在血细胞分析仪上进行红细胞血型抗原检测的方法技术

本发明专利技术涉及一种医学上红细胞血型抗原的检测方法，特别是涉及一种在血细胞分析仪上进行的红细胞血型抗原检测的方法，主要应用于红细胞血型鉴定。该方法具体是在血细胞分析仪上依次通过预稀释、反应、测定步骤，分别检测由待测红细胞和已知血型抗体构成的反应体系，和由未加入血型抗体的待测红细胞混悬液构成的对照体系的红细胞参数；然后通过计算得出两个体系红细胞参数的变化情况，与介定范围进行比较分析，可判断出反应体系中是否发生了凝集反应，从而间接检测出待测红细胞上是否存在有与已知血型抗体相对应的血型抗原。与现用方法比较，本发明专利技术方法具有准确性高，自动化程度高等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种医学上红细胞血型抗原的检测方法，特别是涉及一种在血细胞分析仪上进行的红细胞血型抗原检测的方法，主要应用于红细胞血型鉴定。
技术介绍
一、什么是血型，什么是红细胞血型，什么是红细胞血型抗原，什么是红细胞血型鉴定，什么是红细胞血型抗原检测。血型是人类血液特征之一，是来自父母双方以抗原抗体为表现形式的有规律的遗传性状。最初血型是指存在于红细胞上不同的特异性抗原而言；后来发现除红细胞外，白细胞、血小板、血清蛋白等均具有其特有的血型。红细胞血型是指由存在于红细胞上不同的特异性抗原特征而决定的血型系统。红细胞血型抗原是指存在于红细胞表面的特异性血型抗原物质。根据红细胞表面的抗原种类不同，目前已发现27个红细胞血型系统，但对临床意义最大的是ABO和Rh两个血型系统。目前临床上所应用的红细胞血型鉴定主要是指红细胞ABO和Rh两个血型系统的检测鉴定。ABO血型系统的抗原有H、A、B三种抗原，根据红细胞表面所具有的抗原不同而分为A、B、O、AB四种血型表现型，红细胞上无A和B血型抗原者为O型；红细胞上有A抗原，而无B抗原者为A型；红细胞上有B抗原，而无A抗原者为B型；红细胞上有A和B血型抗原者为AB型；H抗原则均存在于O型、A型、B型和AB型红细胞上。Rh血型系统的抗原有D、C、E、c、e五种抗原，临床上常以D抗原存在与否来表示Rh血型的阳性和阴性。血型鉴定是指应用生物学检测技术，检测红细胞表面的血型抗原种类情况以判定红细胞血型的方法。红细胞血型抗原检测是红细胞血型鉴定的主要方法。临床应用最为广泛的是ABO和Rh两个血型系统的检测鉴定，即通过生物学检测方法检测红细胞上是否存在有H、A、B抗原来判定红细胞的ABO血型；检测红细胞上是否存在有D抗原来判定红细胞的Rh血型。二、现用血型抗原检测方法介绍现用红细胞血型抗原的检测方法主要是红细胞盐水凝集法。在免疫检验学中，红细胞特异性凝集反应是指红细胞表面的抗原与相应抗体在电解质介质中结合，使原来混匀状态的反应体系中，产生由两个或两个以上红细胞结合成的凝集快，而出现肉眼可见的凝集反应。血型抗原检测是根据待测红细胞与已知血型抗体是否发生特异性凝集反应，来判断红细胞表面是否存在有与已知血型抗体对应的血型抗原。现用的血型抗体一般有两种，分别是人源的标准血清和应用单克隆技术制备的标准血清。具体检测法有玻片法和试管法所需试剂和材料1、标准血清(如抗A、抗B、抗H、抗D等)。2、受检者5％红细胞盐水混悬液。(一)玻片法1、取洁净玻片一块，分别滴加标准血清和受检者5％红细胞盐水悬液各1滴。2、转动玻片，以使红细胞和标准血清充分混匀，室温放置10-15分钟，转动玻片观察结果。3、结果判定若出现红细胞凝集反应，可判定为红细胞存在有与加入已知标准血清对应的血型抗原；若无出现红细胞凝集反应，可判定为红细胞不存在有与加入已知标准血清对应的血型抗原。(二)试管法1、取一支干净小试管，分别滴加标准血清和受检者5％红细胞盐水悬液各1滴。2、混匀后在室温放置5分钟。3、以1000转/分的条件离心1-2分钟，轻弹试管，观察红细胞有无凝集。4、结果判断若出现红细胞凝集反应，可判定为红细胞存在有与加入已知标准血清对应的血型抗原；若无出现红细胞凝集反应，可判定为红细胞不存在有与加入已知标准血清对应的血型抗原。三、现用血型抗原检测法的不足红细胞盐水凝集法已广泛用于临床检验，是最常规的血型鉴定技术。但仅适用于手工操作，且具有操作繁琐、容易误判、容易受冷凝集、假凝集因素影响而使结果难以判断等缺点。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的上述缺点，提供一种在血细胞分析仪上进行血型抗原检测的方法。根据本专利技术的方法，可以在血细胞分析仪上进行血型抗原检测，也可以设计制作出能同时进行血细胞分析和血型抗原检测的血细胞分析仪器或能进行血型抗原检测的分析装置。为实现上述目的本专利技术的解决方案为在血细胞分析仪上依次通过预稀释、反应、测定步骤，分别检测由待测红细胞和已知血型抗体构成的反应体系，和由未加入血型抗体的待测红细胞混悬液构成的对照体系的红细胞参数；然后通过计算得出两个体系红细胞参数的变化情况，与介定范围进行比较分析，可判断出反应体系中是否发生了凝集反应，从而间接检测出待测红细胞上是否存在有与已知血型抗体相对应的血型抗原。所述的血细胞分析仪是指能够进行血细胞计数或体积分析的仪器或装置。所述的变化情况是由于在反应体系中，红细胞与相应血型抗体发生凝集反应，可使游离红细胞数量减少，而由两个或两个以上红细胞结合而成的红细胞凝集颗粒增多；在进行细胞粒子计数时，红细胞凝集颗粒可视为一种比单个游离红细胞体积大的大红细胞；因此，发生凝集反应后细胞群的体积和体积分布情况与未发生凝集反应时比较，会发生改变；通过血细胞分析仪测定出的两个体系红细胞参数进行计算，计算得出两者的差值、比值或差值与对照体系参数值的比值作为变化情况参数值。如 所述的比较分析是通过血细胞分析仪测定计算出的两个体系红细胞参数的变化情况参数值与介定范围进行比较，如果变化情况参数值超出介定范围为分析结果阳性，反之为阴性；可选定一个或一个以上红细胞参数进行比较分析，若选定参数的变化情况参数值分析结果阳性，可判定为红细胞存在有与已知血型抗体相对应的血型抗原，若选定参数的变化情况参数值分析结果阴性，可判定为红细胞不存在有与已知血型抗体相对应的血型抗原。所述的介定范围是指在无凝集反应发生时，血细胞分析仪测定反应体系和对照体系的某一红细胞参数变化情况的允许误差范围；为提高准确度，介定范围可选定为该允许误差范围的1-50倍。反应体系是指由血样与稀释液和血型抗体试剂按照一定的比例混合而成的混悬液；对照体系是指由血样与稀释液按照一定比例稀释而成的混悬液。血型抗体试剂是指含有能够与红细胞血型抗原发生特异性凝集反应的抗体或凝集素的试剂溶液，试剂基质的渗透压、酸碱度、离子强度、导电率要与反应体系使用的稀释液相同。预稀释是指在计数前用稀释液将血样稀释成一定红细胞浓度的混悬液，在加入血型抗体反应时，既有利于红细胞凝集反应的发生，也可以防止因红细胞浓度太高而形成可以导致测定小孔堵孔的大红细胞凝集快；预稀释的比例可以为1∶1-1∶50000。反应是指在经预稀释的红细胞混悬液中加入血型抗体试剂，使待测红细胞与血型抗体接触，经过一定的时间进行凝集反应；血型抗体试剂也可以在预稀释时与稀释液同时加入；加入血型抗体试剂后，血样与血型抗体试剂和稀释液的比例可以为1∶1-1∶50000。用于结果分析的红细胞参数分别有1)红细胞总数是指血细胞分析仪所测定得出的红细胞数量参数，表示每升血样中的红细胞数。不同的分析仪所界定红细胞计数的甄别阈值体积范围不同，通常界定在36-360fL范围的粒子计数为红细胞，在血型抗原分析时，因为红细胞凝集颗粒的形成，反应体系中的粒子体积比原血样中的细胞粒子体积大，因此仪器红细胞计数的甄别阈值体积范围可扩大至1-1000fL范围。2)红细胞平均体积是指血细胞分析仪所测定得出的红细胞平均体积参数。3)红细胞比积是指血细胞分析仪所测定得出的红细胞比积参数。4)某一体积段范围的红细胞数量在仪器界定的红细胞计数甄别阈值体积范围内，某一体积段范围红细胞的数量参数。5)某一体积段范围的红细胞比例在本文档来自技高网...

【技术保护点】
在血细胞分析仪上进行红细胞血型抗原检测的方法，其特征在于：在血细胞分析仪上依次通过预稀释、反应、测定步骤，分别检测由待测红细胞和已知血型抗体构成的反应体系，和由未加入血型抗体的待测红细胞混悬液构成的对照体系的红细胞参数；然后通过计算得出两个体系红细胞参数的变化情况，与介定范围进行比较分析，可判断出反应体系中是否发生了凝集反应，从而间接检测出待测红细胞上是否存在有与已知血型抗体相对应的血型抗原。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：潘干华，
申请(专利权)人：潘干华，
类型：发明
国别省市：44[中国|广东]