GPCR异聚体抑制剂及其用途制造技术

本发明专利技术涉及与癌症相关的CXC受体4(CXCR4)‑G蛋白偶联受体(GPCR)异聚体(CXCR4‑GPCR异聚体)的抑制剂，其中CXCR4与其他G蛋白偶联受体(GPCRx)形成功能性异聚体。更具体地，本发明专利技术涉及与CXCR4形成异聚体的GPCRx，其在用CXCR4激动剂和GPCRx激动剂共同刺激后导致CXCR4下游的信号传导增强。本发明专利技术还提供所述CXCR4‑GPCRx异聚体的相互作用GPCR伴侣的抑制剂或CXCR4‑GPCRx异聚体特异性抑制剂，包括所述CXCR4‑GPCRx异聚体形成的抑制剂和CXCR4‑GPCRx异聚体特异性抗体的用途，以及在癌症的诊断和/或治疗中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】GPCR异聚体抑制剂及其用途
本申请要求2017年12月19日提交的美国临时申请号62/607,876的优先权权益，并且还要求2018年6月1日提交的美国临时申请号62/679,598的优先权权益，并且还要求2018年9月18日提交的美国临时申请号62/732,946的优先权权益。将前述相关申请中的每一个全文以引用方式并入本文。此外，本文中所标识的每个参考文献全文以引用方式并入本文。
技术介绍
本文公开的专利技术总体上涉及新颖的功能性GPCR异聚体的抑制剂，并且更具体地涉及CXC受体4(CXCR4)-G蛋白偶联受体(GPCR)异聚体的抑制剂，所述(GPCR)异聚体由于功能性异聚体形成而在CXCR4下游显示增强的信号传导并且与癌症和其他疾病相关。G蛋白偶联受体(GPCR)是与G蛋白偶联的七个跨膜结构域细胞表面受体。GPCR通过感知包括光、气味、激素、神经递质、趋化因子、小脂质分子和核苷酸在内的刺激来介导不同的感觉和生理反应。人类基因组中存在大约800个GPCR基因，并且预测超过一半的GPCR基因编码感觉受体诸如嗅觉、视觉和味觉受体(Bjarnadottir等人，2006)。其余的350个GPCR在胚胎发育、行为、情绪、认知、对血压、心率和消化过程的调节、对免疫系统和炎症的调节、对体内稳态的维持以及癌症的生长和转移方面具有重要的生理作用(Filmore2004，Overington等人，2006)。GPCR与许多疾病相关，并且是所有处方药中大约40％的处方药的靶标(Filmore2004)。CXC受体4(CXCR4)是趋化因子受体家族GPCR的成员。CXCR4在大多数造血细胞类型、骨髓干细胞、内皮祖细胞、血管内皮细胞、神经元和神经元干细胞、小胶质细胞和星形胶质细胞中表达(Klein和Rubin2004，Griffith等人，2014)。CXCR4响应其配体C-X-C基序趋化因子配体12(CXCL12)，也称为基质细胞衍生因子1(SDF-1)，并且在造血、心血管和神经系统的胚胎发育中具有至关重要的作用(Griffith等人，2014)。CXCR4被发现是人类免疫缺陷病毒(HIV)的共同受体，并在造血干细胞(HSC)归巢至骨髓、炎症、组织的免疫监视、以及成人的组织再生方面具有重要作用(Chatterjee等人2014)。CXCR4的C末端的突变引起持续的CXCR4活化，导致一种以中性粒细胞减少和B细胞淋巴细胞减少(Hernandez等人，2003；Kawai，2009)为特征的先天性免疫缺陷(称为WHIM综合征)(疣、低丙球蛋白血症、感染和先天性骨髓粒细胞缺乏症)。CXCR4在发育期间和成年期的淋巴器官和胸腺内的T和B淋巴细胞发育中也具有至关重要的作用(Allen等人，2004；Ara等人，2003)。CXCR4与多种免疫和自身免疫性疾病有关，所述免疫和自身免疫性疾病诸如HIV感染、局部缺血、伤口愈合、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮(SLE)、间质性肺炎、血管疾病、多发性硬化症、肺纤维化和过敏性气道疾病(Chu等人，2017；Debnath等人，2013；Domanska等人，2013)。CXCR4参与类风湿性关节炎通过关节炎关节中CXCR4阳性T细胞的积累增加以及CXCR4缺陷型小鼠中胶原蛋白诱导的关节炎的减少来证明(Buckley等人，2000；Chung等人，2010)。此外，CXCR4拮抗剂AMD3100在小鼠模型中显著减轻胶原蛋白诱导的关节炎(DeKlerck等人，2005)。CXCR4还通过在肺损伤期间募集循环性成纤维细胞和骨髓来源的祖细胞来调节肺纤维化，并且AMD3100在博来霉素诱导的小鼠肺纤维化中表现出预防作用(Song等人，2010)。CXCR4/CXCL12轴也与SLE的发病机制有关。在狼疮的小鼠模型和SLE患者中，炎症细胞(诸如单核细胞、中性粒细胞和B细胞)显示出CXCR4表达增加，并且向主要过量表达CXCL12的皮肤和肺部迁移(Chong和Mohan，2009；Wang等人，2009；Wang等人，2010)。CXCR4拮抗剂CTCE-9908在狼疮小鼠模型中延长生存期并大大改善疾病状况和肾炎(Wang等人，2009)。此外，CXCR4还参与脑和心脏疾病，包括脑损伤、中风、心肌梗塞、动脉粥样硬化和损伤诱导的血管再狭窄(Cheng等人，2017；Domanska等人，2013；Doring等人，2014)。当来自慢性淋巴细胞性白血病(B-CCL)患者的B细胞在表面表达高水平的功能性CXCR4时，首先注意到CXCR4参与了癌症，表明在CXCL12暴露后钙动员和肌动蛋白聚合增强并向分泌CXCL12的骨髓基质细胞迁移(Burger等人，1999)。CXCR4随后被表征为负责乳腺癌转移到表达更高水平的CXCL12的器官，诸如淋巴结、骨髓、肺部和肝脏(Muller等人，2001)。初始发现之后，越来越多的证据表明CXCR4与多种不同的癌症相关，并且在恶性肿瘤中具有多种潜在的作用。CXCR4在超过23种人类癌症中过量表达，所述人类癌症包括乳腺癌、肺癌、脑癌、肾癌(或肾细胞癌)、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌、黑素瘤、白血病、多发性骨髓瘤、胃肠道癌和软癌组织肉瘤，并且被认为是不良预后标记(Domanska等人，2013；Chatterjee等人，2014；Furusato等人，2010)。CXCR4是大多数癌症类型表达的唯一趋化因子受体(Liang等人，2015)，并且响应于由癌细胞和周围的癌症相关细胞所分泌的CXCL12而刺激肿瘤细胞生长、存活和侵袭性(Burger和Kipps，2006；Chatterjee等人，2014；Domanska等人，2013)。使用包括PubMed、EMBASE和Cochrane库在内的数据库进行的系统荟萃分析表明在各种癌症中CXCR4过量表达与无进展存活和总体存活较差之间存在显著相关，所述癌症包括血液恶性肿瘤、乳腺癌、结直肠癌、食管癌、头颈癌、肾癌、肺癌、妇科癌、肝癌、前列腺癌和胆囊癌(Du等人，2015；Hu等人，2015；Li等人，2017；Wang等人，2016；Zhao等人，2015)。CXCR4/CXCL12轴在肿瘤生长、侵袭、血管生成、血管发生、转移、抗药性和癌细胞-肿瘤微环境相互作用中起着核心作用(D′Alterio等人，2012；Domanska等人，2013；Guo等人，2016)使用CXCR4拮抗剂在各种体外和体内实验模型诸如正位、皮下人异种移植物和转基因小鼠模型中证明了CXCR4在癌细胞增殖和肿瘤生长中的关键作用(Domanska等人，2013)。Daoy髓母细胞瘤(medulloblastoma)细胞和U87胶质母细胞瘤细胞显示出CXCR4表达并且展现出增殖的剂量依赖性增加至体外CXCL12梯度，并且AMD3100的全身给予抑制了颅内U87和Daoy细胞异种移植物的生长(Rubin等人，2003)。在胰腺、甲状腺、黑素瘤、前列腺和结肠癌异种移植模型中也证明了CXCR4参与癌细胞向CXCL12表达器官的转移(Barto本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于治疗、改善或预防具有CXCR4-GPCRx异聚体的受试者中的癌症的方法，所述方法包括：向所述受试者施用治疗有效量的CXCR4-GPCRx异聚体的抑制剂，其中：/nGPCRx与所述受试者中的CXCR4异聚化，/nGPCRx与CXCR4的所述异聚化伴随着CXCR4下游的信号传导的增强；并且/nCXCR4下游的信号传导的所述增强被所述CXCR4-GPCRx异聚体的所述抑制剂抑制。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171219 US 62/607,876;20180601 US 62/679,598;20181.一种用于治疗、改善或预防具有CXCR4-GPCRx异聚体的受试者中的癌症的方法，所述方法包括：向所述受试者施用治疗有效量的CXCR4-GPCRx异聚体的抑制剂，其中：
GPCRx与所述受试者中的CXCR4异聚化，
GPCRx与CXCR4的所述异聚化伴随着CXCR4下游的信号传导的增强；并且
CXCR4下游的信号传导的所述增强被所述CXCR4-GPCRx异聚体的所述抑制剂抑制。


2.根据权利要求1所述的方法，其中CXCR4与GPCRx的所述异聚化通过基于邻近度的测定来评价。


3.根据权利要求2所述的方法，其中所述基于邻近度的测定选自由以下组成的组：双分子荧光互补(BiFC)、邻近连接测定(PLA)、荧光共振能量转移(FRET)、生物发光共振能量转移(BRET)、半胱氨酸交联和免疫共沉淀。


4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中CXCR4与GPCRx的所述异聚化通过共内在化测定来评价。


5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中CXCR4下游的细胞信号传导的所述增强通过细胞内Ca2+测定来评价。


6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中GPCRx选自由以下组成的组：ADCYAP1R1、ADORA2B、ADORA3、ADRB2、APLNR、C5AR1、CALCR、CCR5、CHRM1、GALR1、EDNRB、HRH1、MLNR、NTSR1、PTGER2、PTGER3、SSTR2和TACR3。


7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述CXCR4-GPCRx异聚体的所述抑制剂是所述CXCR4的抑制剂。


8.根据权利要求7所述的方法，其中CXCR4的抑制剂选自由以下组成的组：AD-114、AD-114-6H、AD-114-Im7-FH、AD-114-PA600-6H、ALX-0651、ALX40-4C、AMD070(AMD11070、X4P-001)、AMD3100(普乐沙福)、AMD3465、ATI2341、BKT140(BL-8040；TF14016；4F-苯甲酰基-TN14003)、CTCE-9908、CX549、D-[Lys3]GHRP-6、FC122、FC131、GMI-1359、GSK812397、GST-NT21MP、异硫脲-1a、异硫脲-1t(IT1t)、KRH-1636、KRH-3955、LY2510924、LY2624587、MSX-122、N-[11C]甲基-AMD3465、PF-06747143、POL6326、SDF-11-9[P2G]二聚体、SDF1P2G、T134、T140、T22、TC14012、TG-0054(布利沙福)、USL311、ulocuplumab(MDX1338/BMS-936564)、病毒巨噬细胞炎性蛋白II(vMIP-II)、WZ811、12G5、238D2、238D4、[64Cu]-AMD3100、[64Cu]-AMD3465、[68Ga]pentixafor、[90Y]pentixather、[99mTc]O2-AMD3100、[177Lu]pentixather和508MCl(化合物26)。


9.根据权利要求7所述的方法，其中所述CXCR4-GPCRx异聚体的所述抑制剂是所述CXCR4的拮抗剂。


10.根据权利要求9所述的方法，其中CXCR4的所述拮抗剂选自由以下组成的组：ALX40-4C、AMD070(AMD11070、X4P-001)、AMD3100(普乐沙福)、AMD3465、ATI2341、BKT140(BL-8040；TF14016；4F-苯甲酰基-TN14003)、CTCE-9908、CX549、D-[Lys3]GHRP-6、FC122、FC131、GMI-1359、GSK812397、GST-NT21MP、异硫脲-1a、异硫脲-1t(IT1t)、KRH-1636、KRH-3955、LY2510924、MSX-122、N-[11C]甲基-AMD3465、POL6326、SDF-11-9[P2G]二聚体、SDF1P2G、T134、T140、T22、TC14012、TG-0054(布利沙福)、USL311、病毒巨噬细胞炎性蛋白II(vMIP-II)、WZ811、[64Cu]-AMD3100、[64Cu]-AMD3465、[68Ga]pentixafor、[90Y]pentixather、[99mTc]O2-AMD3100、[177Lu]pentixather和508MCl(化合物26)。


11.根据权利要求7所述的方法，其中所述CXCR4-GPCRx异聚体的所述抑制剂还包含所述GPCRx的抑制剂。


12.根据权利要求11所述的方法，其中将GPCRx的所述抑制剂与CXCR4的所述抑制剂同时或相继施用。


13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述CXCR4-GPCRx异聚体的所述抑制剂是或包含以下的组合：GPCRx的拮抗剂、反向激动剂、变构调节剂、抗体或其结合部分，或配体。


14.根据权利要求13所述的方法，其中GPCRx的所述拮抗剂是选自由以下组成的组的分子的拮抗剂：ADCYAP1R1、ADORA2B、ADORA3、ADRB2、C5AR1、CALCR、CHRM1、EDNRB、HRH1、MLNR、NTSR1、PTGER2和TACR3。


15.根据权利要求14所述的方法，其中GPCRx的所述拮抗剂是选自由以下组成的组的ADRB2的拮抗剂：阿普洛尔、阿替洛尔、倍他洛尔、布拉洛尔、布托沙明、卡拉洛尔、卡维地洛、CGP12177、环丙洛尔、ICI118551、ICYP、拉贝洛尔、左倍他洛尔、左布诺洛尔、LK204-545、美托洛尔、纳多洛尔、NIHP、NIP、普罗帕酮、普萘洛尔、索他洛尔、SR59230A和噻吗洛尔。


16.根据权利要求15所述的方法，其中ADRB2的所述拮抗剂是卡维地洛。


17.根据权利要求14所述的方法，其中GPCRx的所述拮抗剂是选自由以下组成的组的CALCR的拮抗剂：α-CGRP-(8-37)(人)、AC187、CT-(8-32)(鲑鱼)和olcegepant。


18.根据权利要求17所述的方法，其中CALCR的所述拮抗剂是AC187。


19.根据权利要求14所述的方法，其中GPCRx的所述拮抗剂是选自由以下组成的组的CHRM1的拮抗剂：3-奎宁环基二苯羟乙酸酯(QNB)、4-DAMP、阿地溴铵、AE9C90CB、AFDX384、阿米替林、AQ-RA741、阿托品、苯扎托品、比哌立登、达非那新、双环胺、度硫平、普罗吩胺、格隆溴铵、脒基哌仑西平、六氢地芬尼多、六氢硅杂-地芬尼多、己环铵、喜巴辛、异丙托铵、石胆基胆碱、美索曲明、ML381、毒蕈碱毒素1、毒蕈碱毒素2、毒蕈碱毒素3、N-甲基东莨菪碱、奥腾折帕、奥昔布宁、p-F-HHSiD、哌仑西平、丙胺太林、(R，R)-奎宁环基-4-氟甲基-二苯羟乙酸酯、东莨菪碱、硅杂己环铵、索利那新、替仑西平、噻托溴铵、托特罗定、苯海索、tripitramine、UH-AH37、乌美溴铵和VU0255035。


20.根据权利要求19所述的方法，其中CHRM1的所述拮抗剂选自由以下组成的组：奥昔布宁、乌美溴铵和VU0255035。


21.根据权利要求14所述的方法，其中GPCRx的所述拮抗剂是选自由以下组成的组的EDNRB的拮抗剂：A192621、安立生坦、阿曲生坦、波生坦(RO470203，全可利)、BQ788、IRL2500、K-8794、马西替坦、RES7011、Ro46-8443、SB209670、SB217242(恩拉生坦)、TAK044和替唑生坦(RO610612)。


22.根据权利要求21所述的方法，其中EDNRB的所述拮抗剂是波生坦。


23.根据权利要求14所述的方法，其中GPCRx的所述拮抗剂是选自由以下组成的组的HRH1的拮抗剂：(-)-氯苯那敏、(+)-氯苯那敏、(-)-反式-H2-PAT、(+)-顺式-H2-PAT、(+)-反式-H2-PAT、(±)-顺式-H2-PAT、(±)-反式-H2-PAT、(R)-西替利嗪、(S)-西替利嗪、9-OH-利培酮、A-317920、A-349821、ABT-239、阿利马嗪、阿米替林、阿立哌唑、阿普米定、阿塞那平、阿司咪唑、AZD3778、氮卓斯汀、BU-E47、西替利嗪、氯苯那敏、氯丙嗪、ciproxifan、氯马斯汀、clobenpropit、氯氮平、康里新、赛克力嗪、赛庚啶、地氯雷他定、苯海拉明、度硫平、多塞平、依匹斯汀、非索非那定、氟奋乃静、氟司必林、氟哌啶醇、羟嗪、因普米丁、INCB-38579、JNJ-39758979、酮替芬、氯雷他定、洛沙平、MK-0249、吗啉吲酮、奥氮平、奋乃静、哌咪清、匹泮哌隆、pitolisant、异丙嗪、吡拉明、喹硫平、利培酮、舍吲哚、特非那定、硫利哒嗪、氨砜噻吨、三氟拉嗪、曲吡那敏、曲普利啶、齐拉西酮和佐替平。


24.根据权利要求23所述的方法，其中HRH1的所述拮抗剂是西替利嗪、吡拉明、羟嗪或氯雷他定。


25.根据权利要求14所述的方法，其中GPCRx的所述拮抗剂是选自由以下组成的组的MLNR的拮抗剂：GM-109、MA-2029和OHM-11526。


26.根据权利要求25所述的方法，其中MLNR的所述拮抗剂是MA-2029。


27.根据权利要求14所述的方法，其中GPCRx的所述拮抗剂是选自由以下组成的组的NTSR1的拮抗剂：麦克林坦、SR48527、SR48692和SR142948A。


28.如根据权利要求27所述的方法，其中NTSR1的所述拮抗剂是麦克林坦。


29.根据权利要求14所述的方法，其中GPCRx的所述拮抗剂是选自由以下组成的组的TACR3的拮抗剂：[Trp7，β-Ala8]神经激肽A-(4-10)、AZD2624、FK224、GR138676、GSK172981、GSK256471、N′，2-二苯基喹啉-4-卡巴肼8m、N′，2-二苯基喹啉-4-卡巴肼、奥沙奈坦、PD154740、PD161182、PD157672、沙瑞度坦、SB218795、SB222200、SB235375、SCH206272、SSR146977和他奈坦。


30.根据权利要求29所述的方法，其中TACR3的所述拮抗剂是SSR146977。


31.根据权利要求1-30中任一项所述的方法，其中所述CXCR4-GPCRx异聚体的所述抑制剂是蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)抑制剂。


32.根据权利要求1-31中任一项所述的方法、其中所述癌症选自由以下组成的组：乳腺癌、肺癌、脑癌、肾癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌、黑素瘤、多发性骨髓瘤、胃肠道癌、肾细胞癌、软组织肉瘤、肝细胞癌、胃癌、结直肠癌、食管癌和白血病。


33.根据权利要求1-32中任一项所述的方法，其中将所述CXCR4-GCPRx异聚体的所述抑制剂以药物组合物施用至所述受试者。


34.一种用于评估具有CXCR4-GPCRx异聚体的受试者对癌症的治疗、改善或预防的反应或潜在反应的方法，所述方法包括：
从所述受试者获得样品；
检测所述样品中CXCR4和GPCRx的异聚化；并且
至少部分基于对CXCR4和GPCRx的所述异聚化的检测，评估所述受试者对癌症的所述治疗、改善或预防的反应或潜在反应。


35.根据权利要求34所述的方法，其中CXCR4与GPCRx的所述异聚化伴随着CXCR4下游的信号传导的增强。


36.根据权利要求35所述的方法，其中CXCR4下游的细胞信号传导的所述增强通过细胞内Ca2+测定来评价。


37.根据权利要求34-36中任一项所述的方法，其中CXCR4与GPCRx的所述异聚化通过基于邻近度的测定来评价。


38.根据权利要求37所述的方法，其中所述基于邻近度的测定选自由以下组成的组：双分子荧光互补(BiFC)、邻近连接测定(PLA)、荧光共振能量转移(FRET)、生物发光共振能量转移(BRET)、半胱氨酸交联和免疫共沉淀。


39.根据权利要求34-38中任一项所述的方法，其中CXCR4与GPCRx的所述异聚化通过共内在化测定来评价。


40.一种用于治疗具有包含CXCR4-GPCRx异聚体的细胞的患者中的癌症的方法，所述方法包括：向所述患者施用选自由以下组成的组的抑制剂或抑制剂组合：CXCR4的抑制剂、GPCRx的抑制剂和所述CXCR4-GPCRx异聚体的抑制剂；其中：
i)所述CXCR4-GPCRx异聚体具有增强的下游信号传导；并且
ii)所施用的抑制剂或抑制剂组合抑制来自所述癌症患者中的所述CXCR4-GPCRx异聚体的增强的下游信号传导。


41.一种抑制来自患有癌症的患者细胞中的CXCR4-GPCRx异聚体的增强的下游信号传导的方法，所述方法包括：
向所述患者施用选自由以下组成的组的抑制剂或抑制剂组合：CXCR4的抑制剂、GPCRx的抑制剂和所述CXCR4-GPCRx异聚体的抑制剂；其中：
i)所述CXCR4-GPCRx异聚体具有增强的下游信号传导；并且
ii)所施用的抑制剂或抑制剂组合抑制来自所述癌症患者中的所述CXCR4-GPCRx异聚体的增强的下游信号传导。


42.一种用于在治疗具有包含CXCR4-GPCRx异聚体的细胞的患者中的癌症中使用的药物试剂盒，所述药物试剂盒包含：
选自由以下组成的组的抑制剂或抑制剂组合：CXCR4的抑制剂、GPCRx的抑制剂和所述CXCR4-GPCRx异聚体的抑制剂；
其中所述CXCR4-GPCRx异聚体具有增强的下游信号传导。


43.一种用于在治疗具有包含CXCR4-GPCRx异聚体的细胞的患者中的癌症中使用的药物组合物，所述药物组合物包含：
i)选自由以下组成的组的抑制剂或抑制剂组合：CXCR4的抑制剂、GPCRx的抑制剂和所述CXCR4-GPCRx异聚体的抑制剂；和
ii)药学上可接受的载体；
其中所述CXCR4-GPCRx异聚体具有增强的下游信号传导。


44.一种用于治疗在具有包含CXCR4-GPCRx异聚体的癌细胞的患者中的癌症的方法，其中所述CXCR4-GPCRx异聚体具有增强的下游信号传导，所述方法包括：
1)通过以下方式确定所述患者是否具有包含具有增强的下游信号传导的所述CXCR4-GPCRx异聚体的癌细胞：从所述患者获得或已经从所述患者获得生物样品；并且对所述生物样品进行或已经对所述生物样品进行测定，以确定是否：
i)所述患者的癌细胞包含所述CXCR4-GPCRx异聚体；或
ii)CXCR4-GPCRx异聚体选择性试剂：改变在一种或多种患者来源细胞中所述CXCR4-GPCRx异聚体的异聚体所特有的特性或功能；改变包含所述CXCR4-GPCRx异聚体的一种或多种患者来源细胞的异聚体所特有的特性；或降低包含所述CXCR4-GPCRx异聚体的一种或多种患者来源细胞的细胞增殖；和
2)如果所述患者具有包含所述CXCR4-GPCRx异聚体的癌细胞，那么向所述癌症患者内部施用选自由以下组成的组的抑制剂或抑制剂组合：CXCR4的抑制剂、GPCRx的抑制剂和所述CXCR4-GPCRx异聚体的抑制剂。


45.一种用于治疗在具有包含CXCR4-GPCRx异聚体的癌细胞的患者中的癌症的方法，所述方法包括：
1)通过以下方式确定所述患者的癌细胞是否包含所述CXCR4-GPCRx异聚体：从所述患者获得或已经从所述患者获得生物样品，并且对所述生物样品进行或已经对所述生物样品进行测定，以确定所述CXCR4-GPCRx异聚体是否存在于所述患者的癌细胞中；其中：
a)所述CXCR4-GPCRx异聚体的所述GPCRx选自由以下组成的组：ADCYAP1R1、ADORA2B、ADORA3、ADRB2、C5AR1、CALCR、CHRM1、EDNRB、HRH1、MLNR、NTSR1和TACR3；并且
b)对所述生物样品进行的所述测定是或包含以下中的一种或多种：共内在化测定、共定位测定、原位杂交、免疫组织化学、免疫电子显微术、基于邻近度的测定、免疫共沉淀测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、流式细胞术、RNAseq、qRT-PCR、微阵列，或荧光动物测定；并且
2)如果所述患者的癌细胞包含所述CXCR4-GPCRx异聚体，那么向所述患者内部施用选自由以下组成的组的抑制剂或抑制剂组合：CXCR4的抑制剂、GPCRx的抑制剂和所述CXCR4-GPCRx异聚体的抑制剂。


46.根据权利要求40-45中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中所述CXCR4-GPCRx异聚体具有、引起或产生增强的下游信号传导。


47.根据权利要求40-45中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中所述增强的下游信号传导由所述CXCR4-GPCRx异聚体引起。


48.根据权利要求40-45中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中所述增强的下游信号传导由所述CXCR4-GPCRx异聚体的激动作用引起。


49.根据权利要求40-45中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中所述增强的下游信号传导由所述CXCR4-GPCRx异聚体的CXCR4激动作用引起。


50.根据权利要求40-45中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中所述增强的下游信号传导由所述CXCR4-GPCRx异聚体的GPCRx激动作用引起。


51.根据权利要求40-45中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中所述增强的下游信号传导由所述CXCR4-GPCRx异聚体的CXCR4激动作用和GPCRx激动作用引起。


52.根据权利要求40-51中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中所述增强的下游信号传导位于所述CXCR4、相应的GPCRx或所述CXCR4-GPCRx异聚体的下游。


53.根据权利要求40-51中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中所述增强的下游信号传导位于所述CXCR4的下游。


54.根据权利要求40-51中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中所述增强的下游信号传导位于所述相应的GPCRx的下游。


55.根据权利要求40-51中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中所述增强的下游信号传导位于所述CXCR4-GPCRx异聚体的下游。


56.根据权利要求40-51中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中来自所述CXCR4-GPCRx异聚体的所述增强的下游信号传导是相对于来自在其相应的单个原体背景下的CXCR4原体或相应的GPCRx原体的下游信号传导。


57.根据权利要求40-51中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中来自所述CXCR4-GPCRx异聚体的所述增强的下游信号传导是相对于来自在单个原体背景下的CXCR4原体的下游信号传导。


58.根据权利要求40-51中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中来自所述CXCR4-GPCRx异聚体的所述增强的下游信号传导是相对于来自在单个原体背景下的相应的GPCRx原体的下游信号传导。


59.根据权利要求40-51中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中来自所述CXCR4-GPCRx异聚体的所述增强的下游信号传导是相对于来自在其相应的单个原体背景下的CXCR4原体和相应的GPCRx原体的下游信号传导。


60.根据权利要求40-59中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中所述抑制剂或抑制剂组合抑制来自所述癌症患者中的所述CXCR4-GPCRx异聚体的所述增强的下游信号传导。


61.根据权利要求40-59中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中所施用的抑制剂或抑制剂组合抑制来自所述患者的癌细胞中的所述CXCR4-GPCRx异聚体的所述增强的下游信号传导。


62.根据权利要求40-61中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中来自所述CXCR4-GPCRx异聚体的所述增强的下游信号传导通过细胞内Ca2+测定来确定。


63.根据权利要求62所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中所述细胞内Ca2+测定是钙动员测定。


64.根据权利要求40-63中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中所述增强的下游信号传导是增强的钙动员量。


65.根据权利要求64所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中来自所述CXCR4-GPCRx异聚体的所述增强的钙动员量是如下钙动员量，所述钙动员量在用所述CXCL12和所述相应的选择性GPCRx激动剂共同刺激后大于由用所述CXCL12或所述相应的选择性GPCRx激动剂对所述细胞的单一激动剂刺激引起的钙动员量之和，如通过钙动员测定所确定。


66.根据权利要求64的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中来自所述CXCR4-GPCRx异聚体的所述增强的钙动员量是如下钙动员量，所述钙动员量在用所述CXCL12和所述相应的选择性GPCRx激动剂共同刺激后比由用所述CXCL12或所述相应的选择性GPCRx激动剂对所述细胞的单一激动剂刺激引起的钙动员量之和高至少10％、高至少20％、高至少30％、高至少40％、高至少50％、高至少75％，或高至少90％，如通过钙动员测定所确定。


67.根据权利要求64所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中来自所述CXCR4-GPCRx异聚体的所述增强的钙动员量是如下钙动员量，所述钙动员量在用所述CXCL12和所述相应的选择性GPCRx激动剂共同刺激后比由用所述CXCL12或所述相应的选择性GPCRx激动剂对所述细胞的单一激动剂刺激引起的钙动员量之和高至少100％，如通过钙动员测定所确定。


68.根据权利要求64-67中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中所述增强的钙动员量通过细胞内Ca2+测定来确定。


69.根据权利要求68所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中所述细胞内Ca2+测定是钙动员测定。


70.根据权利要求64-67中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中所述增强的钙动员量是协同的钙动员量。


71.在另外的实施方案中，根据权利要求70所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中来自包含所述CXCR4-GPCRx异聚体的细胞的所述协同的钙动员量是如下钙动员量，所述钙动员量在用所述CXCL12和所述相应的选择性GPCRx激动剂共同刺激后比由用所述CXCL12或所述相应的选择性GPCRx激动剂对所述细胞的单一激动剂刺激引起的钙动员量之和高至少10％、高至少20％、高至少30％、高至少40％、高至少50％、高至少75％，或高至少90％，如通过钙动员测定所确定。


72.根据权利要求40-70中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中所述CXCR4-GPCRx异聚体具有以下特征中的两个或更多个：
1)细胞中的所述CXCR4-GPCRx异聚体组分直接地或通过充当变构作用导管的中间蛋白来共定位和在物理上发生相互作用，如通过以下中的一种或多种所确定：共内在化测定、共定位测定、原位杂交、免疫组织化学、免疫电子显微术、基于邻近度的测定、免疫共沉淀测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、流式细胞术、RNAseq、qRT-PCR、微阵列，或荧光动物测定；
2)增强的钙动员量，使得：
a)细胞中在单个原体背景下的所述CXCR4或所述相应的GPCRx在用CXCL12和相应的选择性GPCRx激动剂共同刺激后导致等于或小于由用所述CXCL12或所述相应的选择性GPCRx激动剂的单一激动剂刺激引起的钙动员量之和的钙动员量；并且
b)相对于由用所述CXCL12或所述相应的选择性GPCRx激动剂的单一激动剂刺激引起的钙动员量之和，所述CXCR4-GPCRx异聚体在用所述CXCL12和所述相应的选择性GPCRx激动剂共同刺激后展现出增强的钙动员；
如通过钙动员测定所确定；或
3)CXCR4-GPCRx异聚体选择性试剂：
i)改变患者来源细胞中的所述CXCR4-GPCRx异聚体的异聚体所特有的特性；
ii)改变患者来源细胞中的所述CXCR4-GPCRx异聚体的异聚体所特有的功能；
iii)改变包含所述CXCR4-GPCRx异聚体的患者来源细胞的异聚体所特有的特性；或
iv)降低包含所述CXCR4-GPCRx异聚体的一种或多种患者来源细胞的细胞增殖。


73.根据权利要求40-72中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中所述CXCR4-GPCRx异聚体组分包含单个原体CXCR4和GPCRx。


74.根据权利要求72或权利要求73所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中包含在单个原体背景下的所述CXCR4或所述相应的GPCRx的细胞分别独立地包含：
i)在不存在所述相应的单个原体GPCRx的情况下的所述单个原体CXCR4；或
ii)在不存在所述单个原体CXCR4的情况下的所述相应的单个原体GPCRx。


75.根据权利要求72-74中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中含有在单个原体背景下的所述CXCR4的细胞包含在不存在所述相应的单个原体GPCRx的情况下的所述单个原体CXCR4。


76.根据权利要求72-74中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中含有在单个原体背景下的所述相应GPCRx的细胞包含在不存在所述单个原体CXCR4的情况下的所述相应的单个原体GPCRx。


77.根据权利要求40-76中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中所述细胞中的所述CXCR4-GPCRx异聚体组分直接地或通过充当变构作用导管的中间蛋白来共定位和在物理上发生相互作用，如通过以下中的一种或多种所确定：共内在化测定、共定位测定、原位杂交、免疫组织化学、免疫电子显微术、基于邻近度的测定、免疫共沉淀测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、流式细胞术、RNAseq、qRT-PCR、微阵列，或荧光动物测定。


78.根据权利要求77所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中所述基于邻近度的测定是或包含共振能量转移(RET)、生物发光RET(BRET)、荧光RET(FRET)、时间分辨荧光RET(TR-FRET)、抗体辅助FRET、配体辅助FRET、双分子荧光互补(BiFC)或邻近连接测定(PLA)。


79.根据权利要求40-76中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中所述细胞中的所述CXCR4-GPCRx异聚体组分直接地或通过充当变构作用导管的中间蛋白来共定位并在物理上发生相互作用，如通过以下中的一种或多种所确定：共内在化测定、双分子荧光互补(BiFC)，或邻近连接测定(PLA)。


80.根据权利要求40-79中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中所述患者的癌细胞包含所述CXCR4-GPCRx异聚体。


81.根据权利要求40-80中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中所述CXCR4-GPCRx异聚体展现出所述增强的钙动员量，使得：
a)所述细胞中在单个原体背景下的所述CXCR4或所述相应的GPCRx在用CXCL12和相应的选择性GPCRx激动剂共同刺激后导致等于或小于由用所述CXCL12或所述相应的选择性GPCRx激动剂的单一激动剂刺激引起的钙动员量之和的钙动员量；并且
b)相对于由用所述CXCL12或所述相应的选择性GPCRx激动剂的单一激动剂刺激引起的钙动员量之和，所述CXCR4-GPCRx异聚体在用所述CXCL12和所述相应的选择性GPCRx激动剂共同刺激后展现出增强的钙动员；
如通过钙动员测定所确定。


82.根据权利要求40-80中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中：
i)在所述细胞中来自在所述单个原体背景下的所述原体CXCR4或GPCRx的钙动员是非协同的，如通过钙动员测定所确定；并且
ii)来自所述细胞中的所述CXCR4-GPCRx异聚体的钙动员是协同的，如通过钙动员测定所确定。


83.根据权利要求40-82中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中在所述单个原体背景下：
a)所述细胞中的在不存在所述相应的单个原体GPCRx的情况下的所述单个原体CXCR4；或
b)在所述细胞中的在不存在所述单个原体CXCR4的情况下的所述相应的单个原体GPCRx；
在用CXCL12和相应的选择性GPCRx激动剂共同刺激后导致等于或小于由用所述CXCL12或所述相应的选择性GPCRx激动剂的单一激动剂刺激引起的钙动员量之和的钙动员量，如通过钙动员测定所确定。


84.根据权利要求40-82中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中在所述单个原体背景下，独立地：
a)所述细胞中的在不存在所述相应的单个原体GPCRx的情况下的所述单个原体CXCR4；并且
b)在所述细胞中的在不存在所述单个原体CXCR4的情况下的所述相应的单个原体GPCRx；
在用CXCL12和相应的选择性GPCRx激动剂共同刺激后导致等于或小于由用所述CXCL12或所述相应的选择性GPCRx激动剂的单一激动剂刺激引起的钙动员量之和的钙动员量，如通过钙动员测定所确定。


85.根据权利要求40-84中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中所述CXCR4-GPCRx异聚体在用所述CXCL12和所述相应的选择性GPCRx激动剂共同刺激后导致大于由用所述CXCL12或所述相应的选择性GPCRx激动剂对所述细胞的单一激动剂刺激引起的钙动员量之和的钙动员量，如通过钙动员测定所确定。


86.根据权利要求85所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中相对于由所述CXCR4-GPCRx异聚体的单一激动剂刺激引起的钙动员之和，由所述CXCR4-GPCRx异聚体的共同刺激引起的钙动员量是增强的钙动员量，如通过钙动员测定所确定。


87.根据权利要求86的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中所述增强的钙动员量比由用所述CXCL12或所述相应的选择性GPCRx激动剂的单一激动剂刺激引起的钙动员量之和高至少10％、高至少20％、高至少30％、高至少40％、高至少50％、高至少75％，或高至少90％，如通过钙动员测定所确定。


88.根据权利要求86或权利要求87所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中所述增强的钙动员量是协同的钙动员量。


89.根据权利要求40-71中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物或药物试剂盒，其中所述方法施用CXCR4-GPCRx异聚体选择性试剂。


90.根据权利要求72-89中任一项所述的治疗方法、抑制方法、药物组合物...

【专利技术属性】
技术研发人员：申东承，金恩熙，郑在娟，杨昌洙，李米林，金素煦，许原基，宋容范，朴哲五，朴慧领，李智英，
申请(专利权)人：GPCR治疗公司，
类型：发明
国别省市：韩国;KR