本发明专利技术涉及利用维生素Ｋ环氧化物还原酶（ＶＫＯＲ）基因的单核苷酸多态性位点确定患者对血管疾病（如缺血性脑卒中、冠心病以及出血性脑卒中、动脉夹层）的易感性的方法，用于该方法的物质、组合物、试剂盒及其用途。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及利用维生素K环氧化物还原酶(VKOR)基因的单核苷酸多态性位点确定患者对血管疾病(如缺血性脑卒中、冠心病以及出血性脑卒中、动脉夹层)的易感性的方法，用于该方法的物质、组合物、试剂盒及其用途。
技术介绍
血管疾病如脑卒中和冠心病发病率非常之高，中国人群中每11秒就有一个因此而死亡。能够找到这类疾病的早期预测标记意义非常明显。已知维生素K环氧化物还原酶(VKOR)的主要功能是参与将维生素K环氧化物还原成维生素K醌形式的反应。而维生素K醌继续被维生素K还原酶还原成维生素K氢醌的形式，在凝血酶原前体转化成凝血酶原的反应中，维生素K氢醌转化成维生素K环氧化物。维生素K依赖的促凝血蛋白和抗凝血蛋白被认为与动脉硬化和血栓症有关系。血栓症和动脉硬化直接导致血管疾病如缺血性脑卒中、冠心病以及出血性脑卒中、动脉夹层。近期研究发现VKOR的几个单核苷酸多态性(SNPs)与华法令(warfarin)的剂量相关。本专利技术通过大型病例对照研究来调查VKOR的基因单个核苷酸多态性与血管疾病(如脑中风、冠心病和动脉夹层)是否具有相关性，从而得到了利用维生素K环氧化物还原酶(VKOR)基因的单核苷酸多态性位点确定患者对血管疾病(如缺血性脑卒中、冠心病以及出血性脑卒中、动脉夹层)的易感性的方法，用于该方法的物质、组合物、试剂盒及其用途。
技术实现思路
本专利技术的一个方面，涉及一种用于鉴别选自如下的维生素K环氧化物还原酶基因的多态性位点-1639A/G、+1173T/C、+1542C/G、+2255T/C、和+3730G/A的工具。具体的，本专利技术所述工具是维生素K环氧化物还原酶基因的多态性位点-1639A/G、+1173T/C、+1542C/G、+2255T/C、和+3730G/A分型寡核苷酸，优选地，所述多态性分型寡核苷酸是(1)等位基因特异性核酸引物，它能够检测选自如下的维生素K环氧化物还原酶基因-1639A/G、+1173T/C、+1542C/G、+2255T/C、和+3730G/A的多态性，或者(2)用于检测维生素K环氧化酶基因多态性的寡核苷酸探针，其能特异地与具有选自-1639A/G、+1173T/C、+1542C/G、+2255T/C、和+3730G/A的维生素K环氧化酶基因多态性位点的核酸杂交，优选地，寡核苷酸探针的长度为17-50个核苷酸。在本专利技术的一个实施方案中，所述工具是限制性内切酶。本专利技术的另一方面涉及一种试剂盒，其包含至少一种上述工具，以及，任选的，用于检测反应的合适的缓冲体系和显色体系。本专利技术的再一方面还涉及诊断患者包括缺血性脑卒中、冠心病以及出血性脑卒中、动脉夹层的血管疾病易感性的方法，所述方法包括检测来自所述患者的样品中选自如下的维生素K环氧化物还原酶基因-1639A/G、+1173T/C、+1542C/G、+2255T/C、和+3730G/A的多态性位点的存在。本专利技术的又一方面涉及确定患者包括缺血性脑卒中、冠心病以及出血性脑卒中、动脉夹层的血管疾病的易感性方法，所述方法包括检测来自所述患者的样品中选自如下的维生素K环氧化物还原酶基因-1639A/G、+1173T/C、+1542C/G、+2255T/C、和+3730G/A的多态性位点的存在。本专利技术的另一方面涉及分析从患者分离的离体生物样品的方法，包括确定所述样品中选自如下的维生素K环氧化物还原酶基因-1639A/G、+1173T/C、+1542C/G、+2255T/C、和+3730G/A的多态性位点。具体的，在本专利技术的一个实施方案中，可使用包括选自以下的差异核酸分析技术的试验用质谱对PCR产物直接质量分析、对侵入性切割产物直接分析、直接序列分析、等位基因特异性扩增、等位基因特异性杂交、寡核苷酸连接试验、侵入者试验、DNA芯片分析和限制性片段长度多态性进行上述多态性位点分析。本领域普通技术人员知晓，用于上述分析的样品选自来自患者的外周血细胞、白细胞、血清、尿样、唾液、体液和/或(活检)组织样本，任选的，所述样品可以预先进行纯化，例如分离总DNA。本专利技术还涉及一种微阵列，其中包含选自如下的维生素K环氧化物还原酶基因-1639A/G、+1173T/C、+1542C/G、+2255T/C、和+3730G/A的多态性位点的分型寡核苷酸。在本专利技术的一个具体实施方案中，所述微阵列是DNA芯片的形式。本专利技术再一方面还涉及检测生物学样品中选自如下的维生素K环氧化物还原酶基因-1639A/G、+1173T/C、+1542C/G、+2255T/C、和+3730G/A的多态性位点的存在的物质在制备诊断试剂的用途，所述诊断试剂用于诊断患者包括缺血性脑卒中、冠心病以及出血性脑卒中、动脉夹层的血管疾病易感性。具体的，用于上述用途的物质选自本专利技术前述的工具；能够特异识别选自如下的维生素K环氧化物还原酶基因-1639A/G、+1173T/C、+1542C/G、+2255T/C、和+3730G/A的多态性位点的突变的抗体；和能够特异识别选自如下的维生素K环氧化物还原酶基因-1639A/G、+1173T/C、+1542C/G、+2255T/C、和+3730G/A的多态性位点的引物或者探针或者限制性内切酶。具体实施例方式本专利技术利用维生素K环氧化物还原酶基因作为包括缺血性脑卒中、冠心病以及出血性脑卒中、动脉夹层的血管疾病易感候选基因的病例的对照研究，对该基因选自-1639A/G、+1173T/C、+1542C/G、+2255T/C、和+3730G/A的多态性位点与包括缺血性脑卒中、冠心病以及出血性脑卒中、动脉夹层的血管疾病的关系进行了关联研究，根据统计学结果得出了所述多态性位点等位基因与上述血管疾病的相关性。“对应”是指本专利技术核酸分子或者蛋白质的序列在与参考序列的cDNA序列所示序列最佳比对(alignment)后与该参考序列某位置相对的位置。因此，本专利技术核酸分子或者蛋白质“对应位置”或者“对应核苷酸”或者“对应氨基酸”不一定是与参考序列编号相同的位置、或者核苷酸或者氨基酸。维生素K环氧化物还原酶基因单核苷酸多态性位点是指位于启动子区第-1639位多态性A和G(rs9923231)、位于第一个内含子区+1173位多态性T和C(rs9934438)，位于第二个内含子区+1542位多态性C和G(rs8050894)以及+2255位T和C(rs2359612)、位于5’非翻译区的+3730位G和A(rs7294)。单核苷酸多态性及其检测术语“患者”是指动物，优选哺乳动物，更优选灵长类动物，最优选人类。术语“多态性”广义上限定为包括已知发生在核苷酸序列中的所有变异，包括插入，缺失，置换和重复序列(包括二重重复)。人类基因组中的序列变异主要由单核苷酸多态性(″SNP″)组成，其余序列变异是短串联重复(包括微卫星)、长串联重复(小卫星)和其它插入和缺失。SNP是群体中以可测频率(即＞1％)出现两个可替换碱基的位置。SNP被称为是″等位的″，因为由于此多态性的存在，一个物种的一些成员可能具有未突变序列(即，原始“等位基因”)，而其它成员可能具有突变序列(即变体或突变等位基因)。在最简单的情况下，可能仅存在一个突变序列，该多态性被称为二对等位基因多态性。可替换突变的发生可产生三对等位基因多态性等本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于鉴别选自如下的维生素Ｋ环氧化物还原酶基因的多态性位点：－１６３９Ａ／Ｇ、＋１１７３Ｔ／Ｃ、＋１５４２Ｃ／Ｇ、＋２２５５Ｔ／Ｃ、和＋３７３０Ｇ／Ａ的工具。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：惠汝太，汪一波，郑翼，杨涛，杨旭，张禅那，陈敬洲，
申请(专利权)人：中国医学科学院阜外心血管病医院，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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