治疗皮肤溃疡的方法技术

本发明专利技术公开了一种治疗皮肤溃疡的方法，该方法是用局部有效量的有生物活性的肝细胞生长因子ＨＧＦ与局部可接受的载体形成的组合物施于皮肤患处。局部可接受的载体包括选自水、植物油、动物油、矿物油、石油膏、蜡和聚合物的成分。采用表面等离子共振仪（ＳＰＲ）及ＳＰＲ生物传感器对ＨＧＦ进行检测，当被检测的ＨＧＦ浓度为０．０８μｇ／ｍｌ时，检测的信号均达到或超过１０ＲＵ时，认为被检测的ＨＧＦ是有生物活性的。本发明专利技术方法对皮肤溃疡病，尤其是对经传统方法久治不愈的慢性皮肤溃疡病能取得非常好的疗效。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种。
技术介绍
慢性皮肤溃疡特别是由静脉功能不全或糖尿病引起的皮肤溃疡一般很难治愈，该病局部常年流脓红肿、疼痛，感染坏死严重者可造成机体(如足趾)坏死脱落，更甚者并发毒血症，败血症可危及生命，此种情况常需截趾或小腿以保性命，给病人造成终生残伤。如何使这种病得到有效治疗一直是医学药界的一大难题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种有效。本专利技术是用局部有效量的有生物活性的肝细胞生长因子HGF与局部可接受的载体形成的组合物施于皮肤患处。本专利技术局部可接受的载体包括选自水、植物油、动物油、矿物油、石油膏、蜡和聚合物的成分。本专利技术所述的HGF为治疗对象人或哺乳动物相应的内源性HGF，其中人HGF(hHGF)的局部有效量至少为4ng/ml。本专利技术提供的肝细胞生长因子(HGF)的生物活性检测方法是采用表面等离子共振仪(SPR)及SPR生物传感器对HGF进行检测，当被检测的HGF浓度为0.08μg/ml时，检测的信号均达到或超过10RU时，认为被检测的HGF是有生物活性的，所述SPR生物传感器是多克隆抗HGF抗体、c-Met、单克隆抗HGF抗体分别修饰到BIACORECM5芯片表面构成的。从本专利技术技术方案可以看出，它要求的HGF因子是具有生物活性的HGF，而HGF的一级结构表明，HGF在细胞内合成由728个氨基酸组成的多肽，信号肽(31个氨基酸残基)被切除后分泌至细胞外，在Arg407-Val408间切断，重链和轻链再通过S-S结合成成熟的HGF。重链的氨基酸末端是焦谷氨酸，近氨基末端为发夹环及4个环饼机构；轻链具有与丝氨酸蛋白酶的功能域相同的序列。HGF需要进一步活化，才具有生物活性，由细胞分泌的单链pro-HGF为非活性型，其Arg407-Val408间一旦被切断，方能形成活性型HGF。已知的活化因子有尿激酶、组织型纤溶酶原激活物(tpA)及XII a凝血因子及新发现的HGF活化因子(HGFA)。利用这些活性因子，我们可以使HGF进一步活化，而得到具有生物活性的HGF。HGF在体内广泛分布。它是多效性因子，具有多种生物学活性，现已发现HGF是一种上皮特异性生长因子，在体内外血管细胞均发现了局部HGF及其特异性受体c-met的存在，HGF对上皮细胞存在三种作用1)促细胞分裂剂(mitogen)，可以提高靶细胞DNA的合成；2)促细胞运动剂(motogen)，提高细胞迁移；3)促形态形成剂(morpho-gen)，保持细胞的正常形态。另外，HGF即具有内分泌(endocrine)作用，又具有旁分泌(paracrine)作用，即作用于邻近的靶细胞。HGF的靶细胞可以完全发育成上皮细胞。原癌基因编码蛋白c-met是HGF的特异性细胞膜受体。在细胞受到损伤时，尤其在肝损伤时，HGF含量升高更明显。HGF对皮肤细胞也具有作用。当在培养基中加入大于1.0ng/ml的HGF时，在人皮肤中的成纤维细胞的DNA合成会成倍的增加，而用HGF的单克隆抗体则可以抑制这种作用。专利技术人据此把具有生物活性的HGF与局部可接受载体组合后施于患者的皮肤患处，对皮肤溃疡病，尤其是对经传统方法久治不愈的慢性皮肤溃疡病取得了非常好的疗效。附图说明图1为HGF(浓度分别为20μg/ml、4μg/ml、0.8μg/ml、0.08μg/ml)与多克隆抗HGF抗体的相互作用图2为HGF(浓度分别为20μg/ml、4μg/ml、0.8μg/ml、0.08μg/ml)与c-Met的相互作用图3为HGF(浓度分别为20μg/ml、4μg/ml、0.8μg/ml、0.08μg/ml)与单克隆抗HGF抗体的相互作用图4为HGF对细胞损伤修复实验结果。具体实施例方式实施本专利技术首先是要对HGF是否有生物活性进行检测，本专利技术采取的方法是运用SPR(表面等离子体共振)仪器BIACORE检测。将多克隆抗HGF抗体、c-Met、单克隆抗HGF抗体分别修饰到BIACORE CM5芯片表面，其修饰过程包括三步1)芯片表面激活注入70μl50mM NHS和200mM EDC，使芯片表面的葡聚糖被羧甲基化，在生理pH值下形成负电网；2)生物材料(多克隆抗HGF抗体、c-Met、单克隆抗HGF抗体)的修饰将蛋白质(多克隆抗HGF抗体、c-Met、单克隆抗HGF抗体)溶解于修饰缓冲溶液中，修饰缓冲溶液的pH值低于蛋白质的pI值，带正电的蛋白质分子由于静电吸附作用而聚集在葡聚糖上；3)封闭注入70μl1M的ethanolamine hydrochloride将未结合蛋白质分子的位点封闭，最大限度减少非特异性结合的可能。生物分子(多克隆抗HGF抗体、c-Met、单克隆抗HGF抗体)修饰完成后，即可对HGF进行检测，当被检测的HGF浓度为0.08μg/ml时，检测的信号达到或超过10RU时，认为被检测的HGF是有生物活性的。确定了HGF是否有生物活性后，还应使局部可接受载体具备以下性质1、无毒；2、使用HGF在直接施用到皮肤伤口时保持稳定和生物活性(bioavailable)。可采用常规方法，将HGF溶解于液体中、分散或乳化于介质中而形成液体制剂、软膏剂、凝胶，或固体例如常规化妆晚霜、粉底霜、防晒剂、遮光剂、润手乳液、化妆和化妆基底、面罩等。所述组合物包含有其他任选的适宜成分，例如维生素A、B、C和E，羊毛脂，芦荟，色素、雌激素、α-酮酸例如丙酮酸、乳酸或羟基乙酸、对羟苯甲酸甲酯或对羟苯甲酸丙酯等。适宜的局部可接受的载体包括水，植物油，动物油，矿物油，凡士林(石油膏)有机和无机蜡例如微晶蜡、石蜡或地蜡，天然聚合物例如黄原胶(xanthane)、明胶、纤维素、胶原、淀粉、或阿拉伯树胶，下述的合成聚合物等。优选地，所述载体是水混溶性(miscible)的载体成分包括一种或更多上述适宜成分，还包括缓释或迟释放载体，包括含水、水分散剂或水溶性成分，例如脂质体、微海绵(microsponge)、微球或微囊、水性基质软膏、W/O或O/W型乳剂、凝胶等。专利技术人通过实验得出在本专利技术方法采用的组合物中至少含有4ng/ml的有生物活性的HGF，最好是含有4ng/ml-10ng/ml 有生物活性的HGF，这个含量能使一些经传统方法久治不愈的慢性下肢皮肤溃疡的患者达到痊愈。自然地，当采用本专利技术方法和组合物治疗人时，优先采用人HGF(hHGF)。hHGF的结构，有文献记载，参见Nakamura T，Nishizawa T，Hagiya M，et al.Molecular cloning andexpression of human hepatocyte growth factor.Nature，1989；342(6248)440-443。如果用于治疗其他哺乳动物，则优先采用待治疗动物的内源性HGF。以下是本专利技术的实验实例，但并不作为对本专利技术范围的限制实施例1、运用BIACORE对HGF的生物活性的检测检测HGF的生物活性的表面等离子共振(SPR)仪器Biacore 2000和CM5芯片购于瑞典Biacore AB公司；多克隆抗HGF抗体、c-Met、单克隆抗HGF抗体购于RnDSystems公司，将上述物质分别修饰到BIACORE CM5芯片表面，其修饰过程包括三步1)芯片表面激活(注入70μl 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗皮肤溃疡的方法是：用局部有效量的有生物活性的肝细胞生长因子ＨＧＦ与局部可接受的载体形成的组合物施于皮肤患处。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：江铁山，
申请(专利权)人：江铁山，
类型：发明
国别省市：43[中国|湖南]