一种红茶菌蛋白的制备新方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种红茶菌蛋白的制备新方法及其应用，属于红茶菌蛋白技术领域。该方法包括：将水煮沸后加入红茶茶叶,在煮沸条件下煎煮5min～1h，过滤除去茶叶渣后在茶汤中加入蔗糖和无机盐搅拌溶解完全，然后将茶汤冷却，在冷却后的茶汤中加入红茶菌菌种，搅拌均匀后在弱紫外灯下照射，然后在电热恒温箱中恒温发酵得红茶菌发酵液；将得到的红茶菌发酵液过滤、离心，收集上清液，并加入有机试剂‑盐形成的双水相液，搅拌混匀，静置沉降后离心，收集上清液，重复数次，将上清液减压浓缩得浓缩液，浓缩液干燥后即得红茶菌蛋白。本发明专利技术可以显著提高从红茶菌发酵液中所提取出的红茶菌蛋白的产出含量。

【技术实现步骤摘要】
一种红茶菌蛋白的制备新方法及其应用
本专利技术涉及到一种红茶菌蛋白的制备新方法及其应用，属于红茶菌蛋白

技术介绍
红茶菌又名海宝、胃宝，康普茶，是一种历史悠久的民间传统酸性保健饮料，因其具有酸甜清爽的口感，目前仍然非常受大众欢迎。红茶菌是以蔗糖和茶叶水为发酵基质，经由酵母菌、醋酸菌和乳酸菌等多种菌种共发酵而成，研究表明，红菌茶是一种对人体有多种保健作用的健康饮品，如清理肠胃助消化、保肝护肾排结石、促进代谢增强食欲、抗衰老、增强免疫、清肺安神、预防和治疗动脉粥样硬化等。虽然已有研究表明红茶菌发酵液具有抗菌作用，其抗菌活性主要源于三个方面：一是茶叶本身含有的茶多酚；二是红茶菌共生体系在代谢过程中形成的乙酸、乙醇、葡萄糖酸二酸等代谢产物对微生物的抑制；三是红茶菌共生体中微生物的共同作用，产生一些具有抗菌的蛋白和多糖。但目前关于红茶菌的研究多集中在发酵条件分析和菌群的分析以及红茶菌在其他食品保健饮料上的探索和应用，关于红茶菌发酵液成分中的红茶菌抑菌蛋白的研究较少，关于红茶菌抑菌蛋白在化妆品祛痘上的应用研究更少。文献(谢俊杰,佘世望,钟青萍,晏学明,李华光.红茶菌抗菌蛋白抗菌活性研究[J].生物技术,1999(06):22-25.)从培养后的红茶菌发酵液中提取了抗菌蛋白并对其抗菌活性进行了研究，但是采用该文献方法从红茶菌发酵液中所提取出的抗菌蛋白的产出含量较低，每1L红茶菌发酵液所提取出的红茶菌蛋白的质量仅为1.227g。
技术实现思路
针对现有技术中的问题，本专利技术提供一种红茶菌蛋白的制备新方法及其应用，本专利技术方法通过改善发酵和分离过程，可以显著提高从红茶菌发酵液中所提取出的红茶菌蛋白的产出含量。为实现以上技术目的，本专利技术的技术方案是：一种红茶菌蛋白的制备新方法，包括如下步骤：(1)将水煮沸后加入红茶茶叶,在煮沸条件下煎煮5min～1h，过滤除去茶叶渣后在茶汤中加入蔗糖和无机盐搅拌溶解完全，然后将茶汤冷却，在冷却后的茶汤中加入红茶菌菌种，搅拌均匀后在弱紫外灯下照射，然后在电热恒温箱中恒温发酵得红茶菌发酵液；(2)将步骤(1)得到的红茶菌发酵液过滤、离心，收集上清液，并加入有机试剂-盐形成的双水相液，搅拌混匀，静置沉降后离心，收集上清液，重复数次，将上清液减压浓缩得浓缩液，浓缩液干燥后即得红茶菌蛋白。优选地，步骤(1)中水、红茶茶叶、蔗糖、无机盐、红茶菌菌种的质量比为：100：(0.1～10)：(1～20)：(0.1～1.1)：(1～2)。优选地，步骤(1)中所述的无机盐为氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸盐、磷酸盐、磷酸一氢盐中的一种或几种混合。优选地，步骤(1)中所述的弱紫外灯为4～6W的紫外灯，照射时间为1s～1min。优选地，步骤(1)中所述的发酵的温度为30℃，发酵时间为5～20天。优选地，步骤(2)中所述的双水相液是首先将有机试剂溶于水中配成质量分数为1～50％的有机溶液，将盐溶于水中配成质量分数为5～50％的盐溶液，然后将有机溶液与盐溶液混合均匀后形成的。进一步优选地，所述的有机试剂为乙醇、异丙醇、丙酮、甲醇中的任意一种，盐为硫酸盐、氯化钠、氯化钾中的一种或几种混合。采用上述方法制备的红茶菌蛋白在化妆品上的应用。优选地，所述红茶菌蛋白用于制备祛痘凝胶，按质量百分数计，所述祛痘凝胶由以下成分组成：水95.57％甘油3％卡波姆U200.2％透明质酸钠0.02％三乙醇胺0.2％红茶菌蛋白0.01％。进一步优选地，所述祛痘凝胶的制备方法为：按配方量称取各原料，在70～80℃将水、甘油、卡波姆U20混合并搅拌均匀，加入透明质酸钠，继续搅拌均匀成均一相，然后降温至40～50℃，加入三乙醇胺，搅拌均匀；最后加入红茶菌蛋白，搅拌混合至完全溶解，得祛痘凝胶。从以上描述可以看出，本专利技术具备以下优点：(1)本专利技术首先通过弱紫外灯照射红茶菌液，然后自然条件下发酵，再采用双水相技术对红茶菌发酵液进行分离制备出红茶菌蛋白，本专利技术方法操作简便，条件温和，不仅可以提高红茶菌发酵液中所产生的红茶菌蛋白的含量，而且可以提高红茶菌蛋白被从红茶菌发酵液中提取出来的提取率，从而明显改善从红茶菌发酵液中所提取出的抗菌蛋白的产出含量，每1L红茶菌发酵液所提取出的红茶菌蛋白的质量可达1.410g，相比传统提取方法，提高率达14.9％；(2)本专利技术所制备出的红茶菌蛋白具有良好的抑菌效果，对痤疮丙酸杆菌和表皮葡萄球菌具有良好的抑制作用；(3)本专利技术所制备出的红茶菌蛋白可以用在化妆品中，如凝胶、水、膏霜等，可作为祛痘和修复使用。具体实施方式下面结合实施例及测试例，对本专利技术进行具体描述，但不对本专利技术的权利要求做任何限定。实施例1：一种红茶菌蛋白的制备新方法，包括如下步骤：(1)将100g水煮沸后加入红茶茶叶0.5g,在煮沸条件下煎煮15min，过滤除去茶叶渣后在茶汤中加入10g蔗糖和0.1gMgCl2、1gK2HPO4搅拌溶解完全，然后将茶汤冷却，在冷却后的茶汤中加入1.5g红茶菌菌种(红茶菌新胜三号菌种，购买于新胜红茶菌菌种公司)，搅拌均匀后在5W紫外灯下照射10s，然后在电热恒温箱中于30℃恒温发酵10天得红茶菌发酵液(体积为V1)；(2)将异丙醇溶于水中配成质量分数为26％的有机溶液，将硫酸铵溶于水中配成质量分数为12％的盐溶液，然后将有机溶液与盐溶液混合均匀后形成异丙醇-硫酸铵双水相液；(3)将步骤(1)得到的红茶菌发酵液过滤、过滤液于4℃下以4000r/min的转速离心，收集上清液，并加入步骤(2)得到的异丙醇-硫酸铵双水相液，搅拌混匀，静置沉降后于4℃下以8000r/min的转速离心，收集上清液，重复1次，将上清液减压浓缩得浓缩液，浓缩液干燥后即得红茶菌蛋白A。对比例1：采用文献(谢俊杰,佘世望,钟青萍,晏学明,李华光.红茶菌抗菌蛋白抗菌活性研究[J].生物技术,1999(06):22-25.)中所述的实验方法制备红茶菌蛋白B。红茶菌蛋白的产出含量测试：将实施例1和对比例1所制备出的红茶菌蛋白全部溶解于蒸馏水中得到红茶菌蛋白液，实施例和对比例所使用的蒸馏水的体积与相应红茶菌蛋白制备过程中所得红茶菌发酵液的体积相同，采用考马斯亮蓝法测试各红茶菌蛋白液的浓度即可得从红茶菌发酵液中所提取出的红茶菌蛋白的产出含量，结果如表1所示；表1红茶菌蛋白含量(mg/mL)A1.410B1.227红茶菌蛋白的抑菌效果测试：(1)供试菌株：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、痤疮丙酸杆菌；(2)培养基：营养琼脂培养基和LB液体培养基用于培养细菌(大肠杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌)，马铃薯葡萄糖琼本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种红茶菌蛋白的制备新方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)将水煮沸后加入红茶茶叶,在煮沸条件下煎煮5min～1h，过滤除去茶叶渣后在茶汤中加入蔗糖和无机盐搅拌溶解完全，然后将茶汤冷却，在冷却后的茶汤中加入红茶菌菌种，搅拌均匀后在弱紫外灯下照射，然后在电热恒温箱中恒温发酵得红茶菌发酵液；/n(2)将步骤(1)得到的红茶菌发酵液过滤、离心，收集上清液，并加入有机试剂-盐形成的双水相液，搅拌混匀，静置沉降后离心，收集上清液，重复数次，将上清液减压浓缩得浓缩液，浓缩液干燥后即得红茶菌蛋白。/n

【技术特征摘要】
1.一种红茶菌蛋白的制备新方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将水煮沸后加入红茶茶叶,在煮沸条件下煎煮5min～1h，过滤除去茶叶渣后在茶汤中加入蔗糖和无机盐搅拌溶解完全，然后将茶汤冷却，在冷却后的茶汤中加入红茶菌菌种，搅拌均匀后在弱紫外灯下照射，然后在电热恒温箱中恒温发酵得红茶菌发酵液；
(2)将步骤(1)得到的红茶菌发酵液过滤、离心，收集上清液，并加入有机试剂-盐形成的双水相液，搅拌混匀，静置沉降后离心，收集上清液，重复数次，将上清液减压浓缩得浓缩液，浓缩液干燥后即得红茶菌蛋白。


2.如权利要求1所述的制备新方法，其特征在于，步骤(1)中水、红茶茶叶、蔗糖、无机盐、红茶菌菌种的质量比为：100：(0.1～10)：(1～20)：(0.1～1.1)：(1～2)。


3.如权利要求1所述的制备新方法，其特征在于，步骤(1)中所述的无机盐为氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸盐、磷酸盐、磷酸一氢盐中的一种或几种混合。


4.如权利要求1所述的制备新方法，其特征在于，步骤(1)中所述的弱紫外灯为4～6W的紫外灯，照射时间为1s～1min。


5.如权利要求1所述的制备新方法，其特征在于，步骤(1)中所述的发酵的温度为30℃，发酵...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴震，孔令姗，郑雄健，谢振荣，
申请(专利权)人：上海澜海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31