一种四氢叶酸生产用检测方法技术

本发明专利技术公开了一种四氢叶酸生产用检测方法，该方法包括以下步骤：S1：准备待测试剂以及相关检测材料；待测试剂1‑3份，带有空白孔、标准孔以及待测样品孔的酶标板，封板膜，FA酶标物、浓缩洗涤液，显色液A，显色液B，终止液；S2：稀释待测试剂成浓缩样品稀释液；S3：添加样品；将S2中的浓缩样品稀释液加入到酶标板的空白孔、标准孔以及待测样品孔内；S4：封板保存；用封板膜封住酶标板后恒温保存；该发明专利技术通过多次试验，利用样品的平均吸光度值与标准值比较得出其浓度范围较为准确，并且操作过程中的多次回温处理保证了酶的活性，模拟了人体的正常温度，使得检测结果更加贴近于实际。

【技术实现步骤摘要】
一种四氢叶酸生产用检测方法
本专利技术具体涉及叶酸检测
，尤其涉及一种四氢叶酸生产用检测方法。
技术介绍
四氢叶酸是一种还原型叶酸，亦称辅酶F，是辅酶形式的叶酸的母体化合物。当叶酸缺乏或某些药物抑制了叶酸还原酶，使叶酸不能转变为四氢叶酸，都可影响血细胞的发育和成熟，造成巨幼红细胞性贫血，若机体内缺乏四氢叶酸，则使多种生物合成反应受阻；高等动物最典型的表现为血红细胞的发育和成熟受到影响，易发生巨幼红细胞性贫血症；人在怀孕期，由于需要量增高可导致缺乏，严亏者可使胎儿发生神经管畸形。因此，四氢叶酸的生产变得十分重要。现有技术中，存在多种四氢叶酸的检测方式，但是这些检测方式之间都存在一些缺陷，使得四氢叶酸的检测结果都存在一些较大的误差，难以满足人们的检测要求。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有技术中存在的四氢叶酸检测中存在较大的误差的缺点，而提出的一种四氢叶酸生产用检测方法。为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：一种四氢叶酸生产用检测方法，该方法包括以下步骤：S1：准备待测试剂以及相关检测材料；待测试剂1-3份，带有空白孔、标准孔以及待测样品孔的酶标板，封板膜，FA酶标物、浓缩洗涤液，显色液A，显色液B，终止液；S2：稀释待测试剂成浓缩样品稀释液；S3：添加样品；将S2中的浓缩样品稀释液加入到酶标板的空白孔、标准孔以及待测样品孔内；S4：封板保存；用封板膜封住酶标板后恒温保存；S5：回温配液；将浓缩洗涤液用蒸馏水稀释后备用；S6：洗板洗液；将封板膜揭去，弃去液体，甩干，每孔加满S5中的洗涤液，静置20-30秒，弃去，重复操作3-5次，拍干；S7：加酶，标准孔以及待测样品孔内均加入FA酶标物；S8：回温处理：用封板膜封住S7中的酶标板后恒温保存；S9：二次清洗；将封板膜揭去，弃去液体，甩干，每孔加满S5中的洗涤液，静置20-30秒，弃去，重复操作3-5次，拍干；S10：显色处理：每孔中加入显色液A，再加入显色液B，轻微震动，静置，恒温遮光显色；S11：终止，最后加入终止液，终止反应；S12：测定，以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。进一步的，所述S1中，待测试剂取3份，S2过程中，将待测试剂稀释成浓缩样品稀释液1，浓缩样品稀释液2，浓缩样品稀释液3。在前述方案的基础上，所述S3过程中，添加浓缩样品稀释液时，保证浓缩样品稀释液不要触及孔壁，加完后，轻轻摇晃酶标板。作为本专利技术再进一步的方案，所述S4过程中，保存温度控制在30-45度之间，保存时间控制在20-40min之间。进一步的，所述S5过程中，浓缩洗涤液的稀释倍数为25-35倍。在前述方案的基础上，所述S7中，FA酶标物的加入含量在30ul-60ul之间。作为本专利技术再进一步的方案，所述S8过程中，保存温度控制在30-45度之间，保存时间控制在20-40min之间。进一步的，所述S10过程中，显色液A和显色液B的加入含量均在30ul-60ul之间，且显色液A和显色液B的加入含量相同，恒温遮光显色的时间在10-20min之间。在前述方案的基础上，所述S11过程中，终止液的加入含量均在30ul-60ul之间。作为本专利技术再进一步的方案，所述S12过程中，测定应在加入终止液的10-15min内进行。本专利技术的有益效果为：1.通过将待测试剂准备多份进行多次试验的操作，利用样品的平均吸光度值与标准值比较得出其浓度范围较为准确。2.通过在S5和S8操作过程中的多次回温处理保证了酶的活性，模拟了人体的正常温度，使得检测结果更加贴近于实际。3.通过在S6和S9过程中，温育后经洗涤去掉未结合物，使得检测结果不受其他因素影响，变得更加准确。4.通过在在加入终止液的10-15min内进行测定处理的方式，避免了测定时间过长，导致测量结果不准的情况产生，再次提高了检测的准确性，其中，待测标本浓度越高，标记抗原和抗体的结合就越受到抑制，显色愈浅。显色的深浅与酶量呈正相关，而与样品中待测物质含量呈负相关。附图说明图1为本专利技术提出的一种四氢叶酸生产用检测方法的流程示意图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本专利，而不能理解为对本专利的限制。在本专利的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”、“设置”应做广义理解，例如，可以是固定相连、设置，也可以是可拆卸连接、设置，或一体地连接、设置。对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本专利中的具体含义。参照图1，一种四氢叶酸生产用检测方法，该方法包括以下步骤：S1：准备待测试剂以及相关检测材料；待测试剂1-3份，本实施例中，待测试剂取3份，带有空白孔、标准孔以及待测样品孔的酶标板，封板膜，FA酶标物、浓缩洗涤液，显色液A，显色液B，本实施例中，显色液A，显色液B选用H2O2和TMB,终止液；S2：稀释待测试剂成浓缩样品稀释液；将3份待测试剂分别稀释成浓缩样品稀释液1，浓缩样品稀释液2，浓缩样品稀释液3；用以多次试验，利用样品的平均吸光度值与标准值比较得出其浓度范围较为准确；S3：添加样品；将S2中的浓缩样品稀释液加入到酶标板的空白孔、标准孔以及待测样品孔内；添加浓缩样品稀释液时，保证浓缩样品稀释液不要触及孔壁，加完后，轻轻摇晃酶标板，防止力度过大浓缩样品稀释液外溅，S4：封板保存；用封板膜封住酶标板后恒温保存；保存温度控制在30-45度之间，本实施例中具体的为36度，保存时间控制在20-40min之间，本实施例中具体的为32min；并且操作过程中的多次回温处理保证了酶的活性，模拟了人体的最低正常温度，使得检测结果更加贴近于实际；S5：回温配液；将浓缩洗涤液用蒸馏水稀释后备用；本实施例中浓缩洗涤液的具体稀释倍数为30倍；S6：洗板洗液；将封板膜揭去，弃去液体，甩干，每孔加满S5中的洗涤液，静置25秒，弃去，重复操作3-5次，拍干；S7：加酶，标准孔以及待测样品孔内均加入FA酶标物；本实施例中，FA酶标物的加入含量为50ul；用以起到标记作用；S8：回温处理：用封板膜封住S7中的酶标板后恒温保存；保存温度控制在30-45度之间，本实施例中具体的为36度，保存时间控制在20-40min之间，本实施例中具体的为32min；S9：二次清洗；将封板膜揭去，弃去液体，甩干，每孔加满S5中的洗涤液，静置20-30秒，弃去，重复操作3-5次，拍干；温育本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种四氢叶酸生产用检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：/nS1：准备待测试剂以及相关检测材料；待测试剂1-3份，带有空白孔、标准孔以及待测样品孔的酶标板，封板膜，FA酶标物、浓缩洗涤液，显色液A，显色液B，终止液；/nS2：稀释待测试剂成浓缩样品稀释液；/nS3：添加样品；将S2中的浓缩样品稀释液加入到酶标板的空白孔、标准孔以及待测样品孔内；/nS4：封板保存；用封板膜封住酶标板后恒温保存；/nS5：回温配液；将浓缩洗涤液用蒸馏水稀释后备用；/nS6：洗板洗液；将封板膜揭去，弃去液体，甩干，每孔加满S5中的洗涤液，静置20-30秒，弃去，重复操作3-5次，拍干；/nS7：加酶，标准孔以及待测样品孔内均加入FA酶标物；/nS8：回温处理：用封板膜封住S7中的酶标板后恒温保存；/nS9：二次清洗；将封板膜揭去，弃去液体，甩干，每孔加满S5中的洗涤液，静置20-30秒，弃去，重复操作3-5次，拍干；/nS10：显色处理：每孔中加入显色液A，再加入显色液B，轻微震动，静置，恒温遮光显色；/nS11：终止，最后加入终止液，终止反应；/nS12：测定，以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。/n...

【技术特征摘要】
1.一种四氢叶酸生产用检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
S1：准备待测试剂以及相关检测材料；待测试剂1-3份，带有空白孔、标准孔以及待测样品孔的酶标板，封板膜，FA酶标物、浓缩洗涤液，显色液A，显色液B，终止液；
S2：稀释待测试剂成浓缩样品稀释液；
S3：添加样品；将S2中的浓缩样品稀释液加入到酶标板的空白孔、标准孔以及待测样品孔内；
S4：封板保存；用封板膜封住酶标板后恒温保存；
S5：回温配液；将浓缩洗涤液用蒸馏水稀释后备用；
S6：洗板洗液；将封板膜揭去，弃去液体，甩干，每孔加满S5中的洗涤液，静置20-30秒，弃去，重复操作3-5次，拍干；
S7：加酶，标准孔以及待测样品孔内均加入FA酶标物；
S8：回温处理：用封板膜封住S7中的酶标板后恒温保存；
S9：二次清洗；将封板膜揭去，弃去液体，甩干，每孔加满S5中的洗涤液，静置20-30秒，弃去，重复操作3-5次，拍干；
S10：显色处理：每孔中加入显色液A，再加入显色液B，轻微震动，静置，恒温遮光显色；
S11：终止，最后加入终止液，终止反应；
S12：测定，以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。


2.如权利要求1所述的一种四氢叶酸生产用检测方法，其特征在于：所述S1中，待测试剂取3份，S2过程中，将待测试剂稀释成浓缩样品稀释液1，浓缩样品稀释液2，浓缩样品稀释液3。


3.如权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：葛月兰，文佺佺，
申请(专利权)人：无锡紫杉药业有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32