稻曲病菌的实时荧光定量PCR检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种检测稻曲病菌实时荧光定量ＰＣＲ的试剂盒及其应用。该试剂盒利用荧光探针（Ｔａｑｍａｎ）和正义引物、反义引物和阳性标准品，建立了实时荧光ＰＣＲ反应体系，可以快速、定量地检测稻曲病菌。适用于对农田环境中（包括土壤中越冬菌量以及稻田浮萍和水稻植株上）稻曲病菌进行实时监测；也可以用于水稻种子带菌检测以及比较稻曲病菌在不同水稻品种中的增殖速度。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种检测稻曲病菌的荧光定量ＰＣＲ试剂盒，该试剂盒包括：正义引物ＵＦ１、反义引物ＵＲ１、荧光探针（Ｔａｑｍａｎ）、１０×ＰＣＲｂｕｆｆｅｒ、１ｍｍｏｌｄＮＴＰ、２５ｍＭＭｇ↑［２＋］、ＴａｑＤＮＡ聚合酶（自制）组成。正义引物ＵＦ１序列为：５’－ＧＡＧＧＧＣＡＣＣＣＧＧＡＡＣＣＡＧ－３’，反义引物ＵＲ１序列为：５’－ＣＡＣＴＣＡＧＡＣＡＴＧＣＡＴＴＧＧＡＡＡＡＣＡ－３’，扩增片段为７７ｂｐ。荧光探针ＵＰ１序列为：５’ＦＡＭ－ＣＧＣＣＣＧＣＣＧＧＡＧＧＡＴＡＣＡＡＣＣＡＡＡ－ＴＡＭＲＡ３’，探针５’端标记荧光发射基团ＦＡＭ（６－羧基荧光素），靠近３’端标以荧光淬灭基团ＴＡＭＲＡ。标准阳性由插入ＩＴＳ区的ｐＵＣｍ－Ｔ载体转化大肠杆菌ＤＨ５α增殖后提取的质粒ＤＮＡ，ＤＮＡ经紫外分光光度计Ａ↓［２６０］定量并１０倍梯度稀释。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周永力，谢学文，徐建龙，王疏，黎志康，
申请(专利权)人：中国农业科学院作物科学研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]