溶血试样的稳定化方法技术

本发明专利技术提供即使放置于室温下在之后进行的测定中，对测定精度没有影响的溶血试样的稳定化方法和在该稳定化方法中使用的溶血试剂溶液。使用含有表面活性剂且溶解了二氧化碳的溶血试剂溶液使血球溶血来制备溶血试样。只要是如此制备的溶血试样，则例如即使保存在室温下，也可以以与刚刚制备之后的溶血试样同样的测定精度进行糖化蛋白质等的测定。在２～３５℃下的前述溶血试样中的二氧化碳的溶解浓度为８ｍｍｏｌ／Ｌ或以上。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种。
技术介绍
在血球中的糖化蛋白质中，特别是糖化血红蛋白(HbA1c)反映生体内的血糖值的过去的历史，因此是糖尿病的诊断或治疗等中的重要指标。糖化血红蛋白例如可以通过高速液相色谱(HPLC)法、微型柱(minicolumn)法、免疫法等测定血红蛋白的糖化率，最近，还研究出了使用糖化氨基酸氧化还原酶(FAOD)的酶法测定方法。前述酶法，首先，将红细胞溶血以制备溶血试样，将果糖基氨基酸氧化酶(以下称为″FAOD″)加到此溶血试样中，使其作用于糖化血红蛋白的糖化部分并产生过氧化氢。此过氧化氢的量对应于前述糖化血红蛋白的糖化量。然后，将过氧化物酶(以下称为″POD″)和还原剂加到此试样中，将前述POD作为催化剂在前述过氧化氢和前述还原剂之间发生氧化还原反应。此时，如果使用通过氧化而显色的基质作为前述还原剂，则可以通过测定这种显色来测定前述过氧化氢量，结果是，可以得知血球中的糖化血红蛋白量。这种酶法适用于实际的临床医疗领域。
技术实现思路
但是，这种酶法会产生以下的问题。也就是，在测定糖化蛋白质时，如前所述，首先，必须制备溶血试样，但是并不一定在溶血试样刚刚制备完之后就立即测定糖化蛋白质。即，在收集一定数量的溶血试样后，再将它们全部用于测定，根据各溶血试样的不同，则在从制备到测定开始的时间不同，由于将这样的溶血试样的放置，则会发现有测定精度下降的现象。具体地，即使是相同的溶血试样，在将其放置在室温下时，根据放置时间，会发现测定值随时间上升，产生无法得到正确的糖化蛋白质的质量的问题。为了避免这种问题、维持优异的测定精度而要求在刚刚制备完溶血试样之后就立即进行对糖化蛋白质的测定。但是，在临床医疗的领域中，必须处理大量的检测体，因此对各检测体来说，在刚刚制备完溶血试样之后就立即进行测定，在效率方面也有实际的困难。因此，本专利技术的目的在于例如提供即使放置在室温下，对在以后所进行的测定中的测定的精度也不会产生影响的。为了实现前述目的，本专利技术的，其特征在于在使血球溶血的溶血试样中，含有选自碳酸离子、碳酸氢离子和二氧化碳中的至少一种。本专利技术者等对将溶血试样放置在室温下时，对前述的糖化血红蛋白的测定值随着时间增加的原因进行了认真研究。其结果是，可以推断由于在放置溶血试样时，大气中的二氧化碳溶解到前述溶血试样中，溶解的二氧化碳导致前述试样中的血红蛋白结构缓慢变化，伴随着这种变化，蛋白酶引起的消化反应速度产生变化，或者血红蛋白自身的氧化还原能也发生变化，因此前述的FAOD或POD引起的氧化还原反应受到影响，其结果是，测定值上升。基于这种推断进行研究的结果是，本专利技术者等发现通过使二氧化碳溶解于溶血试样中，或者通过使溶血试样含有碳酸离子或者碳酸氢离子，可以抑制前述这种溶血试样的放置而产生的测定值的经时变化，从而完成本专利技术。所有本专利技术的专利技术人首次发现通过这样的溶血试样的放置，测定值随时间变化而上升；推断这种上升的原因是溶解了二氧化碳；以及通过使溶血试样预先含有二氧化碳或碳酸离子或者碳酸氢离子可以解决前述课题。如果根据这种，就不需要刚刚制备完之后就立即通过酶反应进行测定，因此在前述的临床领域中，可以非常有效地测定以糖化血红蛋白为代表的糖化蛋白质，并可以认为其是非常有用的方法。另外，前述的本专利技术的，例如，可以使用一种含有表面活性剂的血球溶血用的溶血试剂溶液，其进一步含有选自碳酸离子、碳酸氢离子和二氧化碳中的至少一种。如果使用这种溶血试剂溶液，则可以容易地进行前述的本专利技术的溶血试样的稳定化，所以可以认为，例如在临床领域等测定糖化蛋白质时这种溶血试剂溶液是非常有用的试剂。另外，通过本专利技术的可以进行溶血试样的制造。附图说明图1是表示根据本专利技术制备的溶血试样的一个实施例中，前述溶血试样的保存时间和测定值变化的关系的曲线图。图2是表示在前述实施例中，其它的溶血试样的保存时间和测定值变化的关系的曲线图。图3是表示在前述实施例中，另外的溶血试样的保存时间和测定值变化的关系的曲线图。具体实施例方式如前所述，本专利技术的的特征在于在使血球溶血的溶血试样中，含有选自碳酸离子、碳酸氢离子和二氧化碳中的至少一种。另外，在本专利技术中，所述的溶血试样中含有二氧化碳是指在前述溶血试样中溶解有二氧化碳。首先，对在溶血试样中溶解二氧化碳而将前述溶血试样稳定化的方法的一个例子进行说明。对于前述溶血试样中的二氧化碳的溶解浓度，例如可以根据用于溶血处理的血球量等适当确定，例如，在2～35℃时，该溶解浓度为约8mmol/L或以上，优选为约10～80mmol/L，更优选为约15～80mmol/L。具体地，前述溶血试样中的血球浓度为约5g/L时，二氧化碳的溶解浓度在约2～35℃下，例如该溶解浓度优选为约8mmol/L或以上，更优选为约10～80mmol/L，特别优选为约15～80mmol/L。另外，不含二氧化碳的溶血试样(血球浓度为5g/L)的二氧化碳浓度通常为0.4～1mmol/L左右。在本专利技术中，优选在前述溶血试样中进一步含有表面活性剂。通过含有表面活性剂，例如，在测定糖化血红蛋白等糖化蛋白质时，可以有效地进行用于分解前述蛋白质的蛋白酶处理。另外，如前所述，由于二氧化碳的影响，例如，血红蛋白的消化速度可能会产生变化，但是如果添加表面活性剂，则可以进一步促进其消化反应。作为前述表面活性剂，没有特别的限制，例如，可以使用聚氧乙烯对-叔辛基苯基醚(Triton类表面活性剂等)、聚氧乙烯脱水山梨糖醇烷基醚(Tween类表活性剂等)、聚氧乙烯烷基醚(Brij类表面活性剂等)等非离子性表面活性剂，具体地，例如可以列举出TritonX-100、Tween-20、Brij35等。前述溶血试样中的表面活性剂的含有浓度例如优选为约6～40mmol/L，更优选为约10～40mmol/L，特别优选为约15～40mmol/L。具体地，在前述溶血试样中的血球浓度为约5g/L时，表面活性剂的浓度在约2～35℃下，例如为约8mmol/L，优选为约10～40mmol/L，更优选为约15～40mmol/L。在本专利技术的稳定化方法中，为了使二氧化碳溶解于溶血试样中，例如，优选进一步包括通过含有表面活性剂且溶解了二氧化碳的溶血试剂溶液使血球溶血的工序。通过使用这种溶血试剂溶液而使血球溶血，从而可以制备溶解了二氧化碳的溶血试样。血球的溶血例如可以向全血中添加前述溶血试剂溶液来进行，也可以从全血回收的血球(粒子)中添加混合前述溶血试剂溶液来进行。血球可以通过例如离心分离、血球分离膜等膜处理等现有公知的方法回收。前述溶血试剂溶液中的表面活性剂(A)和二氧化碳(B)的比例(摩尔比A∶B)没有特别的限制，优选为1∶0.5～1∶13，更优选为1∶2～1∶13，特别优选为1∶2～1∶3。前述溶血试剂溶液中的表面活性剂和二氧化碳的浓度，例如可以根据对血球的添加量和血球量适当确定，例如表面活性剂为约6～42mmol/L、二氧化碳为约8～84mmol/L，优选表面活性剂为约6.3～42mmol/L、二氧化碳为约8.4～84mmol/L，更优选表面活性剂为10～40mmol/L、二氧化碳为约10～80mmol/L，特别优选为表面活性剂为15～40mmol/L、二氧化碳为约15～80mmol/L。另外，前述二氧化碳的浓度例如是本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种溶血试样的稳定化方法，其包含在溶血试样中含有选自碳酸离子、碳酸氢离子和二氧化碳中的至少一种。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：平井香，米原聪，
申请(专利权)人：爱科来株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]