甲基苯丙胺类药物的检测制造技术

本发明专利技术提供了免疫测定，其高度特异于在生物样品中检测甲基苯丙胺和其它甲基苯丙胺类例如克斯他司和其它克斯他司类药物的滥用药物。更特别地，提供了竞争性测定，它包含：（ａ）将所述样品与（ｉ）伪麻黄碱经由其羟基连接到载体的伪麻黄碱／载体共轭物和（ｉｉ）能够与甲基苯丙胺类的一种或多种药物和所述共轭物都结合的抗体相接触；和（ｂ）确定所述抗体对所述共轭物的结合是否被所述样品的存在所减弱，结合减弱指示所述样品含有甲基苯丙胺类药物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及例如来自生物基质、环境组合物和表面的试样中甲基苯丙胺和设计师克斯他司(designer ecstasy)类药物的检测。特别是，本专利技术涉及用于实验室使用和对这样药物的即时诊断与现场试验的程序和试剂。
技术介绍
甲基苯丙胺是中枢神经系统也是周围神经系统的上瘾的和强烈的兴奋剂。它在功能上类似于苯异丙胺，但是更有效力。两种药物都是苯乙胺的衍生物(见附图说明图1)，就象设计者甲基苯丙胺类药物包括克斯他司(3，4-亚甲二氧基甲基苯丙胺，MDMA)、(+/-)-N-甲基-1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-2-丁胺(MBDB)和(+/-)-3，4-亚甲二氧基乙基苯异丙胺(MDEA)等那样。由于它们强烈的兴奋剂效应，这些药物被严重滥用。这样的药物通常在尿、血、汗、口腔液体和毛发中检测。为此目的可以利用不同类型的免疫测定。这些测定一般利用对苯异丙胺和甲基苯丙胺的抗体(多克隆的和单克隆的)，通过用经由官能团结合到药物的苯基特别是对位而结合到载体蛋白质(例如牛血清白蛋白)的药物衍生物免疫动物而产生所述抗体。然后所述免疫测定将利用这些抗体和结合到标记的相同药物衍生物，所述标记可以是，例如，蛋白质、酶、放射性标记或荧光标记。包括抗体与标记药物衍生物生产的本领域中现有技术公布是大量的，并且相关的商业免疫测定是可得到的，像Abbott和Roche系统(EP0371253，EP 0279213，EP 1167976，US 4329281，US 4041076，US 4067774，US 3996344，US 4016146和WO 02057739)。制造特异性抗体的其它方法利用经由脂族烷基末端(利用4-氨基丁基苯异丙胺和4-氨基丁基甲基苯丙胺)结合到载体蛋白质的药物衍生物(EP 0359063和Analytical Biochemistry，1999，274卷，118-124页)。利用这个抗体和结合到标记的相同衍生物建立免疫测定。也已经报道了用于克斯他司类药物的特异性测定。转让给Microgenics Corporation的美国专利2003207469描述将克斯他司药物、2-氨基-亚甲二氧基苯基的衍生物用于结合到免疫用载体蛋白质并用于标记类似物的生产。所希望的是，甲基苯丙胺和克斯他司类药物对于违禁药物显示出特异性。这是重要的，因为许多苯乙胺类似物是用于无医生开的处方也可合法出售的药物像减充血剂(镇咳合剂)。所述目录是大的并包括麻黄碱类、伪麻黄碱类、苯丙醇胺和脱羟肾上腺素(phenylepherine)。一些普及的药物是Sudafed、Contact、Vicks吸入器和Primatine片剂。另外，化合物像酪胺(4-羟基-苯乙胺)(见图1)可以自然地存在于检测苯异丙胺类/甲基苯丙胺类的生物样品中。免疫测定应当与要用的酪胺令人满意地具有小于0.4％的交叉反应性(EP 0371253)。目前已知的利用克斯他司衍生物的免疫测定具有不能检测甲基苯丙胺的局限性，特别是对那些可存在于除尿之外的生物流体(例如口腔流体)中的低水平情况下。基于利用对经由苯环结合到载体蛋白质的药物衍生物的抗体的免疫测定具有对于甲基苯丙胺缺乏特异性的缺点并且易受许多上述合法药物的干扰。所述Abbott测定需要在前的样品处理以消除或减少不合需要的交叉反应性。将样品用高碘酸钠处理以消除与药物像麻黄碱类、伪麻黄碱和苯丙醇胺还有酪胺(EP0371253)的交叉反应性。超过40种药物被列为在甲基苯丙胺尿检验中引起假阳性结果(www.erowid.org/)。苯异丙胺/甲基苯丙胺免疫测定的特异性的缺乏已成为关注的问题(Journal of Analytical Toxicology，2003，27卷，265-269页，和其中的参考文献)。评价商售的检验试剂盒被麻黄碱、伪麻黄碱和苯丙醇胺干扰的最近研究(Journal of Forensic Science，2004，49卷，160-164页)表明了无法接受水平的干扰并且断定制造商低估了它们的试剂盒显示的不合需要的交叉反应性的水平。专利技术概述目前本专利技术提供了对于甲基苯丙胺和其它甲基苯丙胺类滥用的药物例如克斯他司的生物样品中的检测是高度特异性的免疫测定，没有来自其它苯乙胺(phenyethylamine)衍生物的明显干扰，其依赖于伪麻黄碱衍生物的使用，更具体而言是经由其羟基连接到载体的伪麻黄碱的使用。专利技术人惊奇地发现这样一种共轭物，其中伪麻黄碱被连接到与对于甲基苯丙胺的单克隆抗体起强烈反应的载体蛋白质例如牛血清白蛋白(BSA)。而且，完全出乎意料地是，发现这样一种抗体对于固定化的BSA-伪麻黄碱的结合被生物流体中的甲基苯丙胺和克斯他司竞争性抑制，但是不被甲基苯丙胺检测中通常被认为是潜在干扰物的(+/-)-伪麻黄碱类、(+/-)-麻黄碱类和许多其它苯乙胺类似物包括酪胺显著抑制，即使在相对非常高的浓度下。对于甲基苯丙胺、克斯他司和其它属于甲基苯丙胺类滥用药物的检测，这个观察结果为新的高度特异的竞争性类型的免疫测定提供了基础。因此，本专利技术提供了用于检测液体样品是否含有一种或多种甲基苯丙胺类药物的方法，特别地至少是否含有甲基苯丙胺、克斯他司、MBDB和MDEA，并且最理想地至少是否含有约≥15至30ng/ml的甲基苯丙胺、克斯他司和MBDB，包括(a)将所述样品与(i)伪麻黄碱经由其羟基连接到载体的伪麻黄碱/载体共轭物和(ii)能够与一种或多种甲基苯丙胺类药物和所述共轭物都结合的抗体相接触；和(b)确定所述抗体对所述共轭物的结合是否被所述样品的存在所减弱，结合减弱指示所述样品含有甲基苯丙胺类药物。典型地，采用的抗体将是抗-甲基苯丙胺的抗体，它也结合其它被认为是滥用药物的甲基苯丙胺类药物，包括克斯他司和设计师克斯他司类药物MBDB和MDEA。这可以是，例如，用甲基苯丙胺-牛IgG共轭物免疫小鼠而获得的单克隆抗-甲基苯丙胺的抗体例如可从East Coast Biological，USA(目录号DU300)获得并在实施例中采用。然而，可以采用其它抗体作为下面进一步讨论，这将是显而易见的。所述术语“甲基苯丙胺类药物”将被理解成包括甲基苯丙胺自身和用甲基苯丙胺分类为上瘾的苯乙胺-衍生兴奋剂的其它药物，包括克斯他司和其它设计师克斯他司类药物MBDB和MDEA，其可以是药物滥用的对象。关于这种药物的进一步信息可以从例如Annals of Clinical Biochemistry(1995)32卷，123-153页获得。相比于苯异丙胺，甲基苯丙胺具有被仲氨基取代的伯氨基并且这也是上面列出的和图1中所示的甲基苯丙胺类滥用药物的特征。因而所述术语“甲基苯丙胺类药物”将被理解成不包括苯异丙胺、3，4-亚甲二氧基苯异丙胺(MDA)和β-苯乙胺。也将它理解成不包括麻黄碱类、伪麻黄碱类、苯丙醇胺、苯丁胺和酪胺，也就是在图1中给出的结构。这个表不是穷举的，而仅说明了可以通过本专利技术的测定方法与甲基苯丙胺区别的苯乙胺类似物和其它希望被检测并可以分类为“甲基苯丙胺类药物”的相关滥用药物。更特别地是，这样一种测定能够检测甲基苯丙胺、克斯他司(MDMA)、MBDB和MDEA的全部并且表现出与样品中的浓度高达10,000ng/ml的(+)-或(-)-麻本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测液体样品中是否含有甲基苯丙胺类的一种或多种药物的方法，该方法包含：　　　　（ａ）将所述样品与（ｉ）伪麻黄碱经由其羟基连接到载体的伪麻黄碱／载体共轭物和（ｉｉ）能够与一种或多种甲基苯丙胺类药物和所述共轭物都结合的抗体相接触；和　　　　（ｂ）确定所述抗体对所述共轭物的结合是否被所述样品的存在所减弱，结合减弱指示所述样品含有甲基苯丙胺类药物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：AMT杰汉里，
申请(专利权)人：考扎特生物科学有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[英国]