一种丹参药材指纹图谱检测方法技术

本发明专利技术公开了一种高含量丹参多酚酸盐粉针剂指纹图谱检测方法。本发明专利技术的检测方法包括丹参药材、丹参多酚酸盐及其粉针剂的指纹图谱检测方法。本发明专利技术的方法能有效地控制丹参多酚酸盐制备的全过程，确保产品的质量与含量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及中药
具体涉及一种。
技术介绍
丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)是传统的活血化瘀中药之一，有长期的临床应用基础。丹参注射液是临床上治疗冠心病、心绞痛、心肌梗塞、缺血性中风等疾病的常用药物，但现有的注射剂因有效成分不明确、质量控制指标不严格导致临床疗效不稳定，不良反应时常出现。这些问题的出现，关键是丹参的有效成分未能完全阐明。本专利技术人针对这些问题开展了丹参的水溶性成分的系统研究，发现丹参的水溶性有效成分是以盐的形式存在于生药材中，这些成分主要为丹参乙酸镁以及同系物等。通过活性筛选和药理学研究发现丹参乙酸镁和它的同系物均为活性成分，其中以丹参乙酸镁药理作用最强，它是丹参的主要活性成分 丹参乙酸镁结构式并首次阐明了以丹参多酚酸盐粉针剂为主要成分的多酚酸盐是丹参中最重要的有效活性部位。本专利技术人在此基础上，成功地提供了丹参的新制剂，该制剂为一种高含量丹参多酚酸盐粉针剂，其中丹参乙酸镁含量超过80％，其余成分为紫草酸镁、迷迭香酸钠以及少量丹参素。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于研究设计。本专利技术经大量研究，提拱了一种。本专利技术的指纹图谱检测方法包括三个部分(1)丹参药材指纹图谱检测方法；(2)丹参多酚酸盐指纹图谱检测方法；(3)丹参多酚酸盐粉针剂指纹图谱检测方法。下面具体描述本专利技术的检测方法和制定该方法的试验1、丹参多酚酸盐粉针剂的药材指纹图谱检测方法本专利技术的方法基于下列试验丹参多酚酸盐粉针剂所用原药材为丹参，汉语拼音为Danshen。(1)来源丹参为唇形科植物，其拉于学名为Savia miltiorrhiza Bge，药用部分为根有根茎。药材共10批，产地分别为安徽省亳州市五马(一号)、安徽省亳州市五马(二马)、安徽省张店(一号)、安徽省张店(二号)、安徽省亳州市大扬(一号)、安徽省亳州市大扬(二号)、安徽省亳州市十九里(一号)、安徽省亳州市十九里(二号)、安徽省亳州市十字河、安徽省亳州市义门。编号分别为A，B，C，D，E，F，G，H，I，J。(2)供试品的制备丹参多酚酸为水溶性成分，因此采用水浸泡后，回流提取的方法可以将其中多数丹参多酚酸类成分提取出。调节pH使其成为酸性，然后用乙酸乙酯萃取，萃取液定容后用于液相色谱分析，结果证明该提取方法可行，与中间体和成品指纹图谱间的相关性良好。(3)参照物的制备丹参药材经上述方法提取后，经HPLC分析出现多个色谱峰，但以丹参乙酸为其主要成分，丹参乙酸的积分面积在指纹图谱中所占的比例较大且较稳定，因此我们选之为参照物。其制备方法为直接将丹参乙酸镁盐对照品溶解于流动相进行分析，结果证明该制备方法可行。(4)流动相的确定药材提取液的测定共选择了5种流动相系统(1)甲醇-0.1％冰乙酸(5∶95)；(2)甲醇-5mol/L磷酸二氢钾液(30∶70)；(3)甲醇-5mol/L磷酸二氢钾液(25∶75)；(4)甲醇-乙腈-水(41.5∶1∶48.5，用甲酸调pH至2.20)；(5)甲醇-乙腈-水-甲酸(42∶1∶59∶0.2)。结果表明，各种流动相中以甲醇-乙腈-水-甲酸(42∶1∶59∶0.2)系统为最佳，谱图上各个色谱峰(254nm)分离度较好，保留时间适宜，因此选此流动相系统作为丹参注射液的HPLC指纹图谱检测的流动相。(5)检测波长的选择共选择了254nm、290nm2种波长，在这两种波长下的HPLC谱图中均有多个色谱峰，但在检测波长为254nm时色谱峰较多且峰型较好，综合考虑，选择254nm为制作指纹图谱的测定波长。(6)稳定性及精密度试验以编号为C的药材的制备样品为供试品，分别于0天，10天和30天进样，记录各共有色谱峰保留时间和积分面积，以丹参乙酸镁的保留时间和积分面积为参照，换算出各共有峰的相对保留时间和相对积分面积，结果表明供试品的稳定性良好。另外编号为C的药材的制备样品连续进样6次，记录各共有色谱峰保留时间和积分面积，以丹参乙酸镁的保留时间和积分面积为参照，换算出各共有峰的相对保留时间和相对积分面积，结果见表1。由表1可见，各共有峰的(相对)保留时间和(相对)积分面积基本一致，相对标准偏差均小于3.0％。表1丹参多酚酸盐粉针剂药材指纹图谱精密度试验 注“S”表示参照物(7)重现性试验取编号为C的供试品5份，按上述方法进行制备并进行检测，考察各色谱峰相对保留时间、峰面积比值的一致性，结果见表2。所考察的7个共有峰(其中编号为1和2的色谱峰为组峰)的相对保留时间及相对峰面积的相对标准偏差均小于3％。表2丹参多酚酸粉针剂药材指纹图谱重现性试验 注S为参照物 (8)指纹图谱及技术参数1)指纹图谱根据10批供试品HPLC图谱所给出的相关参数，丹数药材按样品制备方法进行制备所得供试品的色谱峰在60min之内全部出现；2小时的色谱图表明1小时以后未出现任何色谱峰。比较各批样品的色谱图发现其中有7个色谱峰是各批样品所共有的，编号分别为1、2、3、4、5、6、7，其中1和2为组峰。2)共有指纹峰面积及保留时间的比值10批药材供试品，以丹参乙酸镁为参照物，各指纹峰的积分面积及积分面积，保留时间及相对保留时间见表3；表4所示为各共有指纹峰占总峰面积的比例、差值，结果可见各批供试品的重现性较好，也符合《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求》(暂行)。其中共有峰1和2的保留时间按组峰各色谱峰保留时间的平均值计算，峰面积按组峰各色谱峰面积之和计算。表3丹参多酚酸盐粉针剂药材共有指纹峰面积及保留时间的比值 注S为参照物，*为参照物的绝对保留时间表4药材各共有指纹峰所占总峰面积的比例及其差值 3)非共有峰面积试验的10批样品中计算了非共有峰面积所占总峰面积的比值，结果表5。由表5可见，各批药材非共有峰面积占总峰面积均小于10％，符合《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求》(暂行)，也即说明生产丹参多酚酸盐注射剂粉针剂所用药材符合要求。表5丹参多酚酸盐粉针剂HPLC指纹图谱非共有纹峰面积的百分比 在上述大量试验的基础上，确定了高含量丹参多酚酸盐丹参药材纹图谱检测方法。本专利技术提供了高含量丹参多酚酸盐粉针剂的丹参药材指纹图谱检测方法，该方法包括下列步骤丹参(Danshen)拉丁名Rakix Salviae Miltiorrhizae(1)来源来源于唇形科植物丹参Salviae miltiorrhizae Bge的干燥根及根茎。(2)供试品的制备药材经粉碎机粉碎后过40目筛，取各批药材粉末500mg，精密称定，置于100ml具塞三角瓶中，各加30ml蒸馏水浸泡过夜，转移至圆底烧瓶中，再用30ml蒸馏冷却后用10％盐酸调pH值至2.0(用酸度计测定)，再用乙酸乙酯萃取3次，每次80ml。萃取液减压浓缩后用流动相超声溶解，并用容量瓶定容至10ml，作为供试品溶液。HPLC分析前用微孔滤膜过滤。(3)参照物溶液的制备丹参乙酸作为参照物，准确称取4.0mg，用流动相定容至5ml，作为参照物溶液。(4)检测方法测定方法为高效液相色谱法(HPLC)。1)仪器与试剂Agilent1100高效液相色谱仪及Chemstation色谱工作站，ZorbaxC18(4.6mm×25cm，5μm)色谱本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高含量丹参多酚酸盐粉针剂指纹图谱检测方法，其特征在于该检测方法包括：（１）丹参药材指纹图谱检测方法；（２）高含量丹参多酚酸盐指纹图谱检测方法；（３）高含量丹参多酚酸盐粉针剂指纹图谱检测方法。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：丁愉，刘志安，史晓浩，刘国平，孟庆国，吴云鸣，李平，陈磊，孙溢，罗青松，
申请(专利权)人：上海绿谷制药有限公司，上海绿谷生命园医药有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]