患者血流或其它生物学样品中的目标抗体的存在和数量可以充当重要的临床或其它分析或诊断工具。开发了ＥＬＩＳＡ方法，和用于这类测定法的试剂盒，以及抗独特型抗体和生产它们的杂交瘤，以检测来自例如动物模型和人类患者的生物学样品中的抗体水平。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及基于使用抗独特型抗体的高通量测定法，用于检测针对具有小胞外域的跨膜抗原的抗体，诸如用于量化血清中的人源化抗CD20抗体进行临床研究。
技术介绍
跨膜蛋白延伸穿过脂双层，它们部分蛋白体在两侧，具有疏水区和亲水区。通常，跨膜蛋白具有其胞质域和胞外域，由多肽链的跨膜区段隔开。跨膜区段接触脂双层的疏水环境且主要由具有非极性侧链的氨基酸残基构成。大部分跨膜蛋白糖基化。寡糖链通常存在于胞外域中。另外，细胞溶胶的还原性环境阻止胞质侧膜上半胱氨酸残基之间链内(和链间)二硫键(S-S)的形成。这些二硫键确实在胞外侧形成，例如在N-末端结构域和胞外域之间。众所周知跨膜蛋白难以结晶进行X-射线结构研究。折叠后的三维结构对于这些蛋白质的分离形式非常不确定。因而，在使用完整跨膜蛋白作为靶标来分离在体外将会结合它的分子的尝试中这些特征提出了问题。G蛋白偶联受体(GPCR)是在细胞信号转导过程中发挥重要作用的跨膜蛋白超家族。GPCR介导对于极其多种信号分子的细胞反应，包括激素、神经递质和局部介质。信号分子的结构和功能有所不同，包括蛋白质和小肽，以及氨基酸和脂肪酸衍生物。见Watson和Arkinstall的综述，The G-ProteinLinked Receptor Facts Book(Academic Press，Harcourt Brace & Company，Publishers，London，San Diego，New York1994)；Proudfoot等人，NatureReview Immunology，2106-115(2002)；和Ji等人，J.Biol.Chem.，27317299-17302(1998)。例如，最近发现激素松驰素的受体(LGR7和LGR8)为G蛋白偶联受体(Hsu等人，Science，295671-674(2002))。松驰素是在妊娠期间对于生殖和其它组织的生长和重塑重要的激素。Hsu等人证明两种孤儿异源三聚体鸟嘌呤核苷酸结合蛋白(G蛋白)受体，LGR7和LGR8，能够通过腺苷3′，5′-一磷酸(cAMP)依赖性途径介导松驰素的作用，所述途径不同于结构相关的胰岛素和胰岛素样生长因子的途径。这些松驰素受体暗示在生殖、脑、肾、心血管和其它功能中发挥作用。尽管结合它们的信号分子在化学和功能上是多样的，但所有GPCR都共有结构相似性，即多肽链来回穿过脂双层多次，例如七次，形成由三个胞外环和三个胞内环连接的七个跨膜结构域。CCR5和CXCR4都是作为GRCP超家族成员的趋化因子受体。CCR5是几种CC趋化因子诸如MIP-1α(也称作GOS19、LD78、pAT464基因产物、TY5(鼠)和SISα(鼠))、MIP-1β(也称作Act-2、G-26、pAT744基因产物、H-400(鼠)和hSISγ(鼠))和RANTES(激活后受调控，正常T细胞表达和分泌，或CCL5)的受体(Cocchi等人，Science，2701811-1815(1995)和Mellado等人，Annu.Rev.Immunol.，19397-421(2001))。CXCR4(以前也称作LESTR或融合素)是具有C-X-C基序的人趋化因子受体，且在白细胞中高度表达(Loetscher等人，J.Biol.Chem.，269232-237(1994))。淋巴细胞化学引诱物基质细胞衍生因子-1(或SDF-1)或CXCL12是CXCR4的配体(Bleul等人，Nature，382829-833(1996))。CXCR4充当HIV-1的共同受体(Feng，Science，272872-877(1996))。其表达还与癌症相关，包括前列腺癌(Taichman等人，Cancer Res.，621832-1837(2002))和乳腺癌转移(Muller等人，Nature，41050-56(2001)和Moore，Bioassays，23674-676(2001))。由这些趋化因子受体生成的抗体随后也能用于预防和/或治疗HIV感染、癌症和其它与异常趋化因子活性相关的疾病。针对CCR5和CXCR4的人单克隆单链抗体分别可用于抑制外周血单核细胞的HIV感染和乳腺癌细胞的趋化性。人CCR5的氨基酸序列具有七个跨膜结构域，由作为胞外环的环2、4和6及作为胞内环的环1、3和5连接。在Blanpain等人，J.Biol.Chem.，27434719-34727(1999)中提供了人CCR5的二级结构模型。除了CCR5和CXCR4之外，趋化因子受体或趋化因子受体样孤儿受体的例子还包括但不限于CCR1、CCR2b、CCR3、CCR4、CCR8、CXCR1、CXCR2、CXCR3、CX3CR1、STRL33/BONZO和GPR15/BOB(Berger等人，AIDS，11，Suppl.aS3-S16(1997)和Dimitrov，Cell，91721-730(1997))。每一种或一组这些HIV共同受体能够介导不同HIV病毒株侵入宿主细胞。趋化因子超家族包括两个主要分支α-趋化因子(或CXC趋化因子)和β-趋化因子(CC趋化因子)。α-趋化因子分支包括蛋白质诸如IL-8、嗜中性粒细胞激活肽-2(NAP-2)、黑素瘤生长刺激性活性(MGSA/gro或GROA)和ENA-78，每一种都主要对嗜中性粒细胞具有吸引性和激活性作用。β-趋化因子分支的成员影响其它细胞类型诸如单核细胞、淋巴细胞、嗜碱细胞和嗜曙红细胞(Oppenheim等人，Annu.Rev.Immunol.，9617-648(1991)；Baggiolini等人，Adv.Imunol.，5597-179(1994)；Miller和Krangel，Crit.Rev.Immunol.，1217-46(1992)；Jose等人，J.Exp.Med.，179881-118(1994)；Ponath等人，J.Clin.Invest.，97604-612(1996))，且包括蛋白质诸如单核细胞趋化蛋白质1-4(MCP-1、MCP-2、MCP-3和MCP-4)、RANTES和巨噬细胞炎性蛋白(MIP-1α、MIP-1β)。最近，鉴定了一类新的膜结合趋化因子，命名为CX3C趋化因子(Bazan等人，Nature，385640-644(1997))。趋化因子能介导一组对白细胞的促炎作用，诸如触发趋化作用、脱粒作用、脂质介质的合成和整联蛋白激活(Oppenheim等人，Annu.Rev.Immunol.，9617-648(1991)；Baggiolini等人，Adv.Imunol.，5597-179(1994)；Miller和Krangel，Crit.Rev.Immunol.，1217-46(1992))。最近，证明某些β-趋化因子在体外抑制人T细胞系的HIV-1感染(Cocchi等人，Science，2701811-1815(1995))。趋化因子结合七次跨膜(7TMS)G蛋白偶联受体(Murphy，Annu.Rev.Immunol.，12593-633(1994))。一些已知的CC或β-趋化因子受体包括结合MIP-1α和RANTES的CCR1(Neote等人，Cell，72415-本文档来自技高网...
【技术保护点】
酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）方法，用于特异性检测生物学样品中结合细胞表面多跨膜蛋白的目标抗体，所述细胞表面多跨膜蛋白包含少于约７５个氨基酸的间插胞外域，该方法包括：（ａ）将生物学样品与捕捉剂接触并温育，其中所述捕捉剂是结合目标抗体独特型但不结合样品中结合所述蛋白质的至少一种其它抗体独特型的抗独特型抗体，从而结合样品中存在的任何目标抗体，并（ｂ）将样品，及由此将任何结合的目标抗体，与结合目标抗体的可检测抗体相接触，并利用对于可检测抗体的检测手段测量结合捕捉剂的任何目标抗体的水平。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：阿南丘恩撒拉派，YJG孟，洪圭熙，
申请(专利权)人：健泰科生物技术公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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