人类抗-KIR抗体制造技术

描述了用于调节受试者中免疫反应的组合物和方法。更特别地，描述了调节哺乳动物受试者中ＮＫ细胞活性并允许增强ＮＫ细胞毒性的人类抗体，以及具有与人类单克隆抗体１－７Ｆ９或１４Ｆ１的那些相似的抗原结合特性的抗体。还描述了该抗体的片段和衍生物，以及含有该抗体的药物组合物和它们的用途，尤其用于治疗中，以增加受试者中ＮＫ细胞活性或细胞毒性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及人类抗体，以及其片段和衍生物，其与存在于NK细胞表面上的两种或更多种抑制性KIR受体交叉反应和/或阻断它们，并且增强哺乳动物受试者或生物样品中NK细胞细胞毒性。本专利技术还涉及制备该抗体、片段、变体和衍生物的方法；含有该抗体的药物组合物；以及该分子及组合物的用途，尤其在治疗中的用途，以增加受试者中NK细胞活性或细胞毒性。
技术介绍
自然杀伤(NK)细胞是淋巴细胞的一个亚群，涉及免疫和宿主免疫监视系统。NK细胞是在骨髓中从淋巴祖细胞发育的单核细胞，并且形态学特征和生物学特性典型地包括簇决定子(CDs)CD16，CD56，和/或CD57的表达；细胞表面上α/β或γ/δTCR复合物的缺乏；结合并杀伤未能表达“自我”主要组织相容性复合体(MHC)/人白细胞抗原(HLA)蛋白质的靶细胞的能力；和杀伤表达活化NK受体的配体的肿瘤细胞或其它患病细胞的能力。NK细胞的特征在于其结合并杀伤几种类型的肿瘤细胞系而不需要预先免疫或活化的能力。NK细胞也能释放对免疫系统产生调节作用的可溶性蛋白质和细胞因子；而且能经受多轮细胞分裂并产生具有与母细胞相似生物学特性的子细胞。在通过干扰素和/或细胞因子的活化后，通过需要在NK细胞和靶细胞之间直接的、物理接触的机理，NK细胞介导肿瘤细胞和由细胞内病原体感染的细胞的裂解。靶细胞的裂解包括细胞毒性颗粒从NK细胞释放到结合靶标的表面上，以及效应物蛋白例如穿孔素和粒酶B上，穿孔素和粒酶穿透靶标质膜并诱导细胞凋亡或程序化细胞死亡。正常的健康细胞被保护免于被NK细胞裂解。基于它们的生物学特性，在本领域已经提议了不同的治疗和疫苗策略，它们依靠NK细胞的调节。然而，NK细胞活性通过包括刺激和抑制信号二者的复杂机制来调节。简要地，NK细胞的裂解活性是通过不同的细胞表面受体来调节的，该受体在与靶细胞上的配体相互作用后，转导正或负细胞内信号。通过这些受体传输的正和负信号之间的平衡，决定靶细胞是否被NK细胞裂解(杀伤)。NK细胞刺激性信号可以通过自然细胞毒性受体(NCR)例如NKp30、NKp44和NKp46；以及NKG2C受体、NKG2D受体、某些活化杀伤免疫球蛋白样受体(KIRs)和其他活化NK受体进行介导(Lanier，Annual Review of Immunology 2005；23225-74)。NK细胞抑制性信号可以通过受体象Ly49，CD94/NKG2A，以及某些抑制性KIRs(其识别主要组织相容性复合体(MHC)I类分子)进行介导(Krre等，Nature 1986；319675-8；hlén等，Science 1989；246666-8)。这些抑制性受体结合存在于其他细胞上的MHC I类分子(包括HLA I类)的多态性决定簇并抑制NK细胞介导的裂解。KIRs，有时也被称作杀伤抑制性受体，已经在人类和非人灵长类中进行表征，并且是存在于某些淋巴细胞亚类，包括NK细胞和一些T细胞上的多态性1型跨膜分子。KIRs与MHC 1类分子的α1和2域中的决定簇相互作用，并且如上所述，对NK细胞，独特的KIRs为刺激性或抑制性。对KIRs的命名是基于细胞外域的数目(KIR2D和KIR3D分别具有两个和三个细胞外免疫球蛋白域)和胞质尾区是长(KIR2DL或KIR3DL)或短(KIR2DS或KIR3DS)。在存在于单一个体中的NK群体中，所给的KIR的存在或缺少从一个NK细胞到另一个是变化的。在人类中，也存在相对高水平的KIR基因多态性，一些KIR等位基因存在于一些，但不是所有的个体中。在NK细胞上的KIR基因的表达是随机调节的，意思是在所给的个体中，根据个体的基因型，所给的淋巴细胞可以表达一个、两个或更多个不同的KIRs。单一个体的NK细胞典型地表达不同的KIRs组合，为全套NK细胞提供了对MHCI类分子的不同特异性。当结合到合适的配体时，某些KIR基因产物引起淋巴细胞活性的刺激。活化的KIRs全部有带电的跨膜残基的短胞质尾区，其与具有免疫受体基于酪氨酸的活化基序(Motifs)(ITAMs)的衔接分子结合，ITAMs转导刺激性信号到NK细胞。相反，抑制性KIRs具有包含免疫受体基于酪氨酸的抑制性基序(ITIM)的长胞质尾区，在他们的MHC I类配体结合时，就转导抑制信号到NK细胞。已知的抑制性KIRs包括KIR2DL和KIR3DL亚家族成员。有两个免疫球蛋白域的(KIR2DL)识别HLA-C同种异型KIR2DL2(原来叫做p58.2)和密切相关的等位基因产物KIR2DL3都识别“1群”HLA-C同种异型(包括HLA-Cw1、-3、-7和-8)，而KIR2DL1(p58.1)识别“2群”HLA-C同种异型(例如HLA-Cw2、-4、-5和-6)。KIR2DL1的识别是通过在HLA-C等位基因的第80位存在赖氨酸残基支配的。KIR2DL2和KIR2DL3识别是通过在HLA-C第80位存在天冬酰胺残基支配的。重要地，绝大多数的HLA-C等位基因在第80位有天冬酰胺或赖氨酸残基。因此，KIR2DL1、-2和-3共同地识别基本上所有的在人类中发现的HLA-C同种异型。一个KIR带有三个免疫球蛋白域，KIR3DL1(p70)识别与HLA-Bw4等位基因共享的一个表位。最后，KIR3DL2(p140)，带有三个免疫球蛋白域分子的同型二聚体，识别HLA-A3和-A11。虽然多种抑制性KIRs和/或其它MHC I类特异的抑制性受体(Moretta等，Eur J Immunogenet.1997；24(6)455-68；Valiante等，Immunol Rev 1997；155155-64；Lanier，Annu Rev Immunol 1998；16359-93)可以通过NK细胞共表达，在任何所给个体的NK全部组成部分中，有仅仅表达单个KIR的细胞，并且因而仅被特异的MHC I类等位基因(或属于同群MHC I类同种异型的等位基因)所抑制。人类MHC I类分子通常被称为人组织相容性抗原(HLA)I类。为相对于他们的靶标不匹配的KIR配体，也就是，表达不识别宿主任何HLA分子KIRs的NK细胞种群或克隆，在白血病患者中在同种异体骨髓移植后已经显示介导强力、挽救生命的抗肿瘤反应(Ruggeri等，Science 2002，2952097-2100)。人们认为潜在的机理是HLA不匹配的造血移植导致表达KIR的供体来源的NK细胞的扩张，其在接受体中不识别任何HLA配体，并且因而不通过KIR进行抑制。这些同种异体NK克隆发挥强有力地抗肿瘤活性。在诊断为急性骨髓性白血病(AML)，并用KIR-MHC不匹配的单倍同一性的移植治疗的患者中，该反应非常强烈。通过药理学治疗患者再现该作用的一个途径是施用阻断KIR/HLA相互作用的试剂以活化患者的内源性NK细胞。对KIR2DL1特异的某些单克隆抗体已经显示阻断KIR2DL1与“2群”HLA-C同种异型，例如HLA-Cw4的相互作用(Moretta等，J ExpMed 1993；178597-604)，并且促进了NK介导的表达那些HLA-C同种异型的靶细胞的裂解。针对KIR2DL2/3，阻断KIR2DL2/3与HLA-Cw3相互作用的单克隆抗体或类似的同种异型已本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的人类抗体，其与ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２和ＫＩＲ２ＤＬ３中的每一个结合，但是不结合ＫＩＲ２ＤＳ４。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：A莫雷塔，M德拉齐萨，P安德烈，L戈捷，F罗马格涅，PANR瓦格特曼，I斯文德森，S扎恩，A斯温森，M斯奥夫森，S贝格佩德凯尔，K谢尔高，P施佩，
申请(专利权)人：诺和诺德公司，伊纳特医药公司，热纳亚大学，
类型：发明
国别省市：DK[丹麦]