免疫反应测定方法及该方法所用的试剂、试剂盒以及光学单元技术

本发明专利技术提供了在酸性条件下，测定检体中的被测物质的方法。该方法的特征在于，包括混合上述检体和上述检体中被测物质的抗体而形成反应系的工序Ａ和测定上述反应系中抗原抗体反应的工序Ｂ，上述反应系的ｐＨ设定在酸性，并且上述抗体的ｐＩ和上述反应系的ｐＨ之间的关系设定为ｐＩ＞ｐＨ，通过本发明专利技术，在以酸性缓冲液为基础的免疫测定反应系中，特别是可提高抗原低浓度范围内的精密度。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及可在酸性PH条件下，测定检体中所含被测物质的免疫反应测定方法及该方法所用的试剂、试剂盒以及光学单元。
技术介绍
在医疗、临床检查的领域中，为了诊断各种疾病以及调查病状的过程，普遍进行对人体体液中存在的各种疾病特征性蛋白质的调查。例如，如个体被溶血性链球菌感染，则在血液中产生抵抗其的称之为ASO的抗体。因此，通过进行以血液中的该抗体的量为测定项目的试验，可以调查出该个体是否被溶血性链球菌感染。另外，已知在RA(慢性关节风湿症)患者的血清中，RF(风湿症因子)高频出现。RA患者的血清中的IgG糖链与健康者IgG糖链比较，发生了半乳糖显著缺失的糖链异常。自RA发病初期开始，就产生半乳糖缺失的IgG，与其相应的自身抗体这被认为与关节炎等的发病有关。因此通过使用半乳糖缺失的IgG抗原进行以血清中的抗半乳糖缺失IgG抗体为测定项目的试验，可诊断RA。在这些蛋白质的含量的测定中，以特异性高的免疫反应测定方法为主被广泛应用。其中，免疫散射比浊法(或，免疫比浊法)是检测由抗原和抗体的特异反应生成的凝集复合体的方法，由于基本是在均一的溶液中进行的，因此是定量性较好的方法。另外，由于是不用分离抗原抗体复合体和未反应的抗原及抗体就可测定的方法，因此操作容易。另一方面，在免疫散射比浊法的测定中，一般在抗原过剩的范围中会发生前带现象。因此，存在有的测定项目在需要的测定浓度范围不能正确测定的问题。“前带现象”也称为“带现象”，是与抗原可抗体形成最大的凝集复合体的当量域相比，当抗原和抗体任一者过剩存在时，难以生成凝集复合体，测定值(例如，散射光强度)比原值小的现象。在实际的均一系的免疫反应测定中，使用抗体测定作为被测物质的抗原的浓度的情况很多。一般，在不发生前带现象的抗原浓度范围中，生成由抗原和抗体相互结合的复合体形成的巨大的分子链(凝集复合体)，由于在抗体浓度一定时，其量和大小依赖于抗原浓度而增加，因此该分子链的量和大小的变化可作为光学的量的变化(例如，散射光的强度或透过光的强度的变化)测定，这样就可以定量测定抗原浓度。但是，在抗原过剩的范围中，由于抗原对抗体过剩存在，因此抗体的抗原结合部位被饱和，难以通过抗原形成交联结构。因此，由于难生成上述的分子链，抗原抗体的复合体的量和大小的变化不能作为光学的量的变化而测得，测定值较小。结果，与低浓度的情况难区分。因此，如发生了前带现象，则不仅存在不能正确测定被测物质浓度的问题，而且还产生假阴性的问题。已有关于作为用于缓和在这种抗原过剩范围中所发生缓和前带现象的反应系，使用含有多元羧酸或多元羧酸盐的酸性缓冲剂的报道(例如，日本专利特开2003-66047号公报)。一般，由抗原抗体反应的测定多在中性到弱碱性的范围进行测定，但是在日本专利特开2003-66047号公报中，报道了通过在弱酸性条件下进行反应，可抑制前带现象，特别是在抗原过剩的宽范围中，可更正确地定量测定。专利技术的揭示如上述，使用酸性缓冲剂的免疫反应测定法，对解决在抗原过剩范围中的由前区现象所引发的问题优良。但是，另一方面，在抗原浓度为零时的测定值(空白值)却有增大的趋势。本专利技术就是鉴于这种情况完成的。即，本专利技术的目的是提供在以酸性pH条件下的抗原抗体反应为基础测定被测物质时，即使是在抗原浓度为低浓度的情况，也可高精度定量测定的免疫反应测定方法、其中使用的试剂、试剂盒以及光学单元(cell)。本专利技术人发现了后述的验证结果，即，在酸性的反应系中，通过选择抗体分子的pI和反应系中的pH使(抗体的pI值)＞(反应系的pH值)，可降低抗体分子的非特异的凝集，防止空白值的升高。这被认为是由下列原因引起的，即，通过按上述设定抗体的pI和构成反应系的溶液的pH，在溶液中各抗体分子带正电荷，这样由于带正电荷的抗体分子之间的电斥力可抑制抗体分子的非特异凝集。这样，特别是在抗原浓度低的情况下，由于如下情况被抑制，所述情况是在测定抗原抗体反应的反应量时除抗原抗体反应的反应量外，还将抗体分子之间的非特异的凝集反应量也测定在内，因此可期望提高S/N比，提高测定的精密度。因此，本专利技术提供了测定方法，该方法是在酸性pH条件下测定检体中的被测物质的方法，包括下述工序混合上述检体和上述检体中被测物质的抗体，从而形成反应系的工序A和测定上述反应系中抗原抗体反应的工序B，使上述反应系中的pH设定在酸性，并且上述抗体的pI和上述反应系中的pH的关系设定为pI＞pH。在本专利技术的测定方法的较好的实施方式中，在上述工序B中，测定上述被测物质和上述抗体之间形成的抗原抗体复合体的量。在本专利技术的测定方法的较好的实施方中，上述pI和上述pH的差为约0.5以上。上述pI和上述pH的差较好为在约1.0以上。更好为，pI和pH的差在约1.5以上。本专利技术的测定方法的较好实施方式中，上述反应系的pH在约4～6的范围。最好为，上述反应系的pH在约4.5～5.0的范围。本专利技术的测定方法的较好实施方式中，在上述工序A中，混合上述检体、上述抗体和缓冲剂而形成反应系。在本专利技术的测定法的较好实施方式中，上述反应系含有有机酸或有机酸盐。较好为，上述有机酸或有机酸盐为多元羧酸或三羧酸盐。更好为，上述多元羧酸或多元羧酸盐为三羧酸或三羧酸盐，或者二羧酸或二羧酸盐。本专利技术的测定方法的较好实施方式中，上述抗体是单克隆抗体、多克隆抗体或标记抗体。本专利技术的测定方法的较好实施方式中，上述测定的工序B中包括测定由上述复合体的量或大小引起的光学参数。另一方面，本专利技术提供了试剂，该试剂是用于在酸性条件下以抗原抗体反应原理为基础测定检体中的被测物质的试剂，其中含有上述被测物质的抗体，并相对应于上述酸性pH，调制上述抗体的pI使pI＞pH。本专利技术的试剂的较好实施方式中，上述pI和上述pH的差为约0.5以上。较好为，上述pI和上述pH的差为约1.0以上。更好为，上述pI和上述pH的差为约1.5以上。本专利技术的试剂的较好实施方式中，上述pH在约4～6的范围中。最好为，上述pH在约4.5～5.0的范围中。本专利技术的试剂的较好实施方式中，上述试剂含有有机酸或有机酸盐。较好为，上述有机酸或有机酸盐为多元羧酸或多元羧酸盐。更好为，上述多元羧酸或多元羧酸盐为三羧酸或三羧酸盐，或者二羧酸或二羧酸盐。本专利技术的试剂的较好实施方式中，上述试剂中含有的抗体是单克隆抗体、多克隆抗体或标记抗体。本专利技术的试剂的较好实施方式中，上述试剂以干燥的状态被提供。例如，可通过冷冻干燥被提供。其它较好的实施方式中，上述试剂作为溶液被提供。另一方面，本专利技术提供了测定用试剂盒，该试剂盒是在酸性条件下以抗原抗体反应原理为基础测定检体中的被测物质的试剂盒，其中含有缓冲液和含有被测物质的抗体的试剂，相对应于上述酸性pH，使上述抗体的pI为pI＞pH来调制上述试剂。本专利技术的试剂盒的较好实施方式中，上述pI和上述pH的差为约0.5以上。较好为，上述pI和上述pH的差为约1.0以上。更好为，上述pI和上述pH的差为约1.5以上。本专利技术的试剂盒的较好实施方式中，缓冲液的pH在约4～6的范围中。最好为，缓冲液pH在约4.5～5.0的范围中。本专利技术的试剂盒的较好实施方式中，上述缓冲液含有有机酸或有机酸盐。较好为，上述有机酸或有机酸盐为多元羧酸或三羧酸盐。更好为，上述多元羧酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
测定方法，所述测定方法是在酸性ｐＨ条件下测定检体中的被测物质的方法，其特征在于，包括混合上述检体和上述检体中的被测物质的抗体而形成反应系的工序Ａ以及测定上述反应系中的抗原抗体反应的工序Ｂ，上述反应系的ｐＨ设定在酸性，并且上述抗体的ｐＩ和上述反应系中的ｐＨ的关系设定成ｐＩ＞ｐＨ。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：北脇文久，龟井明仁，河村达朗，
申请(专利权)人：松下电器产业株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]