本发明专利技术提供了一种用于医疗领域的染色体核型分析质控细胞建株及质控方法，其主要特征是以常规淋巴细胞分离法分离受试染色体异常核型患者及正常者外周血、骨髓或羊水中淋巴细胞，经与含ＥＢ病毒的ＲＰＭＩ１６４０培养液混合并置３７℃５％ＣＯ２中培养，淋巴细胞被ＥＢ病毒转化为持续分裂、永久生存的细胞系或细胞株，当细胞数达到１０↑［５］／ｍｌ时收集细胞，以冻存液配成１０↑［５］／ｍｌ的细胞悬液，经定量分装后置－２０℃２ｈ，再置－７０℃２ｈ，然后冻存在－１９６℃液氮中即为质控细胞，质控主管者定期将质控细胞分发给各受控实验室作染色体核型分析，并考评其反馈的分析结果的准确性，判断其技术水平，以此进行染色体核型分析质量控制。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及，主要用于各医疗单位细胞遗传实验室或产前诊断实验室作染色体核型分析时的质量控制。染色体核型分析就是对染色体的结构和数目有否异常进行分析。染色体由DNA、组蛋白和RNA组成，而DNA由带有遗传信息的基因组成。人类有23对染色体，其中22对为常染色体，1对为决定男女性别的性染色体，任何人体如果染色体数目增多或减少，或某染色体有缺失或结构改变，均会发生相应的染色体病，临床表现为智力低下、发育障碍、性异常、死胎流产等异常妊娠、不育不孕、原发或继发闭经等染色体病特征。染色体常位于细胞核内，经细胞培养、制片、染色后，可在显微镜下分析染色体有无数目和结构异常，作为胎儿产前染色体病的诊断指标，或出生后染色体病的诊断指标。某些实验项目的质量控制就是由各医疗或科研机构的主管部门将已知某种物质(含量)的质控品定期分发给受控实验室检测，根据受控实验室对质控品的测定值，通过与质控品实际值的比较处理，可知实验测定值与质控品实际值的差距，从而全面系统地考核受控实验室的仪器、器材、试剂等实验条件及实验人员的技术水平，对质控试验不合格的实验室，要求其作出整改措施，这就是实验项目的质量控制。但目前尚未见国内外文献报道以及有相关实验室用淋巴细胞建株的方法来制备染色体核型分析质控细胞并作相关的室内与室间质量控制。本专利技术的目的是要提供以淋巴细胞建株的方法来制备染色体核型分折质控细胞系(株)以及这类质控细胞系(株)的保存和质控方法。本专利技术的目的是这样实现的取已确诊的各类染色体病患者(可包括部分染色体正常者)的外周血、骨髓或羊水标本，用常规淋巴细胞分离液经离心分离出的白细胞(包括淋巴细胞)与RPMI1640细胞培养液及EB病毒(EBV)转化液定量混合，经37℃5％CO2培养箱中培养，EBV能选择性地转化人类B淋巴细胞，并使其成为持续分裂、永久生存的细胞系或细胞株，当细胞数达到105/ml时，离心培养液收集细胞沉淀，根据细胞数量加入定量的冻存液使成105/ml的细胞悬液，以每管1mL的量分装在冻存管中，置-20℃2h，再置-70℃2h，然后冻存在-196℃液氮中作为备用的质控细胞，用时复苏质控细胞，经进一步培养增殖细胞数后或直接分发给受控实验室，作细胞培养及染色体制片核型分析，受控实验室将实验结果反馈给质控管理机构，以判断受控实验室是否准确地鉴定出质控细胞的异常染色体。本专利技术主要由已确诊的染色体结构或数目异常的临床病例包括21三体型、18三体型、13三体型、5P部分单体、45XO、X三体综合症、47XXY、47XYY、各类嵌合体、染色体易位、缺失、倒位、环状以及等臂染色体等染色体病患者外周血淋巴细胞、骨髓细胞或羊水胎儿细胞作为原代细胞，以常规淋巴细胞分离液分离出淋巴细胞(包括白细胞)，运用常规细胞培养基培养法以及EB病毒(EBV)能选择性地转化人类B淋巴细胞、并使其成为持续分裂、永久生存的细胞系或细胞株的原理，经冻存和复苏，来制备染色体核型分析专用的质控细胞系(株)，冻存备用，经实验证实，淋巴细胞在经EBV转染持续分裂的过程中染色体数目与结构不会发生改变，即使有所改变，也刚好用来考核受控实验室鉴别染色体核型改变的水平(参考实验室与受控实验室同时做)，且可建立核型异常染色体细胞库，为其他相关科研提供异常染色体的细胞系(株)。本专利技术的细胞培养液(基)选用RPMI1640培养基，其配方是称取市售RPMI1640培养基粉末10.4g，溶于1000ml的双蒸水中，40℃保存，有效期为1至2个月，存放-20℃可较长期保存，也可选用市售的TC199、Eagle、Ham’s F10、F12、MEM等培养基，B95-8细胞株为狨猴B淋巴细胞株，可由中科院遗传研究所提供，B95-8细胞株经复苏后在RPMI1640培养基中培养4-7天，上清液中可得到含大量EBV的EBV悬液，冻存液含95％胎牛血清及5％二甲亚砜。本专利技术按以下具体方法进行染色体核型分析质控细胞建株并进行质量控制。外周血淋巴细胞取已确诊为相关染色体病患者的静脉血5-10ml，肝素抗凝，放无菌离心管中3000rpm离心30分钟，取血浆及其与红细胞层之间的灰白色白细胞层，放入另一离心管中，用RPMI1640培养基洗涤3次，然后用2mlRPMI1640重悬，加入EBV悬液1.2ml，环孢菌素A 0.4ml混匀，等份转入两个10ml培养瓶中，置37℃5％CO2培养箱中，培养24-48h后观察细胞转化生长情况，当细胞数达到105/ml时，将细胞悬液收集到10ml离心管中1200rpm离心10分钟，弃上清液，加入冻存液，分装在数支冻存管中，每管1ml冻存液，将盖拧紧，标明质控细胞名称、代数、冻存日期及操作人，置-20℃2h，再置-70℃2h后放入-196℃液氮罐中保存。此即为染色体核型分折质控细胞，需用质控细胞来做质控时，将质控细胞复苏，方法是取出冻存管，迅速入37℃水浴，不断震摇，尽快融化，然后离心去上清液，用新鲜培养液清洗细胞悬液一次，用培养液适当稀释后装入培养瓶，37℃培养，次日更换培养液，以后按常规培养、制片、染色、作染色体核型鉴定。如果要将质控细胞运送到较远的实验室，可用液氮或干冰保存运送法作短期运输效果较好，或选生长状态较好的细胞，待细胞生长达80％-90％汇合时，去掉旧培养液换入新培养液达到瓶的颈部，保留小许空间运输，到达后倒出大部分培养液，保留正常量，置37℃培养，次日传代培养，制片、染色、作染色体鉴定。骨髓染色体鉴定质控细胞的制备方法同外周血淋巴细胞质控细胞的制备方法。羊水胎儿细胞取已确诊的染色体病患儿羊水以无菌操作分装入若干个试管内，每管10-15ml，1000r/min离心10min，去上清液，留约1.5ml，轻轻混匀后，用RPMI1640洗3次，然后按外周血淋巴细胞进行建株与质控。染色体核型分析质控方法由质控主管机构、学术机构、参考实验室及各受控实验室组成质控网络，由参考实验室定期选择数种染色体结构或数目异常的质控细胞发放给各受控实验室，由受控实验室将质控细胞与被检细胞在同等条件下作细胞培养、制片、分带及染色体鉴定，结果通过计算机网络等方式反馈给参考实验室；由参考实验室核对其结果是否准确。染色体核型分析质控结果评价方法可根据实际情况评分，如细胞培养质量指标包括培养后细胞总数、推成规定数量的细胞玻片后平均每高倍视野细胞数，染色体分裂像质量指标包括染色体分裂像分散度质量指标如计数100个分裂像以观察46条染色体分布在油镜视野的个数、染色体相交、相接的数量及染色体分裂像总数指标包括全部细胞片子可计算、可分析分裂像数目，染色体带纹是否清晰显示，特别是质控细胞中的异常染色体是否都被正确地鉴定出来等。权利要求1.一种用于医疗领域的，其主要特征是取已确诊的各类染色体病患者(可包括部分染色体正常者)的外周血、骨髓或羊水标本，用常规淋巴细胞分离液经离心分离出的白细胞(包括淋巴细胞)与RPMI1640细胞培养液及EB病毒(EBV)转化液定量混合，经37℃5％CO2培养箱中培养，EBV能选择性地转化人类B淋巴细胞，并使其成为持续分裂、永久生存的细胞系或细胞株，当细胞数达到105/ml时，离心培养液收集细胞沉淀，根据细胞数量加入定量的冻存液使成105/ml的细胞悬液，以每管1mL的量分本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于医疗领域的染色体核型分析质控细胞建株及质控方法，其主要特征是取已确诊的各类染色体病患者（可包括部分染色体正常者）的外周血、骨髓或羊水标本，用常规淋巴细胞分离液经离心分离出的白细胞（包括淋巴细胞）与ＲＰＭＩ１６４０细胞培养液及ＥＢ病毒（ＥＢＶ）转化液定量混合，经３７℃５％ＣＯ２培养箱中培养，ＥＢＶ能选择性地转化人类Ｂ淋巴细胞，并使其成为持续分裂、永久生存的细胞系或细胞株，当细胞数达到１０↑［５］／ｍｌ时，离心培养液收集细胞沉淀，根据细胞数量加入定量的冻存液使成１０↑［５］／ｍｌ的细胞悬液，以每管１ｍＬ的量分装在冻存管中，置－２０℃２ｈ，再置－７０℃２ｈ，然后冻存在－１９６℃液氮中作为备用的质控细胞，用时复苏质控细胞，经进一步培养增殖细胞数后或直接分发给受控实验室，作细胞培养及染色体制片核型分析，受控实验室将实验结果反馈给质控管理机构，以判断受控实验室是否准确地鉴定出质控细胞的异常染色体。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：翁炳焕，
申请(专利权)人：翁炳焕，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]
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