本发明专利技术公开了包含ＩＬ－８模拟物的组合物，以及其在诊断，预防，治疗和改善多种疾病的症状中的用途。
【技术实现步骤摘要】
技术介绍
专利
本专利技术涉及人趋化因子白介素-8的模拟物。目前工艺水平描述白介素-8(IL-8)是一种趋化因子。负责募集和激活白细胞，并是几种急性炎症反应内原性介质之一。直到最近其还有嗜中性粒细胞激活因子、单核细胞衍生的嗜中性粒细胞趋化性因子、嗜中性粒细胞激活多肽1，以及当然的IL-8。“术语”IL-8获得了最广泛地接受，并在本专利技术中使用。最广泛的IL-8单体的天然存在形式是一种通过对99残基前体进行加工后衍生的77残基的蛋白质。具有相关序列的包括嗜中性粒细胞激活多肽2和GROα(具有黑素瘤生长刺激活性)的其它蛋白质是IL-8的同源物，具有嗜中性粒细胞激活特性。IL-8趋化因子是趋化因子超家族中的成员。趋化因子被分为下列两种功能种类α和β。每一类中的成员都共有组成的原始序列的基序。α类中的成员对诸如嗜中性粒细胞的白细胞是有效的化学引诱物和活化剂，并具有C-X-C基序，这意味着头两个半胱氨酸残基被一个插入残基所分隔。β类中的成员对单核细胞是有效的化学引诱物和活化剂，并具有C-X-C基序。尽管这两个趋化因子家族具有相似的结构，它们的序列同源性却相当低(30-35％)。α类和β类在功能上是有区别的，其中α类的成员不能激活单核细胞，而β类的成员对嗜中性粒细胞毫无效果。IL-8趋化因子是α类成员。IL-8对诸如嗜中性粒细胞的白细胞的体外作用与诸如C5a和fMet-Leu-Phe的其它趋化性的激动剂的作用相类似。上述体外作用包括诱导在细胞浆中游离钙的瞬时增加；包含诸如弹性蛋白酶的降解酶颗粒的释放；呼吸性H2O2的爆发；嗜中性粒细胞形状的改变以及趋化现象。IL-8趋化因子表现出以大约64,000/细胞的频率和0.2nM的Kd值与嗜中性粒细胞上至少一类受体位点相结合。通过二维NMR和x光衍射技术得知了IL-8的三维结构。IL-8单体具有反平行的β链继之以单个叠加的C末端α-螺旋。位于半胱氨酸7和半胱氨酸34，以及半胱氨酸9和半胱氨酸50之间的二硫桥似乎可以稳定其三级结构。第1-6残基以及第7-18残基环似乎并不具有定义的二级结构。IL-8在溶液中是非共价同型二聚体，并且由于两个单体的β链之间的相互作用而基本稳定。三维结构的检测提示，在50位的半胱氨酸之后，形成1型β转折的残基(从残基51到55)后面是一个与β-折叠横向的兼性的α-螺旋(从残基55到72)。二聚体分子的两个亚基之间有一些相互作用。IL-8趋化因子具有抗肿瘤和抗感染的治疗活性，例如通过减小在大鼠的腹膜癌转移模型中肉眼可见肿瘤的回归。在这个模型中，IL-8表现出将多形核白细胞(PMN)募集至激发位置，但却没有提高该肿瘤的PMN渗透以及PMN的细胞毒素活性。无论如何，它都具有显著的治疗活性，这可能是继发于PMN细胞毒性，且可与其它中间细胞相关。由于IL-8也显示出具有刺激T细胞趋化现象的能力，表明淋巴细胞也可能参与其中。参见Lejeune，P.，et al.Cancer Immunol.Immuno.38167-170(1994)。类似的，白介素-8也在非中性粒细胞减少症的小鼠中表现出治疗活性，该小鼠在激发之前不久和在用P.aeuginosa(铜绿假单胞菌体)、植物克雷白(氏)杆菌(Klebsiella-phenumoniae)或柏格(氏)鼠疟原虫(Plasmodiumberghei)感染的激发位点上接受了IL-8。通过化学合成和重组DNA技术生成IL-8趋化因子。分别参见Clark-Lewis，et al.，Biochemistry 303128-3135(1991)和Herbert，et al.，J.Biol.Chem.28618989-18994(1991)。因为在许多诸如炎症和与自身免疫应答有关的疾病状态的许多病理状态中都有它们的参与，这导致趋化因子及其受体在最近几年受到了越来越多的关注。因此，本领域的人员将从对含有IL-8模拟物的组合物鉴定中受益，这些IL-8模拟物可用于对疾病治疗以及改善疾病的一种或更多种症状的给药。
技术实现思路
本专利技术的实施方案通常都包括含有IL-8模拟物的组合物。在一些实施方案中，本专利技术提供了对个体的疾病进行治疗和/或改善其一种或更多种症状的方法，包括对个体给予含有有效量的IL-8模拟物的组合物。所述组合物通常包括Glu-Leu-Arg肽序列，在一些实施方案中还包括连接物。含有IL-8模拟物的组合物可以多种方式给药，包括但不限于单独给药、作为与其它试剂联合治疗的部分进行给药和/或以共药(codrug)形式给药。在一些实施方案中，本专利技术提供了包括将细胞与IL-8模拟物接触的方法，其中这样的接触包括将IL-8模拟物与细胞在体外进行结合。在其它实施方案中，提供了制品，并且包括了含有IL-8模拟物的组合物、对个体进行组合物给药以及监视所述个体的指导说明。所述制品还提供了作为联合治疗的部分和/或作为共药的第二试剂的给药。附图的简要描述附图说明图1所示为CXCR2受体与作为竞争性配体的IL-8模拟物的结合。图2所示为治疗后1小时后，对于不同剂量IL-8模拟物a161(SEQ IDNO1647)(“实验模拟物”)给药的循环嗜中性粒细胞计数反应。图3描述的是对于所述实验模拟物给药反应的循环嗜中性粒细胞计数升高的动力学。图4所示为对于不同剂量所述实验模拟物给药的循环造血祖/干细胞反应。图5所示为对于所述实验模拟物给药反应的诱导的循环造血祖/干细胞的升高。具体实施例方式本专利技术涉及人CXC趋化因子IL-8新模拟物的组合物及其应用。本专利技术的趋化因子模拟物是指“IL-8模拟物”。出于本专利技术的目的，所述的IL-8模拟物可以是其类似物、同源物、前药、共药、代谢物、同族物、变体、盐及上述的组合，或人CXC趋化因子IL-8的删减形式。术语“变体”是指对多肽的修饰，使得这些多肽得以保持其结合性质，这样的修饰包括但不限于其中一个或更多个氨基酸被其它氨基酸所取代的保守性取代；对结合性质或二级结构具有最小程度影响的氨基酸的缺失或添加；与连接物的结合；翻译后修饰，例如，官能团的加添加。这样的翻译后修饰的来自包括但不限于对下述修饰基团的添加，该添加是通过以下过程进行的，该过程例如糖基化、乙酰化、磷酸化、脂肪酸修饰、多肽间的二硫键形成、生物素化、PEG化、以及这些过程的组合。术语“保守性修饰变体”是指保守性的氨基酸取代，即被具有相似电荷密度、亲水性/疏水性、大小、和/或构象的氨基酸所取代的氨基酸，例如异亮氨酸取代缬氨酸。相比较而言，“非保守性修饰变体”是指这样非保守性氨基酸取代，即被具有不同电荷密度、亲水性/疏水性、大小、和/或构象的氨基酸所取代的氨基酸，例如苯丙氨酸取代缬氨酸。可将IL-8模拟物设计为包括广泛的多种修饰体，以在个体疾病的治疗中或疾病的一种或更多种症状的改善中提供诊断、治疗和/或预防的作用。术语“个体”和“患者”在本专利技术中是交替使用的，指得是包括哺乳动物的动物，该哺乳动物包括但不限于非灵长类，例如牛、猪、马、猫、狗、大鼠和小鼠；以及灵长类动物，例如猴子或人。IL-8模拟物可被诊断地、预防地、治疗地使用，或者在较广泛范围的疾病中产生改善性作用。被IL-8模拟物作用的细胞包括但不限于内皮细胞、白细胞、红细胞、巨核细胞、干细胞、祖细胞、以及上述细胞的组合本文档来自技高网...
【技术保护点】
包括ＩＬ－８模拟物的组合物，所述模拟物选自ＳＥＱＩＤＮＯ：９至ＳＥＱＩＤＮＯ：１６２，ＳＥＱＩＤＮＯ：１６４１至ＳＥＱＩＤＮＯ：１６７５，变体ａ１５５至变体ａ３４２以及其保守修饰的变体，原药，共药及其组合，其中：Ｒ↓［Ｎ］独立地选自氢、取代的脂肪烃基、未取代的脂肪烃基、杂脂肪烃基、直链脂肪烃基、支链脂肪烃基、环脂肪烃基、饱和或不饱和脂肪烃基；或取代的芳基，未取代的芳基或杂芳基，（聚乙二醇）ＰＥＧ以及上述的衍生物，上述的组合；Ｒ↓［Ｃ］独立地选自氢、取代的脂肪烃基，未取代的脂肪烃基，杂脂肪烃基，直链脂肪烃基，支链脂肪烃基，环脂肪烃基，饱和或不饱和脂肪烃基；或取代的芳基，未取代的芳基或杂芳基，ＰＥＧ以及上述的衍生物，上述的组合；Ｘａａ↓［１］独立地选自任意的Ｌ－或Ｄ－天然氨基酸和任意的非天然氨基酸；Ｘａａ↓［２］独立地选自任意的Ｌ－或Ｄ－天然氨基酸和任意的非天然氨基酸；Ｘａａ↓［３］独立地选自Ｌ－Ｐｒｏ、Ｄ－Ｐｒｏ、Ｐ↑［＊］、Ｂｔｄ以及任意的Ｌ－或Ｄ－天然氨基酸和非天然氨基酸；Ｘａａ↓［４］独立地选自Ｐ↑［＊］、Ｂｔｄ以及任意的Ｌ－或Ｄ－天然氨基酸和任意的非天然氨基酸，其中，Ｐ↑［＊］如下式所示：＊＊＊，且Ｂｔｄ如下式所示：＊＊＊，其中ｚ独立地选自氢、取代的脂肪烃基、未取代的脂肪烃基、杂脂肪烃基、直链脂肪烃基、支链脂肪烃基、环脂肪烃基、饱和或不饱和脂肪烃基；或取代的芳基、未取代的芳基或杂芳基，ＰＥＧ以及上述的衍生物，上述的组合；Ｘａａ↓［５］独立地选自具有能够与Ｘａａ↓［６］环化的功能侧链的任意的Ｌ－或Ｄ－天然氨基酸和任意的非天然氨基酸；Ｘａａ↓［６］独立地选自具有能够与Ｘａａ↓［５］环化的功能侧链的任意的Ｌ－或Ｄ－天然氨基酸和任意的非天然氨基酸；及所述的连接物任意包括任何天然和非天然氨基酸，其中Ｒ↓［Ｌ］独立地选自取代的脂肪烃基、未取代的脂肪烃基、杂脂肪烃基、直链脂肪烃基、支链脂肪烃基、环脂肪烃基、饱和或不饱和脂肪烃基；或取代的芳基，未取代的芳基或杂芳基，ＰＥＧ以及上述的衍生物，上述的组合。...
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：艾哈迈德梅尔祖克，黄俊杰，哈桑萨拉里，
申请(专利权)人：凯莫凯恩治疗公司，
类型：发明
国别省市：CA[加拿大]
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