草地贪夜蛾抗药性快速鉴定试剂盒、专用饲料瓶及方法技术

本发明专利技术公开了一种草地贪夜蛾抗药性快速鉴定试剂盒，其包括采用专用饲料瓶装配饲料和杀虫剂形成的2龄虫诊断试剂瓶、3龄虫诊断试剂瓶、4龄虫诊断试剂瓶，所述2龄虫诊断试剂瓶、3龄虫诊断试剂瓶、4龄虫诊断试剂瓶的杀虫剂的诊断剂量是通过不同浓度的杀虫剂在所述专用饲料瓶中对不同龄虫的敏感品系草地贪夜蛾进行毒力测定，计算不同龄虫的LC

【技术实现步骤摘要】
草地贪夜蛾抗药性快速鉴定试剂盒、专用饲料瓶及方法
本专利技术涉及农业害虫抗药性检测
，具体涉及一种草地贪夜蛾抗药性快速鉴定试剂盒、该试剂盒专用的饲料盒以及快速鉴定方法。
技术介绍
草地贪夜蛾是联合国粮农组织全球预警的跨国界迁飞性重大害虫，于2019年4月入侵广东省，不到一年时间，已迁飞扩散至全省21个地级市97个行政县。广东省既是草地贪夜蛾周年繁殖区，又是境外虫源入侵必经地。广东省是我国鲜食玉米主产区，鲜食玉米全年种植，为草地贪夜蛾提供了持续丰富的食源，使之得以落地生根并大量繁殖。玉米和水稻是我国主粮，分别占我国粮食产量的40％和33％，玉米和水稻减产将严重影响我国粮食战略安全。在转基因Bt玉米推广种植之前，化学防治一直是草地贪夜蛾主要分布国家和地区，例如美国和巴西等必需的防治手段。由于不同国家和地区对草地贪夜蛾的防控措施不同，对杀虫剂的依赖程度和使用频率不一，导致了各地草地贪夜蛾抗性程度的不同。在经历了多个国家化学农药和生物农药的防控后，这些入侵中国的草地贪夜蛾的具体抗药性状况目前尚不明确。有关草地贪夜蛾抗性的报道主要集中在传统的有机磷类、氨基甲酸酯类和拟除虫菊酯类杀虫剂，且抗性发生区域大多集中在美国佛罗里达州、波多黎各及墨西哥、巴西等地。此外，已有少量关于草地贪夜蛾对酰胺类杀虫剂如氯虫苯甲酰胺和氟苯虫酰胺抗性的报道。草地贪夜蛾为我国新入侵重大害虫，国内目前还没有防治用药登记，故农业部推荐了氯虫苯甲酰胺、氟氯氰菊酯等25种应急药剂。倘若短期内在田间大量盲目使用此类高效、低毒的杀虫剂，势必会加大药剂对靶标害虫的选择压力，带来很大的抗药性风险。基于此，迫切需要针对草地贪夜蛾开展一系列科学有效的抗药性监测和抗性机理研究。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术提出一种草地贪夜蛾抗药性快速鉴定试剂盒，该试剂盒中装配了人工饲料和高频使用的杀虫剂品种，可以快速地测试田间草地贪夜蛾的抗药性，没有季节和实验条件限制，有效提高测试效率，缩短了草地贪夜蛾抗性鉴定时间，整套技术操作简单、易学易懂、不需要专业人士进行药剂配制等前处理，室内室外都能使用，占用场地少，具有实际应用价值。本专利技术还提供了所述草地贪夜蛾抗药性快速鉴定试剂盒的制备方法。本专利技术还提供了专用于所述草地贪夜蛾抗药性快速鉴定的专用饲料瓶。同时，还提供了应用该草地贪夜蛾抗药性快速鉴定试剂盒快速鉴定田间草地贪夜蛾抗药性的方法。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种草地贪夜蛾抗药性快速鉴定专用饲料瓶，其包括透明瓶身，所述透明瓶身设有瓶口，还包括可拆卸封盖在所述瓶口上的瓶盖，所述瓶盖包括固定连接的盖板和盖沿，所述盖板设有多个透气微孔，所述盖板还贴有耐高温贴纸。进一步的，所述透明瓶身呈圆柱状，直径为3～5cm，高度为5～7cm。进一步的，所述盖板上的透气微孔为8～10个，所述透气微孔的直径为2～3mm。一种草地贪夜蛾抗药性快速鉴定试剂盒，其包括2龄虫诊断试剂瓶、3龄虫诊断试剂瓶、4龄虫诊断试剂瓶；所述2龄虫诊断试剂瓶、3龄虫诊断试剂瓶、4龄虫诊断试剂瓶均采用上述的专用饲料瓶装配饲料和杀虫剂；所述2龄虫诊断试剂瓶装配的杀虫剂包括甲氨基阿维菌素苯甲酸盐0.34mg/L、高效氯氟氰菊酯4.20mg/L、虫螨腈4.35mg/L、茚虫威21.51mg/L、氯虫苯甲酰胺1.19mg/L或虱螨脲2.98mg/L中的任意一种；所述3龄虫诊断试剂瓶装配的杀虫剂包括甲氨基阿维菌素苯甲酸盐0.48mg/L、高效氯氟氰菊酯10.02mg/L、虫螨腈20.45mg/L、茚虫威23.67mg/L、氯虫苯甲酰胺5.33mg/L或虱螨脲4.51mg/L中的任意一种；所述4龄虫诊断试剂瓶装配的杀虫剂包括甲氨基阿维菌素苯甲酸盐0.76mg/L、高效氯氟氰菊酯45.07mg/L、虫螨腈22.68mg/L、茚虫威48.33mg/L、氯虫苯甲酰胺12.56mg/L或者虱螨脲31.31mg/L中的任意一种。进一步的，所述饲料中各组份按重量份计为黄豆粉100～120份、玉米粉150～160份、玉米叶粉30～40份、酵母粉30～40份、纤维素40～50份、酪蛋白100～110份、琼脂30～40份、水1000份、对羟基苯甲酸丙酯钠15～20份、山梨酸钾5～8份、维生素混合液20～30份、氯化胆碱1～5份、胆固醇1～5份。进一步的，还包括1龄虫诊断试制瓶，所述1龄虫诊断试制瓶采用上述的专用饲料瓶装配饲料和杀虫剂，所述1龄虫诊断试制瓶装配的杀虫剂包括甲氨基阿维菌素苯甲酸盐为0.191mg/L，高效氯氟氰菊酯为2.91mg/L，虫螨腈为1.49mg/L，茚虫威为12.98mg/L，氯虫苯甲酰胺为0.85mg/L，虱螨脲为3.32mg/L中的任意一项。进一步的，所述杀虫剂的诊断剂量是通过不同浓度的杀虫剂在所述专用饲料瓶中对不同龄虫的敏感品系草地贪夜蛾进行毒力测定，计算不同龄虫的LC99作为该龄虫杀虫剂的诊断剂量。进一步的，所述杀虫剂的诊断剂量是通过如下步骤确定的：配制好饲料；配制不同浓度梯度的杀虫剂溶液；不同浓度梯度的杀虫剂溶液分别加入饲料混合均匀，然后分装于所述专用饲料瓶中，成为诊断试剂瓶，冷藏备用；从各地田间采集回来草地贪夜蛾卵块混合饲养多代，获得室内饲养的混合种群；不同龄幼虫分别放入准备好的诊断试剂瓶中，然后用干净的纸巾或纱布盖上，确保纸巾或纱布完全盖住瓶口，撕开瓶盖内的耐高温贴纸，盖上瓶盖，继续饲养，进行毒力测定；对毒力测定结果做回归曲线，并计算LC99作为各龄虫杀虫剂的诊断剂量。进一步的，对于1龄虫和2龄虫，每个浓度的诊断试剂瓶中加入幼虫10头，至少进行4次生物学测定；对于3龄虫和4龄虫，每个浓度的诊断试剂瓶中加入幼虫1头，至少做30次生物学测定。进一步的，本专利技术的试剂盒还包括草地贪夜蛾敏感品系的杀虫剂剂量-龄期-活性关系表。一种草地贪夜蛾抗药性快速鉴定试剂盒的制备方法，其包括以下步骤：将草地贪夜蛾饲料和权利要求1或2所述的专用饲料瓶分别灭菌；饲料在室温条件下放置至温度降至50℃以下后，于超净工作台上按剂量加入杀虫剂，持续搅拌均匀后，倒入已消毒的专用饲料瓶的透明瓶身中，厚度控制为0.5-1cm；盖上盖子，并待饲料冷却至室温后，做好标记，用灭菌后的密封袋密封好；放置于冰箱中冷藏。一种草地贪夜蛾抗药性快速鉴定方法，其包括以下步骤：将田间草地贪夜蛾幼虫按照龄期分别挑入权利上述的试剂盒中的相对应的诊断试剂瓶中进行饲养；对于1龄虫和2龄虫每个诊断试剂瓶处理10头，重复4次；对于3龄虫和4龄虫每个诊断试剂瓶处理幼虫1头，重复30次；在瓶口盖上一层灭菌后的厨房纸巾，再盖上瓶盖；高效氯氟氰菊酯在药剂处理后24h检查幼虫死亡数，甲氨基阿维菌素苯甲酸盐、虫螨腈、茚虫威、氯虫苯甲酰胺和虱螨脲均在药剂处理后72h检查幼虫死亡数；死亡率小于95％的种群为抗性种群。与现有技术相比本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种草地贪夜蛾抗药性快速鉴定专用饲料瓶，其特征在于：包括透明瓶身，所述透明瓶身设有瓶口，还包括可拆卸封盖在所述瓶口上的瓶盖，所述瓶盖包括固定连接的盖板和盖沿，所述盖板设有多个透气微孔，所述盖板还贴有耐高温贴纸。/n

【技术特征摘要】
1.一种草地贪夜蛾抗药性快速鉴定专用饲料瓶，其特征在于：包括透明瓶身，所述透明瓶身设有瓶口，还包括可拆卸封盖在所述瓶口上的瓶盖，所述瓶盖包括固定连接的盖板和盖沿，所述盖板设有多个透气微孔，所述盖板还贴有耐高温贴纸。


2.如权利要求1所述的草地贪夜蛾抗药性快速鉴定专用饲料瓶，其特征在于：所述透明瓶身呈圆柱状，直径为3～5cm，高度为5～7cm；所述盖板上的透气微孔为8～10个，所述透气微孔的直径为2～3mm。


3.一种草地贪夜蛾抗药性快速鉴定试剂盒，其特征在于：包括2龄虫诊断试剂瓶、3龄虫诊断试剂瓶、4龄虫诊断试剂瓶；
所述2龄虫诊断试剂瓶、3龄虫诊断试剂瓶、4龄虫诊断试剂瓶均采用权利要求1或2所述的专用饲料瓶装配饲料和杀虫剂；
所述2龄虫诊断试剂瓶装配的杀虫剂包括甲氨基阿维菌素苯甲酸盐0.34mg/L、高效氯氟氰菊酯4.20mg/L、虫螨腈4.35mg/L、茚虫威21.51mg/L、氯虫苯甲酰胺1.19mg/L或虱螨脲2.98mg/L中的任意一种；
所述3龄虫诊断试剂瓶装配的杀虫剂包括甲氨基阿维菌素苯甲酸盐0.48mg/L、高效氯氟氰菊酯10.02mg/L、虫螨腈20.45mg/L、茚虫威23.67mg/L、氯虫苯甲酰胺5.33mg/L或虱螨脲4.51mg/L中的任意一种；
所述4龄虫诊断试剂瓶装配的杀虫剂包括甲氨基阿维菌素苯甲酸盐0.76mg/L、高效氯氟氰菊酯45.07mg/L、虫螨腈22.68mg/L、茚虫威48.33mg/L、氯虫苯甲酰胺12.56mg/L或者虱螨脲31.31mg/L中的任意一种。


4.如权利要求3所述的草地贪夜蛾抗药性快速鉴定试剂盒，其特征在于：还包括1龄虫诊断试制瓶，所述1龄虫诊断试制瓶采用权利要求1或2所述的专用饲料瓶装配饲料和杀虫剂，所述1龄虫诊断试制瓶装配的杀虫剂包括甲氨基阿维菌素苯甲酸盐为0.191mg/L，高效氯氟氰菊酯为2.91mg/L，虫螨腈为1.49mg/L，茚虫威为12.98mg/L，氯虫苯甲酰胺为0.85mg/L，虱螨脲为3.32mg/L中的任意一项。


5.如权利要求3所述的草地贪夜蛾抗药性快速鉴定试剂盒，其特征在于：所述饲料中各组份按重量份计为黄豆粉100～120份、玉米粉150～160份、玉米叶粉30～40份、酵母粉30～40份、纤维素40～50份、酪蛋白100～110份、琼脂30～40份、水1000份、对羟基苯甲酸丙酯钠15～20份、山梨酸钾5～8份、维生素混合液20～30份、氯化胆碱1～5份、胆固醇1～5份。


6.如权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄素青，张志祥，徐汉虹，程东美，丁姣，黄长安，
申请(专利权)人：仲恺农业工程学院，华南农业大学，广州市金农科技开发有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44