一种用作结合对的特异性结合反应培养基的水溶液制造技术

本发明专利技术涉及一种作为用于结合对的特异性结合反应培养基使用的水溶液，其中第一结合成员识别其互补第二结合成员，该溶液含有：ａ）一种控制ｐＨ的缓冲液；ｂ）选自下述基团的化合物Ａ：由通式ＩＲ↑［１］－［（ＣＲ↑［２］Ｒ↑［３］）↓［ｐ］－Ｏ］↓［ｑ］－Ｒ↑［４］定义的化合物，其中Ｒ↑［１］是氢或羟基，各元件的Ｒ↑［２］独立地是氢或羟基，Ｒ↑［３］是氢、甲基、乙基，Ｒ↑［４］是氢或烷基，ｐ是２到１０的一个整数，ｑ是１到１００的一个整数，附带条件是该化合物至少携带两个羟基；多元醇；糖类；ｃ）非离子洗涤剂。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】专利说明一种用作结合对的特异性结合反应培养基的水溶液 本专利技术涉及用作结合对的特异性结合反应培养基的水溶液。
技术介绍
公知使用一种或多种抗体在一种试样中检测试验物质(分析物)的免疫测定技术。免疫测定技术方法的发展增强了该试验的敏感性。尽管在近些年来有所发展，但仍然希望消除非特异性的结合反应、交叉反应以及基质之中存在的化合物的影响。免疫测定法取决于结合成员对的第一结合成员(如一种抗原或配体)与结合成员对的第二结合成员(如一种抗体或受体)特异性结合的能力。为了测定这种结合的延续，用可检测部分标记含有这种结合成员的一方的共轭物。这种结合成员对可以是一种抗原和针对该抗原的抗体。免疫测定法可以以竞争性的免疫测定法形式或以夹心免疫测定法形式进行。在竞争性的免疫测定法形式中抗原可以被固定到固相材料上，而结合到固相材料上的可检测部分的数量能够被检出、计量并将其与试样中存在的抗体的数量相关联。固相材料的实例包括珠子、颗粒、微粒等等。在夹心免疫测定法形式中，将含有例如一种抗体的试样与一种蛋白质例如抗原相接触。所述抗原被固定在固相材料上。固相材料的实例包括珠子、颗粒、微粒等等。所述固相材料通常用一种已被可检测部分标记的第二抗原或抗体生成。然后分别在所述固相材料上第二抗原或抗体分别与相应抗体或抗原结合，在一个或多个洗涤步骤以去掉未结合的物质之后，加入一种指示剂物质例如显色物质，使其与可检测部分反应，产生可检测信号，如颜色变化。然后检出该颜色变化，计量并将其与试样之中存在的抗体数量相关联。此外应注意还需要各种稀释剂和缓冲液用于优化处理微粒、抗原、共轭物及参与化学反应的其他试验组分。为了在免疫测定法中获得最佳结果，用于结合伙伴之间结合反应(例如抗体和抗原反应或配体和受体生成复合体)的溶液必须提供一种培养基以优化抗体结合抗原的能力，或必须提供一种培养基以优化配体结合受体的能力，同时强有力的降低甚至防止非特异性相互作用、低亲合性结合和基质效应，以免生成错误信号。为了消除非特异性相互作用和交叉反应，有人在结合反应之后将洗涤剂加入洗涤步骤所用的缓冲液中以去除非特异性结合。对于免疫测定法，像western印记分析、酶联免疫吸附试验(ELISA)等，使用含有补充有牛血清白蛋白和0.01到0.05(v/v)Tween20的磷酸盐缓冲盐水的溶液作为培养基，用于结合伙伴(例如抗体和抗原)之间的结合反应。但是常常发现用现有技术的这种缓冲液不能避免非特异性或低亲合性结合、交叉反应和基质效应。例如，当研究一种涉及多元分析物检测的CRP试验时，由于应用多元抗体而带来的交叉反应和基质效应看来已成为一个问题，其不能通过利用常规的免疫测定缓冲液解决。因此本专利技术的目的是提供一种溶液，作为用于结合成员对的特异性结合反应的培养基使用，其中强有力的降低或甚至防止非特异性结合、低亲合性结合、交叉反应和基质效应。此外，本专利技术的目的是提供一种免疫测定方法，其中非特异性和低亲合性结合、交叉反应和基质效应被降低或防止。专利技术概述本专利技术的目的是通过使用一种水溶液作为用于结合成员对的特异性结合反应的培养基而实现的，其中第一结合成员识别其互补的第二结合成员，该溶液含有a)控制pH的一种缓冲液；b)选自下组的化合物A-由通式I R1-p-O]q-R4定义的化合物，其中R1是氢或羟基，各单元中R2独立地是氢或羟基，R3是氢、甲基、乙基，R4是氢或烷基，p是2到10的一个整数，q是1到100的一个整数，附带条件是该化合物至少携带两个羟基；-多元醇；-糖类；c)非离子洗涤剂。在化合物A的通式I中，如果R4是氢，相邻的残基R2也是氢。如果R1是羟基，相邻的残基R2是氢。在一个优选具体实施方式中，化合物A的分子式中的q是从1到50的一个整数，更优选从1到30。本专利技术的专利技术人意外地发现本专利技术的水溶液可以降低免疫测定中的交叉反应、基质效应、非特异性结合和低亲合性结合。此外，还发现使用本专利技术水溶液时可以防止嗜异性的抗体(人抗小鼠抗体)带来的影响。另外，即使在应用于血浆的情况下，用该缓冲液能够避免风湿(rheuma)因子、血红蛋白、胆红素和甘油三脂带来的负效果。在这里“结合成员对”包括一个“第一结合成员”和一个“第二结合成员”。两种结合成员会彼此特异性结合。结合成员对的第一结合成员可以分别是抗原或配体。第二结合成员(如分别为抗体或受体)特异性地识别并结合第一结合成员(如分别为抗原或配体)。第二结合成员是相应的结合成员，因此也称为“相应结合成员”。技术人员会理解术语“第一”结合成员和“第二”结合成员分别可以是例如抗原和相应抗体，或反之亦然。本专利技术的水溶液代表一种通用缓冲液，其在各种基质(例如血浆，血清等)中进行的免疫测定和结合反应中作为培养基。在应用多分析物的情况下，例如如果使用蛋白质芯片，需要同步孵育几个(或多个)分析物和几个抗体，经常发生非特异性结合和交叉反应。在很多情况下观察到这种不希望得到的结合反应。利用现有技术公知的标准ELISA缓冲液不能防止这种交叉反应影响。另外在现有技术中，与其它参照的方法相比，所采用的天然样品可导致基质效应，这会引起错误的测量值。在此术语“基质”指天然样品(例如血清)之中存在的所有化合物；术语“基质”特别是指有机的、尤其是生物化合物，例如蛋白质。本专利技术的水溶液分别可以用作结合对的结合反应的培养基，作为用于免疫测定和结合反应的样品稀释缓冲液以及抗体和抗原的稀释缓冲液。进一步可应用于多分析物免疫测定和蛋白质分析(proteomics)，其中能够防止不希望得到的荧光体标记抗体的交叉反应。荧光体标记抗体往往会以非特异性方式结合其它蛋白质。使用本专利技术的水溶液能够避免这种影响。在免疫测定如ELISA和蛋白质芯片中，使用本专利技术的缓冲液可以展示出进一步的积极效果。当用本专利技术缓冲液孵育带有固定抗体的表面时，该固定化抗体的活性有所增强。这使得分析物与固定化抗体的结合增强。总之，本专利技术缓冲液除降低非特异性信号和非特异性影响之外，还会增强分析物和抗体之间特异性结合反应阳性作用带来的特异性信号。这种固定化抗体活性的所致增强提供更高的相应试验的敏感性。本专利技术的缓冲液可以用于免疫测定ELISA、EIA、FIA、侧向流式试验(lateral-flow-test)、蛋白质芯片、多分析物试验、western印记、点印记、免疫组织化学、受体配体试验和免疫PCR。专利技术详述在本专利技术一优选具体实施方式中，该水溶液进一步包括与免疫阻断非特异抗体结合有效量的蛋白质。此蛋白质优选选自牛血清白蛋白、卵清蛋白、酪蛋白、胎牛血清。进一步优选该蛋白质以0.1到2％(w/v)的浓度存在于水溶液中，更优选0.5到1.5％(w/v)范围。这些蛋白质不能被免疫测定所用的任何抗体识别。这种未被识别的蛋白质可以免疫阻断由样品之中可能存在的分子或化合物带来的非特异性抗体结合。在另一具体实施方式中，该水溶液含有选自下列的盐NaCl、KCl、NH4Cl。进一步优选该水溶液具有100mM到1.5mM的离子强度，更优选200mM到1M，甚至更优选200mM到800mM，特别更优选200mM到600mM，最优选250mM到500mM。本专利技术人意外地发现用作用于结合反应的培养基的该缓冲液在200mM到600mM范围内的高离子强度会进一步降低本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种作为用于结合对的特异性结合反应的培养基使用的水溶液，其中第一结合成员识别其互补的第二结合成员，该溶液含有　　　　ａ）一种控制ｐＨ的缓冲液；　　　　ｂ）选自下组的化合物Ａ：　　　　－由通式Ⅰ　　Ｒ↑［１］－［［ＣＲ↑［２］Ｒ↑［３］］↓［ｐ］－Ｏ］↓［ｑ］－Ｒ↑［４］定义的化合物，其中Ｒ↑［１］是氢或羟基，各单元中Ｒ↑［２］独立地是氢或羟基，Ｒ↑［３］是氢、甲基、乙基，Ｒ↑［４］是氢或烷基，ｐ是２到１０的一个整数，ｑ是１到１００的一个整数，附带条件是该化合物至少携带两个羟基；　　　　－多元醇；　　　　－糖类；　　　　ｃ）非离子洗涤剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：P劳赫，T波利夫克，A策尔默，
申请(专利权)人：康多尔生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]