被氧化性显色试剂的稳定化方法技术

本发明专利技术提供了被氧化性显色试剂、特别是无色色素的保存稳定化方法及其稳定化试剂。即，将被氧化性显色试剂在ｐＨ１～５的溶液中保存的被氧化性显色试剂的稳定化方法以及稳定化试剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及生体中的微量成分测定所用的，以及通过该方法被稳定化了的试剂。
技术介绍
由于血液或尿等生物试样中的各种成分的变化与疾病有很大相关，因此在进行疾病的诊断、病态的确认、治疗进程的判定时需要测定生物试样中的各种成分的变化。例如，开发了以血液中的胆固醇、甘油三酯、葡萄糖、尿酸、磷脂、胆汁酸、单胺氧化酶等为代表的多种微量成分的测定方法，对疾病的诊断起到了很大作用。目前，作为血清成分的测定法，广泛使用使目标成分与特异作用的酶作用，测定其生成物，再求得目标成分量的酶法。其中，常用的是使目标成分与特异作用的氧化酶作用生成过氧化氢，使用过氧化物酶(POD)及作为显色成分的被氧化性显色试剂将过氧化氢诱导成显色系，再通过比色定量其显色程度求得目标成分量的方法。作为该方法中使用的被氧化性显色试剂，已知例如在POD存在下通过4-氨基安替比林(4-AA)、3-甲基-2-苯并噻唑腙(MBTH)等偶联剂(coupler)与酚系、苯胺系或者甲苯胺系的生色团的氧化缩合而生成色素的Trinder试剂类。但是，使用这种被氧化性显色试剂的显色系对于定量微量成分的灵敏度低，存在容易受到测定试样中的血红蛋白或胆红素等的吸收光谱变化的影响的缺点。近年，作为解决这种缺点的被氧化性显色试剂，大量报道了在POD的存在下直接氧化显色的三苯甲烷系或二苯基萘基甲烷系的无色色素(例如，参考专利文献1)，另外，已知的有无色色素低水溶性经进一步改善的三苯甲烷系化合物(专利文献2)。无色色素的测定灵敏度非常高，适用于定量微量成分。但是，由于无色色素在溶液中的保存稳定性低，因此存在经时非特异性显色的问题。专利文献1日本专利特开昭62-93261号公报专利文献2日本专利特开平3-206896号公报专利技术的揭示本专利技术提供了被氧化性显色试剂、特别是无色色素的保存稳定化方法，以及通过该方法被稳定化了的试剂。本专利技术者对目前的情况进行了反复认真的研究，结果发现通过将被氧化性显色试剂保存在pH1～5的溶液中，可长时间稳定保存被氧化性显色试剂，藉此完成了本专利技术。即，本专利技术提供了将被氧化性显色试剂在pH1～5的溶液中保存的。本专利技术还提供了pH1～5的被氧化性显色试剂溶液。通过本专利技术的稳定化方法，可以在溶液中长时间保存被氧化性显色试剂。另外，如果使用本专利技术的被氧化性显色试剂溶液，则可以高灵敏度测定生体中的微量成分，本专利技术的被氧化性显色试剂溶液在临床检查领域极其有用。实施专利技术的最佳方式如果是将氧化性显色试剂作为显色成分使用的氧化性物质的定量，则本专利技术的被氧化性显色试剂溶液可使用任意的被氧化性显色试剂溶液。作为氧化性物质可例举如过氧化氢。本专利技术的被氧化性显色试剂溶液对于通过使由底物或酶反应而生成的物质与氧化酶作用，再定量所生成的过氧化氢而进行的生物试样中微量成分的测定特别有用。对于通过本专利技术的被氧化性显色试剂溶液可测定的生物试样中的微量成分没有特别限定，可以是通过定量酶反应生成的过氧化氢能够进行测定的所有生体成分。可例举如糖蛋白、糖肽、糖基化氨基酸、胆固醇、葡萄糖、甘油、甘油三酯、游离脂肪酸、尿酸、磷脂、唾液酸、胆汁酸、丙酮酸、无机磷、肌酸内酰胺、肌酸、GOT、GPT、单胺氧化酶、鸟嘌呤、胆碱酯酶等。对本专利技术的被氧化性显色试剂没有特别限定，可例举如3-甲基-2-苯并噻唑腙(MBTH)与苯胺系化合物的组合、2，2’-连氮-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(ABTS)、无色色素、联苯胺衍生物、o-联甲苯胺衍生物、三烯丙基咪唑衍生物、o-苯二胺衍生物等，较好为无色色素。作为无色色素，可例举如三苯甲烷衍生物、吩噻嗪衍生物、二苯胺衍生物等。作为三苯甲烷衍生物，可使用在日本专利特开平3-206896号公报、日本专利特开平6-197795号公报等中记载的高水溶性化合物，作为吩噻嗪衍生物，可使用在日本专利特公昭60-33479号公报中记载的化合物，作为二苯胺衍生物，可使用在日本专利特公昭60-33479号公报、日本专利特开昭62-93261号公报等中记载的化合物。其中，较好为无色孔雀石绿、无色龙胆紫、N-(羧甲基氨基羰基)-4，4’-双(二甲基氨基)-二苯胺钠盐(DA-64；和光纯药工业公司制)、10-(羧甲基氨基羰基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪钠盐(DA-67和光纯药工业公司制)、10-(N-甲基氨基甲酰基)-3，7-双(二甲基氨基)-10H-吩噻嗪(MCDP同仁化学公司制)、N，N，N’，N’，N”，N”-六-(3-磺丙基)-4，4’，4”-三氨基三苯甲烷(TPM-PS同仁化学公司制)等，更好为TPM-PS、DA-64、DA-67或者MCDP，特好为TPM-PS或者MCDP。此外，还可使用二氨基联苯胺、四甲基联苯胺、羟基苯基丙酸、邻苯二胺等。对于pH的调整，，可使用能将pH调至酸性任一种试剂，可使用盐酸、醋酸、硫酸、磷酸等无机酸；甘氨酸、苯二甲酸、马来酸、枸橼酸、琥珀酸、草酸、酒石酸、醋酸、乳酸等有机酸。对无机酸或者有机酸的浓度没有特别的限定，较好为0.0001～1000mM，特好为0.01～1000mM。pH为1～5即可，特好为1～4。对被氧化性显色试剂溶液中的被氧化性显色试剂的浓度没有特别的限定，较好为0.001～100mM，特好为0.001～50mM。可以在本专利技术的被氧化性显色试剂溶液中添加其它具有聚氧乙烯结构的阴离子性表面活性剂或者非离子性表面活性剂；处理血液中的夹杂成分的酶；反应调整剂；稳定化剂；白蛋白等蛋白质类；氯化钠、氯化钾、亚铁氰化钾等盐；甘氨酸、赖氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等氨基酸；用于避免还原性物质的影响的四唑盐；抗生素、叠氮化钠、硼酸等防腐剂；阳离子性表面活性剂等。它们的使用量可基于使用被氧化性显色试剂的公知的酶定量法来适当选择。可以装入玻璃瓶、塑料容器等中的形式来提供本专利技术的被氧化性显色试剂溶液。最好对这些容器进行遮光处理。实施例以下例举实施例来进一步详细说明，但本专利技术不仅限于此。TPM-PS的稳定化-1在下述各水溶液中溶解TPM-PS使其浓度为60μM之后，在37℃下保存，使用日立7150型自动分析装置，测定波长600nm下的吸光度。表1中显示了0时间后，2周后、3周后的吸光度。表1 *PB-K磷酸钾液由表1可知，TPM-PS可在pH1～5的水溶液中抑制非特异显色，是稳定的。实施例2TPM-PS的稳定性-2向下述各水溶液中溶解TPM-PS使之浓度为100μM之后，测定波长600nm下的吸光度。在25℃保存10日之后，再次测定波长600nm下的吸光度，将其与刚制备后的吸光度的差值作为“10日的变化量(OD)”显示在表2中。表2 由表2可知，TPM-PS在pH1～5的水溶液中，吸光度的变化量小，是稳定的。实施例3MCDP的稳定性将MCDP溶解在甲醇中使其浓度为4mM之后，再溶解于含有0.1％Triton X-100的下述各水溶液中使其浓度为100μM。在37℃下保存24小时，测定波长600nm下的吸光度。结果示于表3。表3 由表3可知，MCDP在pH1～5的水溶液中，吸光度的变化量小，抑制非特异显色，是稳定的。权利要求1.，其特征在于，将被氧化性显色试剂在pH1～5的溶液中保存。2.如权利要求1所述的方本文档来自技高网...

【技术保护点】
被氧化性显色试剂的稳定化方法，其特征在于，将被氧化性显色试剂在ｐＨ１～５的溶液中保存。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：谷口由利子，西尾朋久，齌藤和典，
申请(专利权)人：第一化学药品株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]