卵巢癌的诊断标记物制造技术

本发明专利技术涉及通过评估生物液体样品中触珠蛋白－１前体的浓度而检测卵巢癌、监测卵巢癌的治疗功效和评估卵巢癌严重程度的方法。本发明专利技术还涉及包含触珠蛋白－１前体特异性抗体或核酸探针的试剂盒，所述试剂盒用于卵巢癌的诊断、监测卵巢癌的治疗功效或评估卵巢癌的严重程度。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及癌症的诊断和监测方法。特别是本专利技术涉及尤其在疾病早期用于卵巢癌和生殖器官其他癌症的筛查，以及卵巢癌和其他癌症治疗和临床控制的监测和预后的方法，以及用于所述方法的分子标记物。
技术介绍
本说明书中引用的所有参考文献，包括任何专利或专利申请此处引入作为参考。并不认为任何参考文献构成先有技术。参考文献的讨论陈述其作者的主张，而本申请人保留评论所引用文献的准确性和针对性的权利。可以非常明确的是，虽然此处涉及许多先有技术的出版物，在澳大利亚或任何其他国家，该参考文献并不构成对任何这些文献形成本领域公知常识一部分的认可。卵巢癌为澳大利亚妇女中死于妇科恶性肿瘤的主要原因以及癌症死亡的第四大主要原因。该癌症为高转移性的，引起远离部位的二次生长，并且诊断为晚期上皮卵巢癌的大多数患者具有广泛的转移。卵巢癌令人生忧的结果由该肿瘤在早期、可治愈阶段不能检测到而引起。由于I级肿瘤的90％可通过目前的控制方法治愈，患有卵巢癌的患者如果在早期诊断则有恢复的良好前景。目前认为在早期、可治愈阶段鉴定卵巢癌唯一可行的方法是确定癌细胞中过表达、且因此从癌细胞分泌进入腹膜腔、并且最终吸收进入循环血液中的蛋白质的身份。迄今为止，没有发现适于早期-阶段筛查目的的、确定的卵巢癌标记物。CA 125为与卵巢癌相关的血清抗原，该抗原的单克隆抗体广泛用于病情的诊断和监测中。然而，由于该抗原的水平在其他妇科癌症、非-恶性的妇科病情如卵巢囊肿、子宫内膜异位或子宫纤维瘤、肝病、肾衰竭或胰腺炎，以及有时甚至在感染的应答中提高，CA 125值并不是卵巢癌的特异性指征(Mackay和Creasman，1995)。此外，卵巢癌的一些病例中没有确定CA 125值和疾病进程之间的关系，使得其为卵巢癌早期筛查的不可靠标记物。近年来，肿瘤-相关的差异表达基因-12(TADG-12)，一种通过聚合酶链式反应克隆的丝氨酸蛋白酶，已显示在大约75％的卵巢癌中过表达，而提示其作为一个可选择的标记物(Underwood LJ，2000)。然而，由于与卵巢癌的低关联度该标记物具有假阴性的可能。因此对于降低卵巢癌的死亡率，存在鉴定分子标记物的急切需求，其优选可在血液、血浆或血清中检测以补充检测早期-阶段疾病中现有试验的使用。蛋白质组学为一种新兴技术，其可在患者血清、其他生物液体和组织中以高-通量发现方法鉴定蛋白质分子，提供以足够浓度分泌自或释放自肿瘤细胞的蛋白质的相关信息。由于随着疾病发展该血清蛋白分布的改变，癌症患者的血清蛋白代表了生物标记物的丰富来源。当血清循环经过患病器官时，其挑选由肿瘤和其宿主微环境产生的蛋白质。因此癌症-相关的血清蛋白组代表了作为疾病发展过程结果的过-表达或异常排出的蛋白质，或代表了作为蛋白水解降解途径异常活化结果的从该蛋白组除去的蛋白质。因此甚至在疾病最早时期，蛋白质分子对癌细胞特异性中微小但显著的变化可以反映在血清蛋白组中，使得能够确定在检测和监测疾病中更有效的生物标记物的组合。分泌自癌细胞并且由循环血液吸收的过-表达的蛋白质是用于测定血清中蛋白质产物的测定法中潜在的候选标记物。分泌的蛋白质可在患者中激起抗体应答，而在这样情况下基于抗体的血清标记物将是可行的。通常用于蛋白质组方法的电离质谱技术，基质-辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)和表面-增强的激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOFMS)，具有鉴定数千蛋白质的模式或变化的潜力，并且能进行存在于复杂的生物液体(如血清或血浆)中几乎所有小分子量蛋白质的全面分析。最近描述了具有94％阳性预计值的将癌区别于非癌组的卵巢癌患者的血清学蛋白质组模式(Petricoin等人，2002)。该方法代表了搜索用于卵巢癌早期筛查的生物标记物的新方向，其中早期-阶段癌症患者蛋白质的独特性分布可以产生相对于正常受试者的不同蛋白质模式，其可用作诊断标准。然而，由于其低的特异性，仍在评估该方法的适用范围。触珠蛋白为结合血红蛋白的急性期糖蛋白，由此防止由于炎症或损伤引起的铁损耗和肾损害(Wassell，2000)。成熟触珠蛋白的天然形式为分子量大约90,000kDa的四聚物，由通过分子间二硫键连接的两个不同α和β-亚单位组成(Hanley和Heath，2000)。触珠蛋白具有三种主要的表型形式，触珠蛋白1-1、触珠蛋白2-1和触珠蛋白2-2，并且每个或所有的等位基因可以存在于单一个体。个体表型与多种病情相关，包括心血管的和自身免疫病症以及一些恶性的病情。然而，在其他癌症如前列腺癌中，触珠蛋白的表达由于恶性转化而终止(Meechan等人，2002)。体内，触珠蛋白以显示38,000kDa分子量的单一多肽前体合成。认为成熟蛋白质所有的三种表型源自单一前体，触珠蛋白-1前体。多肽前体经蛋白水解加工形成天然蛋白质的α和β-亚单位(Haugen等人，1981)。前体蛋白包括α链前氨基端18个残基的信号序列，和/或α和β-区域间的干预多肽(Misumi等人，1983)。体内，翻译后事件导致信号序列的蛋白水解去除以及核心寡糖侧链通过膜-联酶系统掺入β-区域(Haugen等人，1981)。翻译后修饰还可导致前体多肽α和β区域的裂解而形成天然蛋白质(Haugen等人，1981)。触珠蛋白生物合成和加工的独特模式的生物学意义还不明确，但是其已显示相当比例新-合成的触珠蛋白以单一多肽前体分泌(Misumi等人，1983)。在70年代早期首次在卵巢癌患者中报道血清触珠蛋白提高的浓度。触珠蛋白浓度证实受肿瘤负荷程度的影响，而不依赖于卵巢恶性肿瘤的组织类型或等级(Mueller等人，1971)。一些研究已显示卵巢癌患者血清触珠蛋白中提高的岩藻糖基化和其他糖基化的变化(Thompson等人，1992)。最近，已在卵巢癌中显示了触珠蛋白、CA125和白介素-6水平间的关联性(Dobryszycka等人，1999)。由于这些研究依靠触珠蛋白的分光光度法(Mueller等人，1971)、免疫扩散(Thompson等人，1992)和电泳(Thompson等人，1992)检测，检测的是同源的天然蛋白质而不是触珠蛋白前体。Ono等人，2000年公开了卵巢肿瘤组织中对应于触珠蛋白α(15)-β前体的mRNA的表达。该作者并不认为可在卵巢癌患者的血清和腹水液体中检测触珠蛋白-1前体。虽然众所周知生物液体中成熟触珠蛋白的表达在如癌症、关节炎和蛋白尿的病情中上调，触珠蛋白的前体形式在这些情况下没有检测到。上述报告均没有提示生物液体中任何触珠蛋白前体的检测或测定可用于卵巢癌或任何其他癌症的诊断、分级或预后。专利技术概述利用蛋白质组和蛋白质印迹法方法我们目前已经鉴定了早期卵巢癌患者血清中的触珠蛋白-1前体。已表明相比于正常血清，卵巢癌患者血清中触珠蛋白-1前体的浓度提高了。因此提示触珠蛋白-1前体作为生物标记物开发的候选物。此外，随着卵巢癌的发展触珠蛋白-1前体表达提高的发现使得其成为一种理想的候选物，以补充或替代广泛使用的但非特异性的CA 125标记物。在第一个方面，本专利技术提供了卵巢癌的检测方法，包括测定来自怀疑患有卵巢癌的受试者之生物液体样品中触珠蛋白-1前体浓度的步骤，其中相比于对照样品中触珠蛋白-1前体的浓度，触珠蛋白-1前体提高本文档来自技高网...

【技术保护点】
卵巢癌的检测方法，该方法包括测定来自怀疑患有卵巢癌的受试者之生物液体样品中触珠蛋白－１前体浓度的步骤，其中相比于对照样品中触珠蛋白－１前体的浓度，触珠蛋白－１前体增加的浓度为癌症存在的指征。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：N阿梅德，GE赖斯，MA奎因，
申请(专利权)人：皇家妇女医院，
类型：发明
国别省市：AU[澳大利亚]