银杏叶提取物毒性作用的因素，这些毒性作用包括胃肠道副作用、头痛、皮肤刺激和水肿，六十年代以来，已有多例在接触银杏叶或果实后出现过敏反应的报告，参见G.A.Hill等人，J.Am.Chem Soc.，Vol.56(1934)，2736-2738，W.F.Sowers等人，Arch，Dermatol.，Vol.91(1965)，452-456；L.E.Becker等人，J.Am.Med.Assoc.，Vol.231(1975)，1162-1163；T.Nakamura,Contact Dermatitis，Vol.12(1985)，281-282；R.R.Tomb等人，Contact Dermatitis，Vol.19(1988)281-3和J.P.Lepoittevin等人，Arch Dermatol Res Vol.281(1989)，227-30。于是，许多国家的科学家努力开发脱敏的物质和方法以对抗银杏酸所致的过敏(参见美国专利号4,428,965)。DE-B 17 67 098和DE-B 21 17 429开发了一种采用氯代脂肪烃如四氯化碳来去除烷基酚化合物的工艺，然而在该工艺中相当多的有医疗价值的银杏内酯和白果内酯也会失掉了。DE-B 21 17 429开发了一种技术以除去具有丹宁特性的多酚类化合物(原花色素)，在工艺中使用了铅化合物。这些工艺的问题是可能危害操作人员的健康，对环境的潜在威胁以及药品中有害的残留物。当前最常用的用于治疗目的的银杏叶提取物(Tebonin、Tanakan、Roekan或“EGb 761”)含有24％黄酮苷和6％萜内酯；参见K.Driau La Presse Medicale Vol.15(1986)，1455-1457，银杏内酯A、B、C和J以及约占这6％的一半的白果内酯，银杏叶提取物通常含有低于10ppm烷基酚化合本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定银杏叶组合物中总黄酮含量的方法，包括以下步骤：ａ）将干燥的芦丁溶于７０％乙醇配成标准溶液；ｂ）移取不同量的标准溶液于容量瓶中，每一容量瓶中均加入ｐＨ为４．５的水、乙酸－乙酸钠缓冲液、０．１Ｍ氯化铝和７０％乙醇，以每个 样品２７０ｎｍ下的吸收描点作标准线；ｃ）依据分光光度法进行检验，将组合物以７０％乙醇溶解，移取一定量的溶液于容量瓶中，其余同上：测定２７０ｎｍ下的吸收，根据标准曲线得知样品的浓度，按无水状态下总黄酮含量以芦丁计为标示量的８５％－１１ ５％。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：谢德隆，王宁，高崎，张国安，邵宝平，金小吾，黄新生，
申请(专利权)人：上海杏灵科技药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]