细胞凋亡敏感性蛋白CAS的应用制造技术

本发明专利技术通过筛选在肝细胞癌的癌组织和癌旁组织中存在差异表达的蛋白，找到了一种在肝细胞癌的癌组织中高表达的蛋白，免疫印迹实验进一步证实了细胞凋亡敏感性蛋白ＣＡＳ的确在肝细胞癌的癌组织与癌旁组织中存在差异表达。鉴于细胞凋亡敏感性蛋白ＣＡＳ与肝细胞癌的这种相关性，该蛋白可以用作检测肝癌的蛋白质分子标记。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术涉及一种细胞凋亡敏感性蛋白CAS用作检测肝癌的蛋白质分子标记的应用。
技术介绍
肝癌是一种严重危害人类的疾病。西方发达国家肝癌的发病率较低，国际上对肝癌的基础研究仍较为薄弱，而我国是肝癌高发国家，发病率和死亡率呈现上升趋势，且发病年龄构成年轻化，每年用于肝癌治疗的医疗支出大为增加，肝癌成了严重危害我国人民生命财产安全的头号敌人，并且是影响社会经济发展的一个重要因素，加大力度进行我国肝癌的基础研究具有战略意义，而分离和鉴定新的肝癌相关基因是目前肝癌基础研究中的前沿课题。到目前为止，已有不下20种的基因异常表达被确定与肝癌的发生发展有关，但已确定的肝癌相关基因在肝癌中的异常表达率并不高，肝癌的发病机制至今仍未阐明，肝癌的早期诊断率仍有待提高。此外，传统的肝癌手术加化疗以及近年来配合使用的多种基因治疗方法仍没有明显提高肝癌患者的生存率，因而寻找新的肝癌相关基因尤其是肝癌高表达基因对于探讨肝癌的发病机制具有重要意义。因此，为治疗和诊断目的研究和开发在肝癌中高表达的基因和/或蛋白具有重要意义。本领域迫切需要新的在肝癌中高表达的基因和/或蛋白。细胞凋亡敏感性蛋白CAS(Cellular apoptosis susceptibility protein；Chromosomesegregation 1-like protein；Importin-alpha re-exporter；CAS；CSE1；XPO2；CSE1 chromosomesegregation 1 like(yeast)；Cellular apoptosis susceptibility)的Genebank登录号为gi|29029559，NCBI的登录号为NP_001307，Swissprot登录号为P55060，IPI号为IPI00022744.4。细胞凋亡敏感性蛋白CAS在酵母中存在着同源基因CSE-1，该蛋白的细胞定位是在核及胞质中。细胞凋亡敏感性蛋白CAS的功能正如其蛋白名，在细胞的凋亡过程中起着关键性的作用，在细胞中这一蛋白的表达可以提高细胞的抗凋亡能力。在哺乳类的细胞中，该蛋白对细胞周期的调节也起着一定的作用，介导着细胞的分裂增殖。同时，细胞凋亡敏感性蛋白CAS在一些蛋白的进核出核过程中起着关键性的作用。它是输入蛋白α的受体，在输入蛋白α的循环利用过程中负责把输入蛋白α从细胞核重新运回到细胞质中(Cell，Vol90，1061-1071，Septemter 19，1997)。细胞凋亡敏感性蛋白CAS是一种非受体的酪氨酸蛋白激酶(Src)的底物，在整合素介导的细胞粘连及细胞的运动位点被发现。它对Src介导的肿瘤发生机制影响很大。它的表达，大大地提高了细胞的侵袭能力(Oncogene.2004Sep.23；23(44)7406-15)。另有一篇文章指出，细胞凋亡敏感性蛋白CAS通常在卵巢癌的组织细胞中高表达，与细胞的凋亡及核的分裂能力相关；该篇文章还指出细胞凋亡敏感性蛋白CAS可以作为侵袭性肿瘤的标志物(Gynecol Oncol.2004 Jan.；92(1)268-76)。最新一篇文献研究了细胞凋亡敏感性蛋白CAS在结肠癌(colon cancer)中的表达情况，提出了相反的观点。他们将细胞凋亡敏感性蛋白CAS转入了HT-29癌细胞中，研究指出，该蛋白抑制了HT-29癌细胞的迁移及生长。然后他们把转了细胞凋亡敏感性蛋白CAS的HT-29癌细胞注入裸鼠中，同样，他们发现该蛋白抑制了HT-29癌细胞在裸鼠中的生长(J.Exp.Clin.Cancer Res.2004 Jun；23(2)325-32)。但是截止目前，现有技术中未见有关于细胞凋亡敏感性蛋白CAS与肝细胞癌的相关性的报道。
技术实现思路
通过筛选在肝细胞癌癌组织以及肝细胞癌癌旁组织中差异表达的蛋白质，本申请的专利技术人找到了一种在肝细胞癌的癌组织和癌旁组织中存在差异表达的蛋白质(在癌组织中上调表达)，经质谱鉴定为细胞凋亡敏感性蛋白CAS。进一步的免疫印迹实验证实，细胞凋亡敏感性蛋白CAS的确在肝细胞癌的癌组织与癌旁组织中存在差异表达(在癌组织中上调表达)。基于细胞凋亡敏感性蛋白CAS与肝细胞癌的这种相关性，以该蛋白作为一个蛋白质分子标记检测其表达量可以用于检测肝癌。因此，本专利技术的首要目的即在于提供一种细胞凋亡敏感性蛋白CAS用作检测肝癌的蛋白质分子标记的应用。本专利技术的另一个目的在于提供一种抗细胞凋亡敏感性蛋白CAS的抗体，包括单克隆抗体和多克隆抗体，用于制备检测肝癌的制剂的应用。本专利技术的再一个目的还在于提供一种抗细胞凋亡敏感性蛋白CAS的抗体，包括单克隆抗体和多克隆抗体，用于制备检测肝癌的试剂盒的应用。本专利技术的又一个目的在于提供一种体外检测肝细胞组织中细胞凋亡敏感性蛋白CAS的表达是否异常的方法，该方法包括以下步骤A、用特异性抗细胞凋亡敏感性蛋白CAS的抗体检测待测肝细胞中细胞凋亡敏感性蛋白CAS的数量；B、将步骤A测得的细胞凋亡敏感性蛋白CAS的数量与正常肝组织中的细胞凋亡敏感性蛋白CAS的数量进行比较，如测得的蛋白数量高于正常值，则表示被检测肝组织中细胞凋亡敏感性蛋白CAS的表达异常。虽然在现有技术中有关于细胞凋亡敏感性蛋白CAS在侵袭性癌症中高表达的报道，但是到目前为止，还没有细胞凋亡敏感性蛋白CAS与肝细胞癌的相关性的报道，因此，本专利技术的这一发现将为肝细胞癌的诊断和/或治疗提供一条全新的途径。附图说明图1显示了对细胞凋亡敏感性蛋白CAS的免疫印迹分析结果。具体实施例方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆实验室手册(New YorkCold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。本申请的专利技术人用非酶解样品制备法(nonenzymatic sample preparation，NESP)制备了肝细胞癌的癌组织与癌旁组织蛋白质样品，以同位素亲和标签与凝胶增强的液质联用技术(gel-enhanced liquid chromatography-mass spectrometry coupled with isotope-coded affinitytag，GeLC-MS-ICAT)对其中的蛋白进行鉴定并比较其表达量，结果发现细胞凋亡敏感性蛋白CAS在肝细胞癌癌组织中高表达。免疫印迹实验进一步证实细胞凋亡敏感性蛋白CAS的确在肝细胞癌的癌组织与癌旁组织中存在差异表达。因此，以细胞凋亡敏感性蛋白CAS作为一个蛋白质分子标记对其表达量进行检测可以用于检测肝癌，即细胞凋亡敏感性蛋白CAS可以用作检测肝癌的蛋白质分子标记。实施例1、肝细胞癌癌组织及癌旁组织蛋白质样品的制备本实施例中所使用的尿素、3--1-丙磺酸(CHAPS)、苯甲基磺酰氟(PMSF)、二硫苏糖醇(DTT)均购自Sigma公司。本实施例以非酶解样品制备法(nonenzymatic sample preparation，NESP)制备肝细胞癌的癌组织及癌旁组本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种细胞凋亡敏感性蛋白ＣＡＳ的应用，其特征在于，用作检测肝癌的蛋白质分子标记。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：曾嵘，袁新雨，李辰，周晓，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]