本发明专利技术提供抗一种酶（以下在一些情况下称为ＡＤＡＭＴＳ－１３）的抗体（以下在一些情况下称为抗ＡＤＡＭＴＳ－１３抗体）识别的表位，所述酶特异性切割ｖｏｎ Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ因子（以下在一些情况下称为ｖＷＦ），并提供含这个表位结构域的多肽。位于由抗ＡＤＡＭＴＳ－１３抗体识别的ＡＤＡＭＴＳ－１３的氨基酸序列的４４９到６８７位的多肽或源于该多肽的肽片段。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及处方药物领域。具体的本专利技术涉及抗切割蛋白酶(以下也称为ADAMTS-13)的抗体(以下也称为抗ADAMTS-13抗体)识别的表位，所述蛋白酶特异性切割参与凝血的yon Willebrand因子(以下也称为vWF)，并提供含这个表位区的多肽。本专利技术也涉及识别这种多肽的抗体。本专利技术提供的含有抗ADAMTS-13抗体识别的表位区所述多肽或肽片段，提供了诊断存在或不存在抗ADAMTS-13自身抗体或该自身抗体的吸附剂或对该自身抗体阳性相关疾病的患者的ADAMTS-13替代疗法的可能性。
技术介绍
vWF是血管内皮细胞和巨核细胞产生的一种凝血因子，以多聚体结构存在(分子量500到20,000kDa)，其中每单个亚基由2050个氨基酸残基(约250kDa单体)组成，并通过S-S键结合。血液中vWF的浓度约为10μg/ml，通常越高分子量的vWF具有越高的比活性。作为凝血因子vWF有两种主要功能，其中之一的功能是作为结合并稳定凝血因子VIII的载体蛋白，另一种功能是帮助血小板粘附并聚集于损伤血管壁的血管内皮细胞下的组织以形成血小板血栓。血栓形成性血小板减少性紫癜(以下也称TTP)是在全身身体组织小动脉和毛细血管中引起血小板血栓的疾病。尽管当前医疗技术的进展，从1971到1991年与该疾病相关的死亡增加了约三倍。病理学上认为TTP是由于血管内皮细胞损伤和血小板在血管中聚集引起。免疫组化中观察到大量vWF存在于产生的血小板血栓中，且认为vWF在该疾病的发病机理中起关键作用。TTP被广泛的分为可能有遗传因素的家族性(先天性)TTP和特别在成年人中发生的获得性(特发性)TTP。正常或高分子量的vWF多聚体结构主要出现于TTP患者。特别的，异常大的vWF多聚体(ULvWFM)和大vWF多聚体(LvWFM)被认为在高剪切力下促进血小板聚集和微血栓形成的作用中起关键作用。另一方面，在健康个体的循环血中高剪切力作用下通过vWF切割蛋白酶的作用，已知vWF在842Tyrr和843Met之间的位置经过消化。因而，引起TTP的可能情形如下血浆中该蛋白酶的活性因某种原因减少，而ULvWFM或LvWFM的增加使血小板聚集加速，随后在血管中形成血小板血栓。2001年本专利技术人克隆了编码切割vWF的蛋白酶(日本专利公开(kokai)号2003-284570)，也称为ADAMTS-13，它是具有上述蛋白酶活性的活性体。下面概括有关ADAMTS-13分子结构的发现。从由起始密码子(ATG)编码的甲硫氨酸计数的残基数的位置在括号内表示为大概指导(见SEQ ID NO.1)。ADAMTS-13的结构域结构中在以作为弗林蛋白酶切割基序的RQRR结束的前肽之前有信号肽，随后是含reprolysin型锌螯合区域的金属蛋白酶结构域，所述区域由作为共有序列的HEXXHXXGXXHD(到氨基酸残基No.284(p285X))组成；通过蛇毒金属蛋白酶中发现的解整联蛋白样的结构域(到氨基酸残基No.386(W387X))，存在通常被认为对分子识别重要的约50到60个残基组成的第一个Tsp1基序(Tsp1-1)(到氨基酸残基448(Q449X))，继续连接到含作为其中的一个细胞粘附基序的RGDS序列的富含半胱氨酸区域(到氨基酸残基No.580(T581X))；并通过无半胱氨酸残基的由约130个氨基酸残基组成的间隔结构域(到氨基酸残基No.687(W688X))，接上另外的Tsp1基序重复序列(Tsp1-2到Tsp1-8)，随后是据说首先在补体成分C1r或C1s中发现的CUB结构域1和2。顺便要说的是，在ADAMTS-13中至今未发现主要的中和表位区域。此外，也没有建立抗所述蛋白酶的自身抗体阳性患者的方便的诊断方法。根据这种情况，本专利技术的第一个目的涉及与鉴定ADAMTS-13上的中和性表位和由此产生的抗体，主要是指自身抗体的中和/吸附剂相关的专利技术。本专利技术的第二个目的是提供生产中和/吸附剂的方法。本专利技术的第三个目的是提供中和/吸附剂的用途。本专利技术的第四个目的是提供生产全长或部分修饰的vWF特异性切割蛋白酶分子的方法，所述分子通过修饰所述表位获得。本专利技术的第五个目的是提供全长或部分修饰的vWF特异性切割蛋白酶分子的用途，所述分子通过修饰所述表位获得。直到如今，血浆去除法一直用于治疗vWF特异性切割蛋白酶先天性缺陷的患者和获得性产生抗所述蛋白酶抗体的患者。因此，需要建立用纯vWF特异性切割蛋白酶如纯化或遗传改变的所述蛋白酶的替代疗法。已经报道家族性TTP患者先天性缺乏vWF特异性切割蛋白酶而非家族性TTP患者是由获得性产生抗所述蛋白酶的自身抗体所导致。因而，用所述蛋白酶的替代疗法优选用于家族性TTP患者(事实上向患者给予血浆)，而非家族性TTP患者要求通过血浆置换去除自身抗体并补充所述蛋白酶。然而，在给予ADAMTS-13以向抗所述蛋白酶的自身抗体阳性的患者补充时，所述抗体是一种自身抗体，在患者血液中存在，可中和给予的蛋白酶。结果导致所述蛋白酶丧失酶活性并有显著的浓度降低。然而，使用一种中和性区域允许将所述蛋白酶给予抗所述蛋白酶抗体阳性的患者，所述中和性区域由确定针对抗在先申请(日本专利申请号2002-279924)中披露的ADAMTS-13抗体的表位的方法鉴定或者通过本专利技术的方法鉴定，或者也可使用可通过本专利技术使用的竞争性抑制试验的Western印迹新鉴定的中和性表位区域的部分修饰分子的制备物；或者另外的允许通过含由本专利技术提供的该中和区域的多肽等吸附所述抗体。
技术实现思路
作为在上述情况下为获得分离和鉴定切割vWF蛋白酶而进行的勤奋研究的结果，本专利技术人成功纯化和分离了此前未报道的感兴趣的切割vWF蛋白酶并鉴定了一种成熟蛋白的氨基酸序列和在先申请(日本专利公开(kokai)号2003-284570)中的编码该氨基酸序列的基因。基于使用在先申请(日本专利公开(kokai)号2003-284570)中所述的遗传重组技术获得的发现，本专利技术人鉴定了可能是活性表达关键的区域(日本专利申请号2002-279924)。从本专利技术中使用基于这些发现制备的突变分子分析由获得性TTP患者抗ADAMTS-13自身抗体识别的主要中和性区域的结果中，已经发现所述自身抗体识别的所述区域与上述可能是活性表达关键的区域相一致并位于从富含半胱氨酸的区域(约499位)到间隔区域(约687位)的区域。因此，对于抗ADAMTS-13抗体，本专利技术提供的主要中和性表位区域的主要要求是在组成ADAMTS-13的多肽中从富含半胱氨酸的区域(约499位)到间隔区域(约687位)的区域或者具有等同氨基酸序列的肽片段。也就是说，本专利技术涉及含有von Willebrand因子特异性切割蛋白酶(以下也称为vWFCP或ADAMTS-13)中的中和性表位区域的多肽，它由抗所述蛋白酶的的抗体识别，或者由所述多肽来源的肽片段。权利要求1中要求保护的所述多肽的中和性表位区域或由所述多肽来源的肽片段位于SEQ ID No.1所示的氨基酸序列中449位到687位的区域。本专利技术进一步涉及含SEQ ID No.1所示的氨基酸序列中449位到687位的氨基酸序列的多肽，或者由所述多肽来源的肽片段。本专利技术也涉及包含SEQ ID No.本文档来自技高网...
【技术保护点】
含有ｖｏｎＷｉｌｌｅｂｒａｎｄ因子－特异性的切割蛋白酶（以下也称为ｖＷＦＣＰ或ＡＤＡＭＴＳ－１３）中的中和性表位区域的多肽，所述多肽由抗所述蛋白酶的抗体识别，或者来源自所述多肽的肽片段。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：副岛见事，中垣智弘，松本雅则，藤村吉博，
申请(专利权)人：财团法人化学及血清疗法研究所，
类型：发明
国别省市：JP[日本]
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