正向和反向ABO血型的同步测定制造技术

本发明专利技术公开了一种在单柱中对血液样品进行抗体测试的方法，包括：（ａ）混合血液样品与带有第一抗原的试剂红血细胞和带有第二抗原的试剂红血细胞，其中所述红血细胞群之一被染色；（ｂ）使混合物凝集；（ｃ）对混合物在单柱中进行目测或自动计算机化图象分析；和（ｄ）检测和鉴别抗体。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及血型测定的领域，尤其涉及正向和反向血型测定的同步测定。
技术介绍
血型血清学要求在涉及病人输血或器官移植之前，需要测定血液捐献者和病人受体间的血细胞相容性。血细胞相容性是由病人血清中的抗体与捐献者血细胞上的抗原不发生免疫反应来确定的。许多不同的血型抗原被发现存在于每个个体的红血细胞的表面上。这些抗原，遗传基因的产物，以结合体存在，除了同一对双胞胎外，所有个体间的这些结合体似乎是独特的。血型检测一般是通过检测红细胞来确定哪种抗原存在，哪种抗原不存在的过程，通常采用被检测抗原的抗体进行检测。另外，当一个人在他的或她的红血细胞上没有特定的红细胞抗原时，他的或她的血清可能含有该抗原的抗体。抗体是否存在于血清中决定于人体的免疫系统以前是否被该特定抗原或与该抗原非常类似的物质激发并产生过应答反应。例如，红血细胞是A型的人，即红细胞上具有“A”抗原，他的或她的血清中有抗B抗体。因此，如果此人被输入B型血液，就会发生免疫反应而引起严重的临床后果。作为另外一方面的考虑，应该注意到人体经常与花粉、食物、细菌和病毒中的抗原接触。这些“天然”抗原中的一些抗原明显地与于人的血型抗原相类似，以致于它们能刺激几乎每一个接触的人来产生抗体。因此，一定的抗体应该存在于红细胞中缺少互补抗原的任何人的血清中。对于ABO系统，这确实如此，因此，经常对病人/捐献者的血清进行第二种确定试验。该检测血清中ABO血型系统中的预期抗体试验被称作“反向”血型检测。ABO血型系统的抗体通常是免疫球蛋白M(IgM)。这些抗体的每个分子具有十个抗原结合位点。该IgM抗体足够大以致跨越了红血细胞之间的距离，因此当对其进行离心时，细胞将以“细胞-抗体-细胞-抗体”的网格形式结合在一起并将保持凝集状态。例如，如果抗-A加到血型A或血型AB细胞中并离心混合物，当重新悬浮时，细胞将保持凝集的形式。用同样的抗体，血型O和血型B细胞将以分离的细胞形式悬浮。由一种抗体，诸如IgM抗体引起的凝集，被称作直接凝集。输血医学中，由于上述原因，最常进行的试验是测定ABO血型。现有技术是分别测定红细胞上的抗原A、B，有时是A+B一起测定(正向型)；和确定(交叉检测)检测血清或血浆中的抗-A和抗-B抗体(反向型)。因此，最少采用4次试验，但通常采用7次分试验(样品红细胞上的抗原A、B、A+B；采用A1、A2、B、O试剂红细胞，血清/血浆样品中的抗-A和抗-B)。从这些测型操作的每一个试验中得到(正向和反向类型)的结果是一致的。因此，仅在美国，血液中心每年大约要进行104000000次测定血型的试验。自20世纪初期以来，称作“兰斯泰訥”方法(Landsteiner，science 73405(1931))的普通方法与Ashby(J.Exp.Med.29267(1919))和Coombs(Brit.J.Exp.Pathol.26255(1945))的方法的结合是将病人的红血细胞加到含有血型抗体(如抗-A或抗-B)的标准实验试管中，混合后使得发生抗体/抗原结合反应，然后离心。如果所测定的抗原存在，将发生抗体/抗原的结合并导致病人红血细胞的凝集。用手摇动试管来移开“结块”的细胞离心后在试管底部产生的块结。然后进行主观判断，看移开的细胞是否是“结块的”，并且看“结块”的程度。20世纪中叶，进行了许多努力来简化所述技术以减小试验的主观性和降低错误率。人们认识到某种程度上，相容性试验结果的持久性记录可通过利用可湿性的，即非吸收性的或有些情况下可吸收性的、至少一部分表面积上载有必需的免疫学试剂的试验载玻片或试验板来获得。在这方面，专利号为2770572、2850430、3074853、3272319、3424558、3502437和366642的美国专利以及欧洲专利申请#0104881-A2描述了这种试验板和相关仪器的选择实例。在微板上进行血型鉴定的优点包括可简单操作大量的样品，通过仪器和计算机的内部处理进行结果的搜集和处理，来对凝集反应进行客观的测定。一些带有计算机控制的自动仪器和高通过量的分光光度计读取器的昂贵的和专用的系统被引进到血库的自动操作系统中(Chung，等.，Transfusion33384(1992))。商品化的血型测定试剂盒中引进了在填充了凝胶形试剂的特殊微试管中进行红细胞抗原与抗体反应的改进检测方法。(Lapierre，等.，Transfusion30109(1990))。为了克服以血细胞凝集反应作为血型测定终点的方法中存在的问题而使用固相技术已由Scott论述过了(Transfusion Med.Rev.560(1991))。最近，Growe等(Transfusion Med.Rev.1044(1996))报导了RBC抗原自动测型的完成和应用和不但适用于血液中心而且也适用于医院输血实验室的血清抗体的筛选方法。至少七种不同的具有特定测型试剂的孔被用于这些方法来测定样品的血型。用于大规模血型的测定和单个试管/孔中只有一种抗原或抗体型的测定的所有方法主要是应用了基于凝集反应的方法。专利号为4550017和4748129的美国专利中报导了使用荧光标记试剂进行的分离辨别反应已被用于血型的鉴别。目前的方法是利用红细胞的凝集反应作为终点。如上所述，这一反应是在试管中、载玻片表面上、微板中和柱凝集反应试验中完成的。后面的两种方法可手工或通过自动仪器完成。所有的方法都需要从细胞中分离血清(或血浆)来进行正向和反向型测定。因此，建立一种在单一试验中进行正向和反向型测定的方法是有意义的，而更好地是，在试验以前不需要分离血液样品。这种方法将使得一名血库技术人员同时测定红细胞上的血型抗原和血清中具有临床意义的抗体成为可能。这种方法将大大减少所进行的个体试验数目，即每年减少了在血液中心进行的大约5千万至1亿次试验，明显地节省了时间和费用。我们建立了能够区别样品红细胞(RBC)和试剂RBC的技术，因此它们的凝集反应是截然不同的。另外，本文公开的新方法使用了标记的测型抗体试剂来识别它们的反应和样品中预先形成的抗体。本专利技术的试验不需要分离血液样品就能完成，因此可采用全血(WB)来完成。本文公开的试验可在自动仪器上使用，所得的进一步的优点是不需要从血清中分离细胞。而且，正向和反向试验的同时检测减少了分型和定型(正向和反向试验)所需的试验次数。
技术实现思路
在本专利技术的荧光标记的技术方案中的正向试验中，单克隆抗体被标记。而反向试验中，试剂红细胞被标记。更加优越的是能够识别(目测或通过自动读取器)混合的红细胞群。例如，反向试验可以在1次试验中进行而不需要2次试验，导致试验次数的减少。进一步应用抗体筛选，其中采用2个细胞在一个孔中一起试验来代替2次单独试验，减少了试验的次数。对视觉系统的细胞染色被应用到现有的血型试验平板中，其中采用了试管、微板、载玻片和柱凝集技术(CAT)，以及试验平板如VitrosTM250、750或950(Ortho-Clinical Diagnostics，Inc.，Rochester，NY)玻片方法，Vyas等在专利号为5776711的美国专利中公开了一种“同步”ABO和RH(D)血液测型或抗体筛选方法。然而，为了减少测定ABO血型的试验次数而进行了类似的尝试后，本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种在单柱中对血液样品进行抗体测试的方法，包括：　　　　（ａ）混合血液样品与带有第一抗原的试剂红血细胞和带有第二抗原的试剂红血细胞，其中所述红血细胞群之一被染色；　　　　（ｂ）使混合物凝集；　　　　（ｃ）对混合物在单柱中进行目测或自动计算机化图象分析；和　　　　（ｄ）检测和鉴别抗体。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：TJ默科利诺，KJ雷斯，
申请(专利权)人：奥索临床诊断有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]