公开了特征在于检测ＲＯＢＯ１蛋白的诊断癌症的方法。另外，公开了包含作为有效成分的结合ＲＯＢＯ１的抗体的药物组合物，细胞生长抑制剂和抗癌剂。进一步，公开了通过将表达ＲＯＢＯ１的细胞与结合ＲＯＢＯ１的抗体接触，而在表达ＲＯＢＯ１的细胞中诱导细胞毒性的方法以及抑制表达ＲＯＢＯ１的细胞生长的方法。此外，公开了通过检测ＲＯＢＯ１蛋白而用于监测肝炎恶化的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】交叉引用本专利技术涉及用于诊断和治疗癌症的方法和用于监测肝炎恶化的方法，以及涉及细胞生长抑制剂和抗癌剂。
技术介绍
在果蝇的遗传筛选研究中，ROBO1已鉴定为调节轴突中线交叉的分子，并且在后来的研究中已报道作为用于裂隙蛋白(Slit protein)的受体而起作用(Kidd等，Cell，92，205-215，1998，Wang等，Cell，96，771-784，1999，Kidd等，Cell，96，785-794，1999，Brose等，96，795-806，1999)。此外，关于ROBO1和癌症之间的关系，在肺癌中，其中人ROBO1基因所在的染色体区域3p12为高度缺陷型的，而在乳腺癌和肾癌中，表达受到ROBO1启动子区域甲基化等等的抑制，显示肿瘤抑制基因可能性(Dallol等，Oncogene，21，3020-3028，2000)。实际上，气管上皮细胞增生已通过缺失位于ROBO1N-末端的第一个免疫球蛋白区域而在小鼠中观察到，其类似于肺癌患者中确定的ROBO1基因的最小缺陷(Xian J等，PNAS，98，15062-15066，2001)。此外，还报道ROBO1在癌新血管中表达，以及，其，在癌细胞侧面上作为ROBO1的配体的Slit2提高的表达诱导癌的新血管形成，逆向指导癌的生长(Wang等，Cancer Cell，4，19-29，2003)。其间，根据作为ROBO1配体的Slit2基因表达也在许多癌症类型中受甲基化等等抑制的事实，以及通过强迫Slit2表达或通过提高Slit2在肺癌细胞、乳腺癌细胞和大肠癌细胞中观察到生长抑制作用以及凋亡诱导作用的事实，Slit2，其为ROBO1的配体，也认为是肿瘤抑制基因(Dallol等，Cancer Research，62，5874-5880，2002，Dallol等，CancerResearch，63，1054-1058，2003)。然而，在该报告中，实际上Slit2的细胞生长抑制作用通过哪个受体发生并不清楚，使得ROBO1和癌症之间的关系也不完全清楚。在作为日本死亡主要原因的癌症死亡当中，原发肝细胞癌，2001年在男性中占据第三位(13％)而在女性中占据第四位(9.0％)，是一种具有预后不良的癌症类型(摘自″Population Dynamics Statistics″，Statistics and Information Department，Minster′s Secretariat，Ministry ofHealth，Labour和Welfare)。由于病毒感染慢性患者每年都在增长以及其中许多病例引起肝硬化，和随后引起肝细胞癌，对在从肝硬化至肝细胞癌的阶段早期的诊断方法以及对肝细胞癌的治疗存在非常强的需求，并且认为没有突破性的解决方法，则在未来的10至15年中死亡数量将有递增的趋势。关于肝细胞癌诊断方法，在基于如GOP/GTP、碱性磷酸酶、白蛋白等等或肿瘤标志物AFP(α-甲胎蛋白)的血清值生化数据的综合评价以及诊断图象，如有必要，通过针刺活检取得少量组织碎片后，基于病理判断证实该诊断。目前，肿瘤标志物尤其用于肝细胞癌的诊断，并且虽然其中最常用的甲胎蛋白(AFP)的阳性率对肝细胞癌患者为6至7％，其有时对慢性肝病患者或怀孕女性也是阳性的。此外，虽然肝癌肿瘤标志物PIVKA-II的阳性率稍低于50％，对肝细胞癌的特异性认为高于AFP，使得目前实际上主要为这两种检查。不论那种情况，由于假阳性或双阴性情况的存在，期待具有高特异性的肿瘤标志物的存在。通过针刺活检收集的样品的组织学检查为证实肝脏疾病诊断的重要检查。尤其，由于所收集的量可能是有限的，需要有更明确的诊断技术。期待开发针对肝癌-特异性表达的抗原的抗体，如允许不只是鉴定病理特征，而且从非-癌组织早期鉴定肝细胞癌。在肝脏疾病诊断和监测的现状中转变至炎症、纤维化以及恶性转化经由多种标志物的检查和活检的检查而诊断。在许多肝癌患者中，从病毒感染转变至肝炎、慢性肝炎、肝硬化并且随后至肝癌。因此，允许进行肝脏疾病诊断和监测的方法的发展不仅在保健经济中，而且在减轻患者负担和获得准确的医疗指导中是有用的。关于肝细胞癌的治疗，许多医疗设施主要集中在三种治疗上外科切除，经导管动脉栓塞术治疗和经皮乙醇注射治疗。各种方法都有利弊，并且即使选择经导管动脉栓塞术治疗，其具有相对广泛的应用范围和存活率的优点，目前认为完全治愈的比率在10％的水平，使得这种情况下对新治疗有着巨大需求。虽然对肝细胞癌还没有临床场所的应用实例，在乳腺癌或淋巴瘤等等中，经由针对癌特异性肿瘤抗原的单克隆抗体的靶向治疗，响应速率已通过不同于化疗剂常规治疗的作用机理而得到提高。关于这些抗体药物的作用机理，利用经效应细胞的抗体依赖的细胞毒性(ADCC)或经补体的补体-依赖的细胞毒性(CDC)，以及通过该抗体本身功能的激动剂作用，或该抗体的中和能力。目前，由于分子治疗已在临床场所中开始应用，认为在将来对应用这些分子治疗以及针对靶向肿瘤特异性表达的分子的肝癌细胞的抗体药物治疗的期望是巨大的。下列为相关的现有技术文献WO99/20764；WO98/48051；WO01/46697；WO03/29488；WO01/00828；WO01/57207；WO01/92581；WO02/04514；WO02/14500；WO02/29103。概要本专利技术的目的为提供用于诊断和治疗癌症的新方法，以及新的细胞生长抑制剂和抗癌剂，并且此外提供用于诊断和监测肝脏疾病的方法。本专利技术人发现ROBO1在癌细胞如肝细胞癌、肺癌、乳腺癌、子宫癌、胃癌、脑肿瘤、大肠癌等等中高表达。此外，他们发现当测量抗-ROBO1抗体的补体-依赖的细胞毒性(CDC)时，该抗-ROBO1抗体具有针对表达ROBO1的细胞的CDC活性。其间，他们发现血液中ROBO1的浓度随着肝脏疾病的恶化而提高。根据上述观察，本专利技术人发现抗-ROBO1抗体在ROBO1的表达提高的癌症，首先为肝细胞癌的诊断、预防和治疗中的有效性，并且此外发现用于诊断和监测肝脏疾病的方法，而完成本专利技术。本专利技术提供了以ROBO1蛋白的检测为特征的癌症诊断方法。在本专利技术的方法中，优选检测ROBO1蛋白的胞外区。此外，本专利技术的方法优选利用识别ROBO1蛋白的抗体进行。优选在本专利技术的中，检测血液、血清或血浆中的ROBO1蛋白或分离自细胞的ROBO1蛋白。在另一个方面，本专利技术提供癌症的诊断方法，包括下列步骤(a)从受试者收集样品的步骤和(b)检测包含在所收集样品中的ROBO1蛋白的步骤。在另一个方面，本专利技术提供用于诊断癌症的试剂盒，包含结合ROBO1蛋白的抗体。优选，癌症为肝细胞癌。此外优选在本专利技术的试剂盒中，抗体为结合ROBO1蛋白胞外区的抗体。在另一个方面，本专利技术提供包含作为有效成分的结合ROBO1的抗体的药物组合物。此外，本专利技术提供包含作为有效成分的结合ROBO1的抗体的细胞生长抑制剂。此外，本专利技术提供包含作为有效成分的结合ROBO1的抗体的抗癌剂。优选，结合ROBO1的抗体为具有细胞毒性的抗体。此外，优选癌症为肝细胞癌。此外在另一个方面，本专利技术提供用于治疗由异常的细胞生长引起的疾病的方法，包括将包含作为有效成分的结合ROBO1的抗体的药物组合物施予需本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种癌症诊断方法，其特征是检测ＲＯＢＯ１蛋白的。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：油谷浩幸，笔宝义隆，渡边亮，深山正久，伊藤行夫，新井正广，伊藤浩孝，大友俊彦，舟桥真一，木下恭子，
申请(专利权)人：中外制药株式会社，油谷浩幸，株式会社英仙蛋白质科学，
类型：发明
国别省市：JP[日本]
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