一种白芷药材醇提液有效成分群指纹图谱的建立方法，包括如下步骤： （１）白芷药材的提取 精密称取２０ｇ白芷药材，加入１６０ｍｌ９５％乙醇，回流提取１～２ｈ，挥干乙醇，残渣用甲醇溶解定容至２０ｍｌ，从中取２５０ｕｌ用甲醇稀释至７．５ｍｌ，过０．４５ｕｍ微孔滤膜，得到滤液； （２）白芷药材指纹图谱的建立 精密吸取滤液２０ｕｌ，采用高效液相色谱方法进行测定，色谱条件：以甲醇－水为流动相系统，柱温３０℃，进样量２０ｕｌ，波长２５４ｎｍ，Ｌｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒ５－Ｃ１８（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）色谱柱，将指纹图谱分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ区，即得到白芷药材醇提液有效成分群指纹图谱。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种指纹图谱，特别涉及一种白芷药材醇提液有效成分群指纹图谱及其建立方法和应用。
技术介绍
中药是多种成分针对多个靶点叠加起作用，而目前的质控标准是以某种特定成分为指标，随着中药研究的现代化，中药的质量研究逐渐从单一有效成分或指标成分的定性定量分析转向有效成分群分析。目前对白芷的质量控制仅限于对白芷中欧前胡素和异欧前胡素进行含量测定。因此，白芷药材的质量控制，除要建立有效成分欧前胡素、异欧前胡素的含量测定方法，制定含量测定限度外，建立有效成分群的指纹图谱分析方法，更有利于全面掌握药材的质量。中药指纹图谱技术对增加中药质控含量，提高中药工业整体水平，实现中药走向世界，具有非常重要的现实意义。指纹图谱的作用主要是反应复杂成分的中药及其制剂内在质量的均一性和稳定性。以指纹图谱技术应用为中心，促进中药质量标准的现代化。国家药监局已从中药注射剂开始，要求企业逐步建立指纹图谱质量标准，并将逐步扩大指纹图谱技术的应用范围。结合《中华人民共和国药典》(2005年版)，将进一步修改和完善中药国家标准，增加中药饮片质量标准，体现中药标准的现代化。目前，白芷药材醇提液有效成分群指纹图谱还未见报道。
技术实现思路
为了解决上述现有技术存在的不足之处，本专利技术的首要目的在于提供一种白芷药材醇提液有效成分群指纹图谱，对白芷药材质量进行控制。本专利技术的另一目的在于提供上述醇提液有效成分群指纹图谱的建立方法。本专利技术的再一目的在于提供上述醇提液有效成分群指纹图谱的应用。本专利技术所用的白芷药材为伞形科植物白芷Angelica dahurica(Fisch.exHoffm.)Benth.et Hook.f或杭白芷Angelica dahurica(Fisch.ex Hoffm.)Benth.etHook.f.var.formosana(Boiss.)Shanet Yuan的干燥根，具有散风除湿、通窍止痛、消肿排脓等功效，是临床常用的解表中药之一。本专利技术的目的通过下述技术方案实现一种白芷药材醇提液有效成分群指纹图谱的建立方法，包括如下步骤(1)白芷药材的提取精密称取20g白芷药材，加入160ml95％乙醇，回流提取1～2h，挥干乙醇，残渣用甲醇溶解定容至20ml，从中取250ul用甲醇稀释至7.5ml，过0.45um微孔滤膜，滤液供HPLC(高效液相色谱方法)分析。(2)白芷药材指纹图谱的建立精密吸取滤液20ul，采用高效液相色谱方法进行测定，色谱条件Lichrospher5-C18(250mm×4.6mm)色谱柱；以甲醇-水为流动相系统，柱温30℃，进样量20ul，波长254nm，将指纹图谱分为I、II、III区，得到白芷药材醇提液有效成分群指纹图谱。为了更好地实现本专利技术，所述甲醇-水流动相系统0～5min，5％～20％甲醇；5～15mn，20％甲醇；20～30mn，20％～70％甲醇；20～30mn，70％甲醇；30～40mn，70％～90％甲醇，上述甲醇为体积百分比。一种白芷药材醇提液有效成分群指纹图谱通过上述方法得到。所述白芷药材醇提液有效成分群指纹图谱是由13个共有指纹峰构成的；其中11号峰为欧前胡素，13号峰为异欧前胡素。由于11号峰与相邻色谱峰分离较好，峰位较为居中，各样品中所共有且已鉴定出其物质名称(欧前胡素)，因此选取供试品色谱峰中的11号欧前胡素峰为参照峰，其色谱峰相对保留时间和相对峰面积为1。以11号峰为参照，所述白芷药材指纹图谱的13个共有指纹峰(特征峰)各相对保留时间分别为1号峰0.031～0.034；2号峰0.086～0.088；3号峰0.607～0.649；4号峰0.658～0.665；5号峰0.704～0.708；6号峰0.730～0.739；7号峰0.749～0.755；8号峰0.810～0.816；9号峰0.842～0.847；10号峰0.856～0.861；11号峰1； 12号峰1.085～1.087；13号峰1.181～1.186。各共有指纹峰相对峰面积范围分别为 1号峰0.005～0.061；2号峰0.016～0.132；3号峰0.050～0.366；4号峰0.010～0.135；5号峰0.03～0.148； 6号峰0.006～0.153；7号峰0.086～0.328；8号峰0.047～0.105；9号峰0.018～0.059；10号峰0.030～0.113；11号峰1； 12号峰0.251～0.492；13号峰0.304～0.845。通过白芷不同提取部位与指纹图谱相关的药理实验将白芷药材醇提液有效成分群指纹图谱分为I、II、III区。所述I区包括1号峰、2号峰；所述II区包括3号峰、4号峰、5号峰、6号峰、7号峰、8号峰、9号峰、10号峰；所述III区包括11号峰、12号峰、13号峰。所述白芷药材醇提液有效成分群指纹图谱的有效成分群为II区和III区；其中II区主要与解热、抗炎、抗内毒素血症作用相关，III区的色谱峰主要与镇痛、镇静作用相关。上述白芷药材醇提液有效成分群指纹图谱在白芷药材质量控制中的应用。可用于对白芷进行整体的质量控制，也可作为测定白芷中化学组分的方法和白芷药材的鉴别以及对白芷醇提液有效成分群进行新药开发。本专利技术建立了白芷药材醇提液的指纹图谱，并在此基础上对其主要的药效——镇痛、镇静、抗炎、抗内毒素血症作用进行研究，明确了白芷共有指纹峰与药效学的对应关系，建立了能体现白芷药效的有效成分群指纹图谱，使白芷药材质量评价更具科学性。本专利技术与现有技术相比，具有如下优点和有益效果1、通过对13批不同产地白芷药材进行测定，制定了白芷指纹图谱相应的技术参数，以欧前胡素色谱峰(11峰)作为参照物，计算了其相对保留时间，相对峰面积值，并总结出了每个共有指纹峰相对保留时间范围，相对峰面积范围，可作为白芷指纹图谱分析法的参考数据。2、从药材整体色谱图入手，选取特征峰，并大致判断其峰位和比例关系，构成白芷药材特有的色谱指纹图谱全貌，使白芷药材的质量控制指标从原有的某几个成份含量的测定，上升为对整个药品内在品质的检测，避免了单一的化学成分检测的缺陷。3、谱效学的研究使指纹图谱与药效结果相对应起来，白芷镇痛、镇静作用主要与醇提液指纹图谱III区的色谱峰相关，解热、抗炎、抗内毒素血症作用主要是醇提液指纹图谱II区白芷成分的特征峰的作用。4、本专利技术所建立的体现白芷药效的有效成分群指纹图谱，为全面评价白芷药材提供了有力的根据。附图说明图1为13个不同产地白芷药材醇提液指纹图谱。图2为欧前胡素标准品图。图3为异欧前胡素标准品图。图4为白芷不同提取部位对热致痛小鼠痛阈的影响图。具体实施例方式下面结合实施例和附图对本专利技术作进一步详细的描述。但本专利技术的实施方式不限于此。实施例1(1)供试品的制备方法精密称取20g白芷药材，加入160ml95％乙醇，回流提取2h，挥干乙醇，残渣用甲醇溶解定容至20ml，从中取250ul用甲醇稀释至7.5ml，过0.45um微孔滤膜，滤液作为供试品溶液供HPLC分析。分别制得13个不同产地(见表10)的白芷药材的供试品溶液。(2)白芷药材指纹图谱的建立精密吸取供试品溶液20ul，采用高效液相色谱进行测定，以甲醇-水为流动相系统，柱温30℃，进样量20ul，波长254nm，0～本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：聂红，张慧，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：
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