本发明专利技术涉及肝炎、肝硬化与肝癌的诊断，预测和预后的六项指标：乙型肝炎病毒表面抗原ＨＢｓＡｇ，丙型肝炎病毒抗体ＨＣＶＡｂ，甲胎蛋白（ａｌｐｈａ－ｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＡＦＰ），α－Ｌ－岩藻糖苷酶（α－Ｌ－Ｆｕｃｏｓｉｄａｓｅ，ＡＦＵ），单胺氧化酶（Ｍｏｎｏ ａｍｉｎｅ Ｏｘｉｄａｓｅ，ＭＡＯ），透明质酸（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ，ＨＡ）集成检测反应板和蛋白芯片试剂盒。所述的反应孔板包括基板和位于基板上的反应孔，所述的反应孔包括２－３８４个样本孔，２－８个标准品孔，其中，每一反应孔的底部有固相载体，且在固相载体上包被着抗ＨＢｓＡｇ，ＨＣＶＡｇ，抗ＡＦＰ，抗ＡＦＵ，抗ＭＡＯ，抗ＨＡ等六种或以上抗原或抗体的微点阵。本发明专利技术的反应板和试剂盒可简便、快速、准确地实现多个人份的乙丙型肝炎、肝硬化与肝癌的诊断，预测和预后的六项指标的同时检测。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于体外临床检验和生物芯片
，确切地说，是一种适用于肝炎、肝硬化与肝癌的诊断、预测和预后的六项指标(HBsAg，HCVAb，AFU，AFP，MAO，和HA)集成检测的反应板和试剂盒。
技术介绍
病毒性肝炎是法定乙类传染病，具有传染性较强、传播途径复杂、流行面广泛、发病率高等特点；部分乙型、丙型肝炎患者可演变成慢性，并可发展为肝硬化和原发性肝细胞癌，对人民健康危害甚大。我国是乙型肝炎大国，全世界75％的乙肝患者都集中在我国。6亿多人已感染过乙肝，约1.3亿人携带乙肝病毒，其中3000万人患有慢性肝炎，又有约30％的慢性肝炎病人发展为肝硬化，其中部分可发生肝癌，每年因肝病死亡的人数近30万，其中半数为肝癌。尤其严重的是携带乙肝表面抗原的孕妇，其中约40％可直接通过母婴垂直传播使婴儿感染，每年约有80万～100万新生儿成为乙肝病毒携带者。丙型肝炎主要通过输血及血制品和不洁注射等途径而引起传播，感染患者易发展成慢性肝炎、肝硬化及肝癌。最新调查显示，全国有4000万丙肝感染者。据临床观察研究发现，急性丙肝感染后约50％～70％可转为慢性，20％的人最终发展为肝硬化或肝癌，且其演变为肝癌的速度较乙肝病毒引起者来得快速。乙型肝炎和丙型肝炎的临床诊断以病原学和血清学诊断为主，乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)是乙型肝炎的特异性免疫学诊断标志，而抗HCV是检测丙型肝炎的主要指标。乙型肝炎和丙型肝炎引起的慢性肝损均可导致肝硬化的发生。人类肝硬化的病理改变多数较为缓慢，从肝细胞的损伤、炎症甚至坏死，到细胞外基质(ECM)的异常增生和沉积，需要经过数年甚至数十年的时间，平均大约3～5年的时间。由于肝脏具有很强的代偿功能，有时即使肝硬化处于进展活动期，患者的临床表现也不典型；即使患者表现有症状，也往往缺乏诊断特异性。目前为止，基于肝脏活检的病理学诊断仍然为肝硬化诊断的金标准。但其为创伤性诊断，具有致损伤甚至潜在的致死性危险，病人顺从性差，费用较贵。此外，还存在以下一些缺点。首先是标本误导的可能性，典型的莫过于在弥散性的肝脏病变中只能检测一个纤维化的阶段，如活检标本较小，也可能发生标本误导，如会有一个或两个汇管汇高区时，或会有一个肝细胞的小叶，但不会有周围的细胞外基质；另外，在不同的肝脏病理学家之间，在对肝纤维化的分类和程度的评判方面也可发生高达25％的差异；第三，一次的肝活检只是提供静态的信息，不能反应细胞外基质产生和降解之间平衡的动态变化，也不能充分地揭示出潜在性的病原学机制。基于以上种种原因，肝纤维化的无创性诊断越来越引起医生和患者的注目。目前，在临床上应用较多的是MAO(单胺氧化酶)、HA(透明质酸)、层黏蛋白(LN)等指标。测定它们的血清含量，可反映肝脏内皮细胞、贮脂细胞和成纤维细胞的变化，如果它们的血清水平升高常常提示患者可能存在肝纤维化和肝硬化。肝纤维化时，多种ECM的组成和含量均发生了明显的变化，参与ECM代谢酶类也有相应的改变。通过对血清中有关酶类的检测，对肝纤维化具有诊断意义。单胺氧化酶(MAO)是一些单胺类物质的氧化酶，分布于肝、脑等器官的线粒体中和血浆中。胶原合成时，MAO催化原胶原分子上的赖氨酰残基，促进胶原分子内和分子间的共价交联，形成稳定的胶原纤维。肝纤维化后期，MAO可升高；门脉-中央静脉纤维间隔形成者80％升高，假小叶形成者绝大多数升高。透明质酸(HA)是由间质细胞合成的一种大分子葡胺多糖，分布在各种结缔组织中。肝脏中的内皮细胞是血液中HA清除的主要场所。肝纤维化后期至肝硬化时，肝窦内皮细胞的窗孔因毛细血管化减少或消失，血清中的HA可显著增高。所以，一旦HA明显增高，常提示纤维化程度较重，或已在肝硬化阶段。因为血清学指标比明显的临床症状出现早，在健康人群中定期或不定期的进行肝炎、肝硬化相关血清指标的检测，对于肝脏疾病的早发现、早治疗有着重要意义，有利于肝病的预防，改善预后状况。另一方面，由于乙肝、丙肝容易诱发肝癌，在对肝炎患者检测肝炎指标的同时检测肝癌相关指标也有重要意义。甲胎蛋白(AFP)被广泛用于原发性肝癌的早期诊断及肝癌手术疗效的监测、术后的随访以及高危人群的随访。病毒性肝炎、肝硬化患者AFP浓度有不同程度的升高，但其水平通常低于100μg/L。其升高原因主要是由于受损伤的肝细胞再生而幼稚化时，肝细胞便重新具有产生AFP的能力，随着受损肝细胞的修复，AFP逐渐恢复正常。值得提出的是α-L-岩藻糖苷酶(AFU)，血清AFU测定以其对检出小肝癌的高敏感性，对预报肝硬变并发肝癌的高特异性，和与AFP测定的良好互补性，而越来越被公认为是肝癌诊断、随访和肝硬变监护的不可或缺的手段。国内对24例肝细胞癌患者进行血清AFU和AFP相关研究，发现AFU诊断敏感必为87％，特异性为78％，而AFP则分别为65％和89％(诊断界限为，20ug/L)。提示AFU诊断的敏感性好，而特异性较AFP低。血清中AFU活性和阳性率与肝癌直径大小无明显相关性。小肝癌组血清AFU阳性率70.8％显著高于AFP(37.5％)。AFP阴性和AFP升高而不足以诊断原发性肝癌者，其血清AFU的阳性率达80.8％。肝组织活检证实为原发性肝癌者，血清AFU的阳性率为AFP阳性率的3倍以上。在肝硬化患者中检测AFU，如其活性增加，对发现一些较小的肿瘤更具有价值，此时AFP不能对较小的肿瘤做出诊断。因此，应用和推广AFU作为原发性肝癌新的诊断指标，具有重要的意义，尤其是AFP阴性和小细胞肝癌的诊断价值更大。因与AFP无明显相关可互补诊断，联合检测可提高肝癌的检出率。目前的血清学检测方法以ELISA方法为主，每次只能检测单个指标，在进行多指标检测上费时、费力、费钱，难以满足人数众多的检验市场，不利于体检的日常化、平民化普及。蛋白芯片技术与免疫诊断技术相结合产生的诊断用蛋白芯片技术是最近几年来新兴的高科技技术，在多指标并行快速检测方面有着无可比拟的优势，具有集成化、高通量、自动化、微型化、信息化等特点，是免疫诊断的发展方向。本专利技术通过对六个指标的快速检测实现对肝炎、肝硬化与肝癌的诊断，预测和预后，对疾病的预防和治疗有着重要的指导意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种可同时对乙丙型肝炎、肝硬化与肝癌进行预测，诊断和预后判断的方法。我们的试剂盒通过检测血清或血浆中的HBsAg，HCVAb，AFU，AFP，MAO和HA这六项或六项以上指标，来达到这一目的。在本专利技术的第一方面，提供了一种乙丙型肝炎、肝硬化与肝癌的诊断和预测六项指标集成检测反应板，反应孔板包括基板和位于基板上的反应孔，所述的反应孔包括2-384个样本孔，1-300个标准品孔，其中，其特征在于每一反应孔的底部有固相载体，且在固相载体上包被着抗HBsAg，HCVAg，抗AFP，抗AFU，抗MAO，抗HA等六种或以上抗原或抗体的微点阵。在每一反应孔内还设有一定位基准点。在一优选例中，所述的固相载体是NC膜、或PDVF膜。在另一优选例中，所述样本孔的数量为1-300个。在另一优选例中，所述的抗HBsAg，HCVAg，抗AFP，抗AFU，抗MAO，抗HA等六种抗原或抗体在固相载体上各有2-8个点样点。在另一优选例中，所述反应孔每孔设有一个定位基准点。在本专利技术的第二方本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种肝炎、肝硬化与肝癌的诊断和预测六项指标集成检测反应板，其特征在于，反应孔板包括基板和位于基板上的反应孔，所述的反应孔包括２－３８４个样本孔，１－３００个标准品孔，其中，其特征在于：每一反应孔的底部有固相载体，且在固相载体上包被着抗ＨＢｓＡｇ，ＨＣＶＡｇ，抗ＡＦＵ，抗ＡＦＰ，抗ＭＡＯ，抗ＨＡ等六种或以上抗原或抗体的微点阵。在每一反应孔内还设有一定位基准点。
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：穆海东，
申请(专利权)人：穆海东，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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