紫外线诱导的程序性细胞死亡的抑制方法技术

本发明专利技术提供了通过增强表皮细胞的ＳＣＣＡ－１和／或－２的表达，抑制表皮细胞的紫外线照射诱导的程序性细胞死亡，提高皮肤对由紫外线照射引起的皮肤损伤的发病的抵抗力的方法。进一步地，本发明专利技术提供了评价皮肤对由紫外线照射引起的皮肤损伤的抵抗力的皮肤检查方法，特征在于测定表皮细胞中的ＳＣＣＡ－１和／或－２的表达，将与表皮细胞中的表达相比表达降低的情况，判断为表皮的ＵＶ抵抗力弱。进一步地，本发明专利技术提供了筛选提高皮肤对由紫外线照射引起的皮肤损伤的抵抗力的药物的方法，其特征在于选择增强ＳＣＣＡ－１和／或－２表达的药物作为ＵＶ抵抗强化剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术提供了通过增强扁平上皮细胞癌相关抗原(SCCA-1和/或SCCA-2)的表达，强化皮肤的紫外线(UV)防御机制的方法。
技术介绍
已知表皮受到由紫外线(UV)照射引起的多种损伤。皮肤一旦受到紫外线照射就会产生色素沉着，如果受到连续的反复照射，表皮就会肥厚化，失去弹性。作为表皮的紫外线损伤的症状，除了知道炎症、皮肤变粗糙、皱纹、松弛、色素沉着、斑点着色、变成土色、黑痣、紫癜发病、毛细管扩张等之外，还知道这些症状与恶性肿瘤的发病相关。一般而言，脸、脖颈子、手和脚等习惯性暴露于日光下的皮肤往往容易发生紫外线损伤。由于臭氧层的破坏，紫外线照射引起的皮肤损伤是现在特别被关注的问题。与表皮的生理学UV防御机制相关的认识以与基底层的黑色素细胞产生的黑色素相关的研究、以及抗氧化物质的探索和开发为中心。此外，还知道放射线/紫外线照射诱导程序性细胞死亡(三浦正幸、山田武编实验医学别册《术语文库程序性细胞死亡》1996)，还在进行基底细胞中的抗程序性细胞死亡蛋白质bcl-2的研究(Fang等人，J.Immunol.1994，153，4388-4398；Takahashi等人，Photochem.Photobiol.2001，74(4)579-586)。认为bcl-2通过阻断程序性细胞死亡或使之延迟，发挥其UV防御机制。但是，几乎没有关于表皮上层中的内源性UV防御蛋白质等的阐述。专利技术的公开本专利技术以阐明新的表皮特异性UV防御机制，并提供新型且有效的UV防御方法作为课题。皮肤病中的其中一种，是以表皮细胞的增殖/分化异常和炎症细胞浸润为特征的慢性、再发性的炎症性不全角化症的牛皮癣(Hopso-Havu等人，British Journal of Dermatology(1983)109，77-85)。认为牛皮癣除遗传因素之外还因多种环境因子而发病。已知如果将牛皮癣的发病的表皮与正常表皮比较，就会发现牛皮癣表皮的上层中扁平上皮细胞癌相关抗原(Squamous Cell Carcinoma Antigen，以下称为“SCCA”)的表达增强(Takeda A.等人，J.Invest.Dermatol.(2002)118(1)，147-154)。SCCA是从子宫颈部扁平上皮癌细胞中发现的抗原，其在子宫颈部、肺、食道、皮肤的扁平上皮癌中显示出高的血液浓度，其常用于扁平上皮癌的诊断和治疗效果的判定。SCCA也被用于皮肤扁平上皮癌的诊断，但是在本专利技术人的研究中，发现皮肤的扁平上皮癌中的SCCA表达不高。SCCA是由染色体18q21.3上的串联排列的两个基因SCCA-1和SCCA-2编码。认为SCCA-1和SCCA-2均为分子量约45,000的蛋白质，同源性非常高，但是二者反应部位的氨基酸序列不同，具有不同的功能(Schick等人，J.Biol.Chem.(1997)27213，1849-55)。本专利技术人关注于SCCA-1和SCCA-2，进行了皮肤UV防御机制的研究。免疫组织的方法和原位杂交的结果发现，与非露光部位相比，露光部位皮肤的SCCA的表达显著增强。进而，清楚了由于对人皮肤的UV照射，棘层和颗粒层中SCCA的表达有力地增强。基底层中没有发现蛋白质表达。而且，在三维皮肤模型、培养的人角质形成细胞中同样也确认了由UV照射引起的SCCA表达的增强。然后，本专利技术人在没有发现SCCA表达的3T3细胞中导入人SCCA-1和SCCA-2基因，建立稳定的表达体系。以膜联蛋白(Annexin)V-FITC和碘化丙锭(PI)作为程序性细胞死亡指标，用FACS(荧光活性细胞分选)分析，结果在任一SCCA稳定表达体系中均发现由UV照射引起的程序性细胞死亡显著减少。进而，通过以pSilencer载体使siRNA在高表达SCCA的HaCat细胞中稳定表达的RNA干涉法，建立了SCCA-1和SCCA-2的敲低(knockdown)(siSCCA)细胞株。通过定量PCR，在siSCCA细胞株中确认出SCCA的表达有90％及90％以上被抑制。进行75mJ/cm2的UV照射，结果发现对照株中38％的细胞发生程序性细胞死亡，与之相反siSCCA细胞株中约80％的细胞发生程序性细胞死亡。整理以上结果，可以清楚SCCA是承担UV防御机制的主要蛋白质。基于以上认识，完成了本专利技术，在第一观点中，提供了一种通过使表皮细胞的SCCA-1和/或SCCA-2的表达增强，抑制表皮细胞的程序性细胞死亡的方法。在合适的方案中，程序性细胞死亡是由紫外线照射诱导的程序性细胞死亡，因此通过该方法，可以提高皮肤对由紫外线照射引起的皮肤损伤的发病的抵抗力。表皮细胞包括角质形成细胞、颗粒细胞、棘细胞等。在其它的观点中，本专利技术提供了评价皮肤对由紫外线照射引起的皮肤损伤的抵抗力(以下有时也称为“UV抵抗力”)的皮肤检查方法。这种方法的特征在于，当表皮细胞中的SCCA-1和/或SCCA-2的表达比表皮细胞的表达低时，判断为表皮的UV抵抗力弱。优选的是，通过测定细胞中的SCCA-1和/或SCCA-2量，确定表皮细胞中的SCCA-1和/或SCCA-2的表达的增强。可以例如利用抗SCCA-1和/或SCCA-2的特异性抗体，通过ELISA法或者RIA法实施这种测定。此外，也可以通过测定从表皮细胞中提取的编码SCCA-1和/或SCCA-2的mRNA，确定表皮细胞中SCCA-1和/或SCCA-2的表达增强。这种mRNA测定也可以通过聚合酶链反应法(PCR)进行，优选通过实时PCR进行。在其它观点中，本专利技术还提供了筛选提高皮肤对由紫外线照射引起的皮肤损伤的抵抗力的药物(以下有时也称为“UV抵抗强化剂”)的方法。这种方法的特征在于选择增强SCCA-1和/或SCCA-2表达的药物作为UV抵抗强化剂。通过本专利技术，使得提供提高皮肤的UV抵抗力的方法、提供检测皮肤的UV抵抗力的方法以及提供新型的UV抵抗强化剂成为可能。附图的简要说明附图说明图1表示在露光和非露光部位的表皮中SCCA的表达。图2表示由UV照射引起的表皮中SCCA表达的变化。图3表示培养的人角质形成细胞中UV照射对SCCA表达的影响。图4表示对SCCA高表达细胞与不表达SCCA细胞，比较由UV照射诱导的程序性细胞死亡率。图5表示SCCA敲低细胞株的建立。图6表示SCCA敲低细胞和对照细胞的由UV照射诱导的程序性细胞死亡率的比较。用于实施专利技术的最佳方式如上所述，没有启示SCCA与紫外线照射之间存在关系的报告，SCCA能够抑制紫外线诱导的程序性细胞死亡是本专利技术人首次发现的令人惊奇的事实。在第一观点中，本专利技术提供了通过使表皮细胞的SCCA-1和/或SCCA-2的表达增强，抑制表皮细胞的程序性细胞死亡，尤其是抑制由紫外线照射诱导的程序性细胞死亡的方法。通过该方法，可以提高皮肤对由紫外线照射引起的皮肤损伤的发病的抵抗力。SCCA是存在于如上所述的子宫等的扁平上皮癌细胞和牛皮癣表皮中的分子量约为45,000的蛋白质。SCCA-1和/或SCCA-2的氨基酸序列及编码其的核酸序列记载于Takeda A等人，J.Invest.Dermatol.118，147-154(2002)(前述)。表皮细胞的SCCA-1和/或SCCA-2的表达增强可以通过例如应用使之表达增强的药本文档来自技高网...

【技术保护点】
通过增强表皮细胞的ＳＣＣＡ－１和／或－２的表达而抑制表皮细胞的程序性细胞死亡的方法。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：片桐千华，日比野利彦，
申请(专利权)人：株式会社资生堂，
类型：发明
国别省市：JP[日本]