大容量组织阵列制作方法技术

本发明专利技术大容量组织阵列制备方法是首先制备多张组织阵列切片，其特征是把多张组织阵列切片排列在同一张载玻片上；然后在载玻片上滴加４３～４９℃的水将组织阵列切片展开；再排出载玻片上的水，使切片贴在载玻片上；最后在６０℃下加热１－２小时用二甲苯脱蜡。本发明专利技术制作出的组织微阵列容量大，制备简单方便；同时采用了在玻片上滴温水的展片方法，使展片效果易于控制。并且微阵列中包含的标本样本大，检测时更能弥补发生在同一亚组组织同在一个微阵列中可能出现的假阴性结果的影响。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物芯片领域，具体涉及。
技术介绍
组织微阵列(tissue microarray，TMA)是将数十个到上百个的组织样本整齐有序地排列在同一张载玻片上而形成的微缩组织切片，所以又称组织芯片(tissue chip)技术。它是将若干石蜡包埋块上的各种典型组织转移到一个新石蜡块上重新构建微型化高通量组织阵列。用该组织微阵列块进行组织切片，可在原位对众多的肿瘤组织进行DNA、RNA及蛋白质水平进行高通量的研究。对于通过免疫细胞化学、免疫组织化学(IHC)、荧光原位杂交(FISH)等方法筛选标志而言，组织微阵列是一个理想的手段。该技术不仅有助于肿瘤表征、快速筛选癌的基因扩增等，而且还可以进一步分析经过cDNA微阵列鉴定的新基因在肿瘤中的表达特征，评价其诊断和判定预后的意义，是一种快速经济的评价生物标志的方法。传统制作组织微阵列的方法是将待检测的组织排列于同一受体蜡块内。因为蜡块大小限制，所能排列组织芯的数目是有限的，一般在一张组织芯片上适宜做做200-400个点，文献报道(Moch H，Kononen T，Kallioniemi OP et al.Tissue microarrayswhat will they bring tomolecular and anatomic pathology.Adv Anat Pathol，2001，814-20.)最多是1000个组织芯。通过增加组织芯数目提高阵列容量就存在切片难以切全或切片困难等问题。目前制作微阵列的贴片方法有两种。一种是胶带法用胶带粘贴连续的TMA，然后转移到涂有聚合胶的载玻片上，用滚筒轻轻压平，使胶带上的组织紧紧粘在玻片上，紫外线照射2min，再用特制的去油污洗液浸泡，使胶带从玻片上脱离。另一种是水中展片法贴片方式就象日常工作中的石蜡切片贴片法，将4μm连续切片在温水中展开，再贴于玻片上。采用胶带方法存在问题主要是胶带很难从玻片上分离，经常会带一部分组织下来，造成贴片不完整，而且操作有一定难度，价格也较昂贵。水中展片法存在的问题是难以控制水温，使组织阵列切片易于弥散或不能充分展开。
技术实现思路
针对现有技术的缺点，本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种大容量组织阵列的制作方法。本专利技术解决上述技术问题的技术解决方案是一种，含有以下步骤首先制备多张组织阵列切片，其特征是把组织阵列切片排列在同一张载玻片上；然后在载玻片上滴加43～49℃的水，展开组织阵列切片；再排出载玻片上的水，使切片贴在载玻片上；最后在60℃下加热1～2小时后用二甲苯脱蜡(参见图1)。本专利技术所述的组织阵列切片其中含组织芯的石蜡膜周边向外延伸一空白石蜡膜凸起至载玻片的边缘外。所述空白石蜡膜凸起的长度以将组织阵列切片放置到载玻片上时，其端头能够伸至载玻片边缘外为宜(如图3所示)。本专利技术中所述的组织阵列切片上含有组织芯的部分为矩形。本专利技术所述的组织阵列切片的制备方法，采用本领域常用的组织阵列切片的制备方法。本专利技术所述的组织阵列切片的制备方法，可以是将包裹组织芯的石蜡在40℃下干烤10min，然后-20℃2冷冻30min后进行切片。本专利技术所述组织阵列切片的制备方法，具体步骤是将含组织芯的石蜡块在40℃下干烤10分钟，然后-20℃冷冻30分钟后进行切片；再切除组织芯1上下及左边的空白蜡膜，最后切除右边下部一半的空白蜡膜，保留上部的空白蜡膜形成一凸起2(参见图2)。本专利技术所述组织阵列切片中的组织可以是相同的，也可以是不相同的。本专利技术所述组织阵列切片中的组织可以是慢性扁桃体炎组织、淋巴结反应增生、淋巴瘤、鼻咽癌、大肠癌、肺癌组织、乳腺癌其中一种或两种以上。本专利技术中所滴加的水的温度最好是45℃。本专利技术，将多个组织阵列切片聚合在同一载玻片上，制作出的组织阵列容量增大，可以同时在同一张载玻片上进行更大样本量的实验，节约试剂及时间。同时本专利技术，在载玻片上滴温水，使石蜡软化，同时组织切片在水的表面张力作用下容易展片。本专利技术制作出的组织阵列容量大，制备简单方便；同时采用了在玻片上滴温水的展片方法，使展片效果易于控制。微阵列中包含的标本样本大，检测时更能补偿发生在同一亚组组织同在一个微阵列中可能出现的假阴性结果的影响。组织微阵列可进一步应用于免疫组织化学染色，mRNA原位杂效，荧光原位杂交(FISH)等检测。在进行mRNA原位杂交检测时可以用经DEPC处理过的水，避免RNA的降解。附图说明图1制作大容量组织阵列的方法示意图；图2一种具体的含组织芯的组织阵列切片结构示意图，图中虚线为具有组芯部分与空白部分的分界线；图3在载玻片上整齐排列含有组织芯的组织阵列切片示意图；图4本专利技术大容量组织阵列未染色前示意图；图5本专利技术大容量组织阵列染色(HE染色)后示意图；图6一例弥漫性大B细胞淋巴瘤的组织芯放大图(免疫组化检测CD20蛋白表达)；图7一例弥漫性大B细胞淋巴巴瘤的组织芯放大图，放大1000倍(FISH检测bcl2/Igh基因重排)；图8一例鼻咽癌的组织芯放大图，放大400倍(mRNA原位杂交检测KIAA1173基因)。具体实施例方式以下实施例使本专业技术人员更全面地理解本专利技术，但不以任何方式限制本专利技术。实施例1一、组织阵列切片的制备每例标本在标记区域内随机取4条组织芯。在组织样本填入蜡孔时记录每个样本在二维阵列中的具体位置，并在一定位置上标记出组织微阵列的方位。每例空白蜡块做成19×17个点，最后一排少打三个点做为阵列方位的标记。每个阵列内可有320个组织芯，共制做了8个含有320个组织芯的蜡块。将通过上述方法制作的8个蜡块在40℃下干烤10分，然后-20℃冷冻30min，利用组织切片机制出含有组织芯的石蜡膜，然后切除组织芯1上下及左边的空白蜡膜，最后切除右边下部一半的空白蜡膜，保留上部的空白蜡膜形成一凸起2(参见图2)。所述的切片厚4微米。二、大容量组织微阵列的制作将上述制备的组织阵列切片排列在载玻片上(如图3)；用加样器吸取45℃温水，滴注于载玻片表面，这时凸起2会因水及重力的作用向下弯曲，贴于载玻片的边缘，使组织阵列片固定，没有凸起的部分会浮于水的表面而充分展开，然后轻轻向两侧倾斜载玻片，载玻片上的水会从组织芯外侧切除空白蜡膜的地方排出，使组织阵列切片贴于载玻片上；将载玻片在60℃干烤1h，然后用二甲苯脱蜡得到大容量组织阵列(图4、图5)。通过以上方法，制备的大容量组织阵列中包含慢性扁桃体炎组织50例，淋巴结反应增生50例，淋巴瘤120例，鼻咽癌50例，大肠癌140例，肺癌组织110例，乳腺癌120例，共640个病例，每个病例在阵列中有4个组织芯，共有2560个组织芯。三、应用将得到的大容量组织阵列，对其进行免疫组织化学染色检测CD20的蛋白的表达(图6)，荧光原位杂交检测bcl-6/Igh基因重排(图7)，mRNA原位杂交检测KIAA1173基因的转录(图8)，均取得了良好的效果。实施例2一、组织阵列切片的制备收集了南方医院病理科1998-2004年外检的B细胞淋巴瘤石蜡包埋标本160例，对每例标本先进行切片，HE染色，确定标本中肿瘤集中的部位，并进行标记，然后在标记区域内随机取5条组织芯填入受体蜡块中。每例空白蜡块做成15×14个点，最后一排少打十个点做为阵列方位的标记，每个阵列内可有2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种大容量组织阵列制作方法，含有以下步骤：首先制备多张组织阵列切片，其特征是把组织阵列切片排列在同一张载玻片上；然后在载玻片上滴加４３～４９℃的水，展开组织阵列切片；再排出载玻片上的水，使切片贴在载玻片上；最后在６０℃下加热１～２小时后用二甲苯脱蜡。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋会勇，赵彤，
申请(专利权)人：南方医科大学，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]