本发明专利技术涉及检测患者中肝病的存在和／或严重程度的方法，包括测量分离样品中的ＴＩＭＰ－１（金属蛋白酶Ｉ的组织抑制剂）、Ａ２Ｍ（α－２－巨球蛋白）、ＰＬＴ（血小板数量）、ＰＩ（凝血酶原指数），任选地至少一个选自尿素和ＧＧＴ（γ－谷氨酰转肽酶）的其他参数，并任选地测量至少一个其他的生化或临床参数，并基于这些参数的存在或测量水平来诊断肝病的存在和／或严重程度。该方法可以用于监控肝纤维化的治疗处理和肝纤维化的分级。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及肝脏病学和肝纤维化的领域。特别涉及一组可以用于诊断肝纤维化的血清学标记，特别用于诊断由于慢性HCV感染引起的肝纤维化。这些标记可以用于监控肝纤维化的治疗处理。
技术介绍
将纤维化肝病列为全世界死亡率第八大常见诱因，每年占1.3百万死亡(Murray和Lopez，1997，Lancet 349，1269-1276)。纤维化的细胞机理是复杂的。响应例如由慢性丙肝病毒(HCV)感染、乙肝病毒(HBV)感染、酒精或脂肪肝病、药物诱导的肝病或初期胆汁性肝硬化引起的肝损伤，将通常静止的肝星状细胞激活成增殖的肌成纤维细胞。这些细胞产生胞外基质蛋白并释放金属蛋白酶的组织抑制剂，其结合并钝化引起疤痕退化的金属蛋白酶。结果，通过组织和蛋白样胶原蛋白增加的产生和这些化合物降低的降解，纤维化和疤痕累积，使得肝功能受损(McHutchinson2004，CME Newsletter TxReporter Gastroenterology，2-4)。尽管肝纤维化是引起胞外基质累积的可逆过程，但肝硬化是不可逆的过程，其特征在于完全围绕实质的基质厚条带形成结节。如果顺其自然不治疗，肝纤维化导致肝硬化，可能癌症。出于这些原因，肝纤维化及时而准确的诊断对于有效的医疗处理是必要的。目前仍然认为肝活组织检查是用于检测纤维化和炎症的所谓黄金标准。推荐肝活组织检查来将疾病评级和分阶段，证实诊断并建立基准，相对于此来证明改善或疾病进展，帮助测定预后和治疗的需要(McHutchinson，参见上文；对于综述，参见Gebo等，2002 Hepatology36，161-172)。存在多种已经用于半定量慢性丙肝患者肝纤维化和炎症程度的组织学分级系统。最常用的分级系统之一是METAVIR系统(Bedossa等，1994，Hepatlogy，20，15-20)。METAVIR将肝纤维化分成F0至F4的5个阶段。F0表示无纤维化，F1对应轻度纤维化(门静脉纤维化但没有隔膜)。中度至严重纤维化归类为F2至F4(F2少数隔膜，F3很多隔膜但没有硬化)，阶段F4对应肝硬化的最后阶段。认为纤维化从F≥2在临床上开始明显。但是在应用肝活组织检查诊断和分级纤维化中存在几个缺陷。肝纤维化常受到取样误差，使得小部分的样品不能反映整个肝脏中的真实情况。因而，不是持续退化的动态过程的准确标记。此外，病理学家在他们判断组织学样品的数据时通常不一致，其中在10％至20％的活组织检查中产生观察者内和观察者间的可变性(Cadranel等2000，Hepatology 32，477-481)。肝活组织检查对于患者是入侵性的且疼痛的程序。而且与取样后出血和其它并发症的风险相关。此外和部分地由于预期的并发症后患者住院，这是成本高的方法。肝纤维化是慢性HCV感染的主要并发症，导致肝硬化和代偿失调肝病的产生。因此检测纤维化的产生和进展的的定向研究对于这些患者的有效控制是必要的。最好是用非入侵性的能够区别纤维化中间阶段的测试来完成渐进性纤维化的评价。已经公开了各种单一标记和标记组算法，但是目前没有可以可靠预测纤维化的有效单一生物标记或生物标记评分可用(诊断准确性＞80％)。肝纤维化非入侵性动态测量发展的进一步研究的在2002年受到National Institute of HealthConsensus Development Conference的强烈鼓励。特别是关于肝活组织检查可替换方案的研究应当提供关于活组织检查方法足够详细的内容(活组织检查样品的平均大小；组织学上充分表征的定量图)来使阅读器确信参照标准的适合性。肝活组织检查强烈依赖于最佳化的性能标准并可能由于观察者之间的可变性和太小的样品大小(＜10mm)导致组织学阶段的错误分类。对于反映肝病中纤维化过程并可以作为肝活组织检查替代的生物化学或血清学标记存在广泛的研究。在最近几年，已经研究了几个非入侵性或最小入侵性的生物化学和血清学标记来帮助诊断肝病。特别是，已经将标记的组合物用于将患者分类，根据他们的纤维化阶段或程度。US6,631,330公开了使用至少4种选自α-2-巨球蛋白、天门冬氨酸盐氨基转移酶、γ-谷氨酰转肽酶、γ-球蛋白、总胆红素、白蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、结合珠蛋白、β-球蛋白、apoA1、IL-10、TGF-β1、apoA2和ApoB的生化标记的组合。在数学上合并所获得的这些标记中4种的值来测定肝纤维化的存在。使用该标记组，可以获得约80％的诊断准确性。国际专利申请WO2003/073822描述了诊断患者肝纤维化存在或严重程度的方法。该方法使用至少三种标记的结合，这三种标记是α-2-巨球蛋白、透明质酸和金属蛋白酶1的组织抑制剂(TIMP-1)。使用该方法，可以获得约80％的诊断准确性(Mc Hutchinson，2004，参见上文)。存在产生非入侵性或最小入侵性方法的需要来达到比迄今为止现有技术中已知的更高的肝纤维化测定中的诊断准确性并以更可靠的方式来归类和区分纤维化的不同阶段，使得监控纤维化的进展和对治疗的响应成为可能。此外，这样的方法应当适于自动化分析仪上的连续测试。专利技术描述通过根据本专利技术的方法解决了该问题。该方法用于检测患者中肝病的存在和/或严重程度，所述方法包括如下的步骤a)从所述患者获得分离的样品b)测量所述样品中的TIMP-1(金属蛋白酶I的组织抑制剂)b)测量所述样品中的A2M(α-2-巨球蛋白)c)测量所述样品中的PLT(血小板数量)d)测量所述样品中的PI(凝血酶原指数)e)任选地测量或测定所述样品中至少一个选自尿素和GGT(γ-谷氨酰转肽酶)的其他参数f)任选地测量所述样品中至少一个其他的生化或临床参数g)基于TIMP-1、A2M、PLT、PI和根据步骤e)和f)所测量参数的存在或测量水平来诊断肝病的存在和/或严重程度。本专利技术允许F0/F1纤维化与F2/F3/F4阶段之间确实的区分。此外，可以通过本专利技术的方法进行作为肝病医疗处理控制的治疗监控。本专利技术的方法与充分表征的肝纤维化的Metavir阶段高度相关。与现有技术的方法相比较，本专利技术方法的特定优势是使用了定量组来最小化病理观察的错误分类和统计模型的误差。本专利技术的方法包括与通过几种方法测定的纤维化严重程度非常接近一致的非入侵性方法，这几种方法为肝活组织检查和更多的方法如测定纤维化面积。本专利技术的方法基于患有充分表征肝纤维化(涵盖全部范围的Metavir阶段)的患者标本和由于组织学测定没有肝纤维化的患者标本(Metavir评价0)的统计学相关群组。样本的最初选择标准是Metavir评分。在双重评价和使用大小大于15mm标本的最佳化方式中证实了这种参照。本专利技术的方法允许纤维化的缺失预测，具有至少85％，优选至少87％的诊断准确性(DA)。由于对于纤维化阶段的任意错误分类并进一部导致患者疼痛和健康风险，即使该参照标准不是肝纤维化的黄金标准，本专利技术的方法表示了活组织检查的可替换方案。该方法允许研究纤维化的产生和进展，提供慢性HCV患者的有效监控。与活组织检查相比较，可以以短的时间间隔来慢性HCV患者的疾病监控进行。该方法允许监控抗纤维化治疗的成功。该方法还允许研究慢性肝损伤患者中纤维化的产生和进展。这是相对常见的具有最小症状的本文档来自技高网...
【技术保护点】
检测患者中肝病的存在和／或严重程度的方法，所述方法包括： ａ）从所述患者获得样品， ｂ）测量所述样品中的ＴＩＭＰ－１（金属蛋白酶Ｉ的组织抑制剂）， ｂ）测量所述样品中的Ａ２Ｍ（α－２－巨球蛋白）， ｃ）测量所述样品中的ＰＬＴ（血小板数量）， ｄ）测量所述样品中的ＰＩ（凝血酶原指数）， ｅ）任选地测量或测定所述样品中至少一个选自尿素和ＧＧＴ（γ－谷氨酰转肽酶）的其他参数， ｆ）任选地测量所述样品中至少一个其他的生化或临床参数， ｇ）基于ＴＩＭＰ－１、Ａ２Ｍ、ＰＬＴ、ＰＩ和根据步骤ｅ）和ｆ）所测量参数的存在或测量水平来诊断肝病的存在和／或严重程度。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：H休迪格，UH威恩休斯蒂伦，P卡勒斯，
申请(专利权)人：霍夫曼拉罗奇有限公司，昂热大学，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]
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