本发明专利技术提供一种针对SARS‑CoV‑2的疫苗。本发明专利技术采用改造后的SARS‑CoV‑2的S蛋白，尤其是氨基酸序列如SEQ ID NO：2、如SEQ ID NO：3或者SEQ ID NO：4所示蛋白质用于制备疫苗制剂，具有较好的免疫原性，为治疗SARS‑CoV‑2引起的疾病提供了新的方案。
【技术实现步骤摘要】
一种针对SARS-CoV-2的疫苗
本专利技术涉及一种生物
，特别是涉及一种针对SARS-CoV-2的疫苗。
技术介绍
冠状病毒(coronavirus)隶属于套式病毒目(Nidovirales)的冠状病毒科(cirinaviridae)，根据基因组同源性，可将其分为4个属：α、β、γ、δ，其中β属又可分为4个系——a、b、c、d。冠状病毒可感染多种脊椎动物，包括人、鼠、猪、蝙蝠、猫、牛、鸡等。数十年来陆续发现了多种感染人类的冠状病毒，包括上世纪60年代分离自英国的HCoV-OC43、HCoV-229E，2002年在中国爆发的SARS-CoV，2004年出现于荷兰的HCoV-NL63，2005年分离自中国香港的HCoV-HKU1，2012年在中东爆发的MERS-CoV。这些病毒大多引起呼吸道疾病，其中SARS-CoV和MERS-CoV分别引发了2002-2003年的重症急性呼吸综合征和2012-2015年的中东呼吸综合征爆发性流行，死亡率分别达到10％和40％，是近年来较严重的公共卫生事件，引起了全球性的恐慌。SARS-CoV在2004年以后突然消失，目前暂无复苏流行的迹象。MERS-CoV的感染仍局限于中东地区，虽然在韩国造成过一定范围的流行，但并未造成全球性的持续性大流行。2019年底出现了一种传播能力极强的新型冠状病毒——SARS-CoV-2(2019-nCoV)，其感染后引起COVID-19，在2020年造成世界范围内的大流行。截止于2020年5月底，全球累计感染人数超过三百万，累计死亡人数超过35万。SARS-CoV-2与已知的SARS样冠状病毒同源性较高，同样归类于β属b系。其与源自蝙蝠的bat-SL-CoVZC45(MG772933.1)和bat-SL-CoVZXC21(MG772934.1)有88-89％的相似性，与不同来源的SARS-CoV毒株的同源性约为76-79％。此外，SARS-CoV-2感染细胞的主要细胞表面受体也与SARS-CoV一致，同样使用细胞表面的人血管紧张素转化酶(HumanAngiotensin-ConvertingEnzyme2，ACE2)。冠状病毒属于单股正链RNA(ssRNA)包膜病毒，病毒颗粒直径约60-220nm，基因组全长约30kb，是目前已知的拥有最大基因组的正链RNA病毒。其基因组可分为三个主要部分：ORF1a，ORF1b和结构蛋白区域，结构蛋白包括病毒表面刺突蛋白S(spikeprotein)，包膜蛋白E(Envelopeprotein)，膜蛋白M(Membraneprotein)，核壳蛋白N(nulceocapsidphosphorprotein)。其中S蛋白组成的同源三聚体形成病毒表面的冠状刺突，负责受体结合与膜融合，对于冠状病毒感染和入侵细胞起关键作用。S蛋白是一种典型的I型病毒融合蛋白，可分为S1亚基，S2亚基，跨膜区和膜内区。S1亚基位于N端，形成刺突头部结构，包含宿主细胞受体结合区(receptorbindingdomain，RBD)。S2亚基位于S1亚基的C端，由一条融合肽段与两个疏水螺旋重复区(HR1，HR2)组成，是S蛋白的融合中心。接种预防性疫苗是最有效的传染病防控手段，不过目前仍没有上市的人用冠状病毒疫苗。SARS-CoV康复病例分析研究表明，有效的免疫保护机制主要依赖于高水平的中和抗体反应。而在治疗SARS-CoV-2感染病例的多种尝试中，康复病人的血清提供的被动免疫可达到比较好的抗病毒治疗效果。因此开发基于体液免疫的SARS-CoV-2疫苗是最有效的防控手段。基于SARS-CoV和MERS-CoV的研究表明，S蛋白是冠状病毒的主要中和抗体识别区域，也是目前SARS-CoV疫苗、MERS-CoV疫苗和SARS-CoV-2疫苗的主要候选抗原。目前尚未报道有疫苗用于预防SARS-CoV-2的感染。
技术实现思路
鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种针对SARS-CoV-2的疫苗，用于解决现有技术中缺乏有效的SARS-CoV-2抗原制剂的问题。为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术一方面提供了一种分离的抗原肽，所述抗原肽为氨基酸序列如SEQIDNO：1-12任一所示多肽或其保守性变异多肽。抗原肽通过改造SARS-CoV-2中S蛋白获得，具体为S蛋白的N端和C端被截短不同长度，所述改造S蛋白包括宿主细胞受体结合区RBD。进一步地，所述改造S蛋白选自以下任一：RBD193、RBD194、RBD219、RBD220、RBD237、RBD258、RBD263、RBD290、RBD301、RBD333、RBD343、RBD386。优选地，所述抗原肽的氨基酸序列如SEQIDNO：2、SEQIDNO：3或者SEQIDNO：4所示。本领域技术人员已知，本专利技术所述的肽可以在氨基酸序列之间的一个或多个位置进行翻译后修饰。专利技术还提供上述抗原肽的类似物。这些类似物与天然的肽差别可以是氨基酸序列上的差异，也可以是不影响序列的修饰形式上的差异，或者兼而有之。这些肽包括天然或诱导的遗传变异体。诱导变异体可以通过各种技术得到，如通过辐射或暴露于诱变剂而产生随机诱变，还可通过定点诱变法或其他已知分子生物学的技术。类似物还包括具有不同于天然L-氨基酸的残基(如D-氨基酸)的类似物，以及具有非天然存在的或合成的氨基酸(如β、γ-氨基酸)的类似物。应理解，本专利技术的肽并不限于上述例举的代表性的肽。修饰(通常不改变一级结构)形式包括：体内或体外的肽的化学衍生形式如乙酰化或羧基化。修饰还包括糖基化，如那些在肽的合成和加工中或进一步加工步骤中进行糖基化修饰而产生的肽。这种修饰可以通过将肽暴露于进行糖基化的酶(如哺乳动物的糖基化酶或去糖基化酶)而完成。修饰形式还包括具有磷酸化氨基酸残基(如磷酸酪氨酸，磷酸丝氨酸，磷酸苏氨酸)的序列。还包括被修饰从而提高了其抗蛋白水解性能或优化了溶解性能的肽。本专利技术的另一方面提供了分离的多核苷酸，所述多核苷酸编码如上所述的抗原肽。所述核酸可以是cDNA。所述核酸分子可以主要由编码本专利技术所述抗原肽的核酸序列组成，或可以仅编码本专利技术所述的肽。此类核酸分子可以用本领域已知的方法合成。由于遗传密码的简并性，本领域技术人员应理解，不同核酸序列的核酸分子可以编码相同的氨基酸序列。于一实施例中，所述RBD193蛋白序列如SEQIDNO：1所示，其DNA编码序列如SEQIDNO：13所示。于一实施例中，所述RBD194蛋白序列如SEQIDNO：2所示，其DNA编码序列如SEQIDNO：14所示。于一实施例中，所述RBD219蛋白序列如SEQIDNO：3所示，其DNA编码序列如SEQIDNO：15、SEQIDNO：16、SEQIDNO：17或SEQIDNO：18所示。于一实施例中，所述RBD220蛋白序列如SEQIDNO：4所示，其DNA编码序列如SEQIDNO：19、SEQIDNO：20、SEQIDNO：21或SEQIDNO：22所本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种分离的抗原肽，其特征在于，所述抗原肽为氨基酸序列如SEQ ID NO：1-12任一所示的多肽或其保守性变异多肽。/n
【技术特征摘要】
1.一种分离的抗原肽，其特征在于，所述抗原肽为氨基酸序列如SEQIDNO：1-12任一所示的多肽或其保守性变异多肽。
2.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码如权利要求1所述的抗原肽。
3.如权利要求2所述的分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸中，编码所述抗原肽的多核苷酸的碱基序列如SEQIDNO：13-30任一所示。
4.一种表达载体，含有如权利要求2或3所述的多核苷酸。
5.如权利要求4所述表达载体，其特征在于，所述载体选自：pPICZαA，pPICZαB，pPICZαC，pPIC9K，pGAPZαA，pGAPZαB，pGAPZαC，pPIC6αA，pPIC6αB，pPIC6αC或pYes2/CTα-factor。
6.一种表达系统，包括生物工程菌，所述生物工程菌中含有或者整合有如权利要求4或5所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：傅文彬，丁珊，高兴，张千里，沈琼，
申请(专利权)人：重庆博唯佰泰生物制药有限公司，上海博唯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆;50
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