本发明专利技术公开了一种检测２型糖尿病易感性的方法，它包括检测个体的胰升糖素样肽－１受体基因（ｇｌｕｃａｇｏｎ－ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ １ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＧＬＰ１Ｒ）、转录本和／或蛋白与正常相比是否存在变异，存在变异就表明该个体患２型糖尿病的可能性大于正常人群。本发明专利技术还公开了相应的检测试剂盒。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物学领域。更具体地涉及人胰升糖素样肽-1受体基因(glucagon-like peptide 1 receptor，GLP1R)的单核苷酸多态性(singlenucleotide polymorphism，SNP)及其与2型糖尿病的相关性。本专利技术还涉及检测这些SNP的方法和试剂盒。
技术介绍
糖尿病是一组以糖代谢异常为特征的由不同病理生理改变组成的综合征，不同患者之间具有较大的异质性，而其主要的两种病理生理改变为胰岛素分泌不足和胰岛素抵抗。虽然已开展了一些2型糖尿病相关基因及多态性的研究，但在本专利技术之前没有证实GLP1R基因多态性与2型糖尿病相关性的报道，更没有与2型糖尿病相关性的报道。综上所述，鉴于糖尿病严重影响人们身体健康的疾病，为了尽早诊断和治疗2型糖尿病，本领域迫切需要寻找2型糖尿病易感基因，并开发检测2型糖尿病的方法、试剂盒，或相关的治疗药物。
技术实现思路
本专利技术的目的就是提供一种诊断(尤其是早期诊断)2型糖尿病的方法及检测试剂盒。在本专利技术的第一方面，提供了一种对个体的2型糖尿病易感性进行诊断的方法，它包括步骤检测该个体的GLP1R基因、转录本和/或蛋白，并与正常的GLP1R基因、转录本和/或蛋白相比较，存在差异就表明该个体患2型糖尿病的可能性高于正常人群。在另一优选例中，所检测的是GLP1R的基因或转录本，并与正常GLP1R核苷酸序列比较差异。在另一优选例中，所述的差异是选自下组的单核苷酸多态性4347位G A且该位点的基因型是AA；其中，核苷酸位置编号基于SEQ ID NO1。在本专利技术的第二方面，提供了一种检测样品是否存在GLP1R基因的单核苷酸多态性的方法，包括步骤(a)用GLP1R基因特异性引物扩增样品的GLP1R基因，得到扩增产物；和(b)检测扩增产物中是否存在选自下组的单核苷酸多态性4347位G A且该位点的基因型是AA；其中，核苷酸位置编号基于SEQ ID NO1。在另一优选例中，所述的方法还包括步骤对样品提供者的进行BMI指数分析。在本专利技术的第三方面，提供了一种辅助性检测2型糖尿病的试剂盒，它包括特异性扩增GLP1R基因或转录本的引物和说明书。在另一优选例中，所述的试剂盒它还含有选自下组的试剂(a)与突变部位结合的探针；(b)识别突变位点的限制性内切酶。在另一优选例中，所述的突变是选自下组的单核苷酸多态性4347位G A；其中，核苷酸位置编号基于SEQ ID NO1。在另一优选例中，所述的引物包括序列如SEQ ID NO2、3和4所示的引物。在本专利技术的第四方面，提供了一种GLP1R基因和蛋白的用途，它们被用于制备辅助性检测2型糖尿病的试剂。附图说明图1显示了GLP1R的rs2268657位点的SNP图像。具体实施例方式本专利技术人经过多年研究，首次发现和证明了GLP1R基因与2型糖尿病密切相关。本专利技术人对GLP1R基因中多个区域进行了测序和SNP分析，其中关联研究结果显示，在GLP1R第rs2268657位点(对应于SEQ ID NO1中的4347位)的基因型AA在正常人与BMI＜25的正常体重组相比频率有显著差异(OR＝1.939，P＝0.022)，而与BMI＞28的肥胖糖尿病患者组相比无显著差异。这提示，GLP1R基因多态性位点rs2268657与胰岛素分泌不足为主的2型糖尿病相关，可用于辅助检测2型糖尿病。在此基础上完成了本专利技术。具体而言，本专利技术人选取无亲缘关系的2型糖尿病患者360例及正常对照313例，其中糖尿病患者分为肥胖组192人(BMI＞28，且仅用口服降糖药治疗)及正常体重组168人(BMI＜25，且用胰岛素治疗)，采用等位基因特异的实时PCR(allele-specific real-time PCR)，对GLP1R基因位点rs2268657进行基因分型，并通过相关分析研究该位点与2型糖尿病的相关性。结果表明，GLP1R基因rs2268657位点基因型频率在对照人群中AA、AG、GG分别为27，140，146；在正常体重糖尿病组中AA、AG、GG分别为26，63，79，在肥胖糖尿病组中，AA、AG、GG分别为21，96，75基因型AA在正常人与BMI＜25的正常体重组相比频率有显著差异(OR＝1.939，P＝0.022)，而与BMI＞28的肥胖糖尿病患者组相比无显著差异。该研究结果提示GLP1R基因多态性位点rs2268657与胰岛素分泌不足为主的2型糖尿病有关。如本文所用，术语“GLP1R”和“胰升糖素样肽-1受体”可互换使用，都指胰升糖素样肽-1受体的蛋白分子或核酸分子。GLP1R基因的详细序列可参见登录号为Hs.389103的核苷酸序列(可参见网址http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)，全长是38903bp(SEQ ID NO1)。rs2268657位点对应于SEQ ID NO1中的第4347位。基于本专利技术的新发现，GLP1R蛋白或多肽有多方面的新用途。这些用途包括(但不限于)辅助性检测与GLP1R相关的疾病(如2型糖尿病)，或筛选促进GLP1R蛋白功能的物质，如抗体、多肽或其它配体。用表达的重组人GLP1R蛋白筛选多肽库可用于寻找有治疗价值的能刺激人GLP1R蛋白功能的多肽分子。另一方面，本专利技术还包括对人GLP1R DNA或是其片段编码的多肽具有特异性的多克隆抗体和单克隆抗体，尤其是单克隆抗体。这里，“特异性”是指抗体能结合于人GLP1R基因产物或片段。较佳地，指那些能与人GLP1R基因产物或片段结合但不识别和结合于其它非相关抗原分子的抗体。本专利技术中抗体包括那些能够结合并抑制人GLP1R蛋白的分子，也包括那些并不影响人GLP1R蛋白功能的抗体。本专利技术不仅包括完整的单克隆或多克隆抗体，而且还包括具有免疫活性的抗体片段，如Fab’或(Fab)2片段；抗体重链；抗体轻链；遗传工程改造的单链Fv分子；或嵌合抗体。本专利技术的抗体可以通过本领域内技术人员已知的各种技术进行制备。例如，纯化的人GLP1R基因产物或者其具有抗原性的片段，可被施用于动物以诱导多克隆抗体的产生。与之相似的，表达人GLP1R蛋白或其具有抗原性的片段的细胞可用来免疫动物来生产抗体。多种佐剂可用于增强免疫反应，包括但不限于弗氏佐剂等。本专利技术的抗体也可以是单克隆抗体。此类单克隆抗体可以利用杂交瘤技术来制备。本专利技术的抗体包括能阻断人GLP1R蛋白功能的抗体以及不影响人GLP1R蛋白功能的抗体。本专利技术的各类抗体可以利用人GLP1R基因产物的片段或功能区，通过常规免疫技术获得。这些片段或功能区可以利用重组方法制备或利用多肽合成仪合成。与人GLP1R基因产物的未修饰形式结合的抗体可以用原核细胞(例如E.Coli)中生产的基因产物来免疫动物而产生；与翻译后修饰形式结合的抗体(如糖基化或磷酸化的蛋白或多肽)，可以用真核细胞(例如酵母或昆虫细胞)中产生的基因产物来免疫动物而获得。抗人GLP1R蛋白的抗体可用于免疫组织化学技术中，检测活检标本中的人GLP1R蛋白。一种优选的抗GLP1R抗体是不识别正常GLP1R但识别突变GLP1R的抗体，或者识别正常GLP1R但不识别突变GLP1R的抗体。利用该抗体对正常和异常GLP1R蛋白的特异性差异，可以方便地进行蛋白质水平的2本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种对个体的２型糖尿病易感性进行诊断的方法，其特征在于，它包括步骤：检测该个体的ＧＬＰ１Ｒ基因、转录本和／或蛋白，并与正常的ＧＬＰ１Ｒ基因、转录本和／或蛋白相比较， 存在差异就表明该个体患２型糖尿病的可能性高于正常人群。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：罗敏，
申请(专利权)人：上海市内分泌代谢病研究所，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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