组织性质诊断用试剂盒制造技术

技术编号:2582693 阅读:270 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术提供一种用于诊断从患者身上采集的组织的性质的试剂盒,包括:用于测定所述组织中周期素依赖性激酶的表达量的表达量测定试剂;及用于测定所述组织中周期素依赖性激酶活性值的活性测定试剂;所述表达量测定试剂和活性测定试剂中在第一保存条件下保存的试剂构成第一试剂组;所述表达量测定试剂和活性测定试剂中在不同于第一保存条件的第二保存条件下保存的试剂构成第二试剂组。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种试剂盒,特别是用于测定从患者身上采集的组织中的周期素依赖性激酶的表达量和活性值,根据取得的表达量和活性值诊断组织性质的试剂盒。
技术介绍
作为主管生物细胞增殖的细胞周期调节因子,有正调节因子--周期素依赖性激酶(以下简称CDK)。CDK一旦被磷酸化等激活,就会和周期素结合,形成CDK与周期素的复合物(以下有时简称为活化CDK)。CDK因此被激活,这样,CDK在相应的细胞周期的特定阶段显示活性。众所周知,负调节因子--周期素依赖性激酶抑制剂(以下简称CDK抑制剂)会结合到CDK和/或CDK·周期素的复合物中阻碍CDK的活性。细胞周期调节因子的表达量和活性值的数据可以作为判断有关细胞周期控制的诸如疾患种类和恶性程度等从患者身上采集的组织性质的良好指标。比如大家都知道CDK一般在细胞内也能表现出一定量,但在被增殖因子诱导增殖的细胞中其表达量更高。然而,如上所述,激活CDK是CDK、周期素与CDK抑制剂密切相关的非常复杂的过程。因此,无论单凭CDK、周期素和CDK抑制剂的表达量的数据,还是仅凭CDK的活性值的数据作为判断组织性质的指标都是不充分的。在此,表达量是指用组织配制的组织液测得的目标蛋白质量(对应于分子个数的单位)。表达量用周知的从蛋白质混合物测定目标蛋白质量的方法也可以测定。比如表达量用ELISA法、蛋白质转移吸印技术westernblot法以及日本专利申请公告第2003-130871号上公开的方法等都可测定。目标蛋白质可以用特异抗体捕捉到。比如捕捉CDK1时,使用抗CDK1抗体可以捕捉到上述组织溶液中的全部CDK1(含CDK1单体、CDK1和周期素及/或CDK抑制剂的复合物、CDK1和其他化合物的复合物)。所谓CDK活性值是指CDK与特定的周期素结合后有多少基质磷酸化这一激酶活性水平,其单位用U(单元)表示。例如通过检测活化CDK1或活化CDK2使多少组朊H1磷酸化,即可以测定CDK1或CDK2的活性值。通过检测活化CDK4或活化CDK6使多少成视网膜细胞瘤蛋白(Rb;Retinoblastoma protein)磷酸化即可以测定CDK4或CDK6的活性值。CDK活性值可以用众所周知的以放射性物质为标记的酶活性测定法来测定。具体来说,使用32P标记腺甙5’-O-(3-磷酸三甲酚酯)(γ-〔32P〕-ATP)的测定法。用此方法,在CDK的作用下,来自于32P标记ATP的一元磷酸基进入该基质。通过用放射自显影术或闪烁计数管检测该基质中的32P即可测定磷酸化后的该基质的量,从该基质的量来计算出CDK的活性。另外,在美国专利申请公告第2002-0164673号当中公开了不以放射性物质为标记的CDK活性值测定法。根据此方法,让腺甙5’-O-(3-硫代磷酸三甲酚酯)(ATP-γS)与基质反应,并让标记物质与加入基质中的含有一元硫代磷酸基的硫磺原子结合,测定标记量。例如用标记荧光物质作为标记物时,测定荧光量作为标记量。现在,诊断从患者身上采集的组织的性质在临床上担负着诊断癌症恶性度的重要任务。在此,所谓癌症恶性度包括转移的机率、复发的机率和预后不良的程度等。比如用通过测定肿瘤标记、生检作出的组织诊断和细胞诊断、TNM(T原发肿瘤的大小;N淋巴节转移水平;M远距离转移)分类和荧光显示式细胞分离机测定DNA含量等方法得到的信息,诊断癌症。但是,在各种方法中存在以下问题 ·诊断敏感度低;·最终诊断要凭观察者自己的经验,故诊断难;·诊断时的病态虽然能够把握,但不能正确预测预后;·需要有娴熟的技术。这些问题表现出在癌症的恶性度诊断中各人判断的不同和医疗机关诊断方法的各异,从而成为癌症恶性度诊断出现偏差的重要原因。在决定癌症的治疗方针时,调查组织中所含细胞对抗癌药等药物的敏感性与诊断恶性度同样重要。作为调查敏感性的方法有体外进行肿瘤细胞抗癌药敏感性试验的方法,如周知的MTT法(四氮唑盐法,3-(4,5-dimcthylthioazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide)和DISC法(区别染色细胞毒法,differential staining cytotoxicity)。然而,无论哪种方法其阳性预测率都不到70%,作为是否进行抗癌药物治疗的判断指标是不够的。(Weisenthal,L.M.and Nygren.P(2002)Current status of cell culturedrug resistance testing(CCDRT)、http://weisenthal.org/)。如上所述,从患者身上采集的组织中测定CDK的表达量的方法在日本专利申请公告第2003-130871号上有记载,CDK活性值的测定方法在美国专利申请公告第2002-0164673号上也有公开。但是,根据CDK的表达量和活性值诊断组织性质的试剂盒尚未开发。而且,测定CDK表达量和CDK活性值分别需要用很多试剂,这些试剂保存条件各异,放在一起保存非常烦杂。
技术实现思路
本专利技术目的是提供易于保存各种试剂的,对从患者身上采集的组织性质进行诊断的试剂盒。本专利技术提供以下试剂盒 一种用于诊断从患者身上采集的组织的性质的试剂盒,包括用于测定所述组织中周期素依赖性激酶(CDK)的表达量的表达量测定试剂;及用于测定所述组织中CDK的活性值的活性测定试剂。所述表达量测定试剂和活性测定试剂中在第一保存条件下保存的试剂构成第一试剂组;所述表达量测定试剂和活性测定试剂中在不同于第一保存条件的第二保存条件下保存的试剂构成第二试剂组。其中所述第一保存条件为冷藏保存,所述第二保存条件为冷冻保存。其中所述第一试剂组包含被标记的CDK抗体(标记CDK抗体)、固定CDK抗体的载体、所述CDK的基质、三磷酸腺苷(ATP);所述第二试剂组包含能与ATP和所述基质在所述CDK作用下反应生成的产物结合的标记物。其中所述第一试剂组包括含有固定所述CDK抗体的载体的柱。所述第二试剂组包括已知浓度的CDK。其中所述试剂盒用于组织性质诊断装置,所述组织性质诊断装置测定所述组织中的CDK表达量和活性值,并根据获得的CDK表达量和活性值的数据诊断所述组织的性质。其中所述组织性质诊断装置包括获取反映所述组织中CDK表达量的第一数据的第一数据获取手段、获取反映所述组织中CDK活性值的第二数据的第二数据获取手段以及根据所述第一数据和第二数据得出的值获取所述组织性质的有关信息的解析手段。本专利技术还提供一种诊断从患者身上采集的组织的性质的试剂盒,包括用于测定所述组织中第一周期素依赖性激酶(CDK)表达量的第一表达量测定试剂、用于测定第一CDK活性值的第一活性测定试剂、用于测定第二CDK表达量的第二表达量测定试剂及用于第二CDK活性值的第二活性测定试剂;所述表达量测定试剂和活性测定试剂中在第一保存条件下保存的试剂构成第一试剂组,所述表达量测定试剂和活性测定试剂中在与第一保存条件不同的第二保存条件下保存的试剂构成第二试剂组。其中所述第一保存条件为冷藏保存,所述第二保存条件为冷冻保存。其中所述第一试剂组包含被第一标记物标记的第一CDK抗体(第一标记CDK抗体)、被第二标记物标记的第二CDK抗体(第二标记CDK抗体)、固定第一CDK抗体的第一本文档来自技高网
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【技术保护点】
一种用于诊断从患者身上采集的组织的性质的试剂盒,包括:    用于测定所述组织中周期素依赖性激酶的表达量的表达量测定试剂;及    用于测定所述组织中周期素依赖性激酶活性值的活性测定试剂;    所述表达量测定试剂和活性测定试剂中在第一保存条件下保存的试剂构成第一试剂组;    所述表达量测定试剂和活性测定试剂中在不同于第一保存条件的第二保存条件下保存的试剂构成第二试剂组。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员:石原英幹中山智川崎由子片山彩
申请(专利权)人:希森美康株式会社
类型:发明
国别省市:JP[日本]

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