编码与酵母的凝集性相关的蛋白质的基因及其用途制造技术

本发明专利技术涉及编码与酵母的凝集性相关的蛋白质的基因及其用途，特别涉及其凝集性适合于酿造目的酒精饮料的酿造酵母、使用该酵母制造的酒精饮料、其制造方法等。更加具体地说，本发明专利技术涉及一种酵母，通过控制编码与酿造酵母的凝集性相关的蛋白质的基因ＨＳＰ１５０，特别是啤酒酵母的特征基因ｎｏｎ－ＳｃＨＳＰ１５０的表达量，而赋予该酵母适合于酿造目的酒精饮料的凝集性，还涉及使用该酵母制造的酒精饮料及其制造方法等。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及编码与酵母的凝集性相关的蛋白质的基因及其用途，特别涉及具有适 度凝集性的制造酒精饮料的酿造酵母、使用该酵母制造的酒精饮料、其制造方法等。更加具 体地说，本专利技术涉及通过控制编码与酿造酵母的凝集性相关的蛋白质的HSP150基因，特别 是啤酒酵母的特征基因nonScHSP150的表达量而具有适当凝集性的酵母、其选择方法、育 种方法、以及使用该酵母的酒精饮料的制造方法等。
技术介绍
在制造酒精饮料的过程中，供与酿造使用的酵母的凝集性非常重要，这里，酵母的 凝集性是指各酵母细胞之间相互作用形成凝集块，在液体培养基中沉降于液体底部的性 质。例如，现在普遍喜欢饮用的储藏型啤酒，其酿造中使用的酵母的特征在于，接近发 酵结束时酵母发生凝集沉降于发酵液的底部，所以称其为下层发酵酵母。在啤酒酿造过程 中，要回收发酵结束后的酵母以在下次发酵中使用(将此称为连续酿造)，所以从酿造过程 的工作效率来看酵母的凝集性是非常重要的特性。也就是说，凝集性低的酵母即使发酵结 束时也不发生沉降，存在回收时必需进行例如离心分离等多余工序的问题。另一方面，凝集 性太高的酵母在发酵途中发生沉降，有可能不能进行充分的发酵，这种情况下会极大影响 产品的香味，所以使用其凝集性适合于制造目的酒精饮料的酵母非常重要。此外，不仅限于酒精饮料，在工业用酒精生产(参照新型凝集性酒精发酵酵母、日 本国特公平6-36734号公报)、废水处理(高凝集活性突变株、日本国特许第3044284号)， 以及酒精饮料的生产领域，更加要求效率性，所以有关酵母凝集性的研究非常盛行。这样在有关产业上具有重要性质的酵母凝集性的大量研究中，作为与酵母的凝集 性相关的基因，到目前为止确定有FLO基因家族(FLO 1、FL05、FL08、FL09、FLO10、FLO11)和 SFLl 等。作为这方面的研究，例如已对FLOl基因进行了分子水平的分析(Bidardet al.， YEAST, 11 (9), 809 (1995)),已对通过使用Flolp控制啤酒酵母的凝集性的方法进行了研究 (日本国特许第3643404号)。此外还报道了下述方法，即，通过FL08基因的表达调节控制 酵母凝集性的方法(日本国日本特开平08-270号公报)、使用FL05基因的碱基序列判定凝 集性的方法(国际公开号W001/040514)等。另一方面，还知道几种凝集性酵母的特异性酵母细胞表面蛋白，但对每一种蛋白 质的认识还不足以达到用于控制啤酒酵母的凝集性的研究。
技术实现思路
在上述状况下，要求利用编码与酿造酵母凝集性相关的蛋白质的基因以及该蛋白 质，对其凝集性适合于制造目的酒精饮料的酵母进行育种，以能够高效率制造酒精饮料。本专利技术者为了解决上述课题进行精心研究，结果从啤酒酵母中成功鉴定、分离出编码与酵母的凝集性相关的蛋白质的基因。此外，制备所得基因的表达得到控制的转化酵 母，证明凝集性可实际上得到控制，从而完成了本专利技术。本专利技术涉及编码与酿造酵母的凝集性相关的蛋白质的基因、该基因编码的蛋白 质、该基因的表达受到调节的转化酵母、通过使用该基因表达受到调节的酵母来控制酵母 凝集性的方法等。具体来说，本专利技术提供下述所示的多核苷酸、含有该多核苷酸的载体或 DNA片段、导入该载体或DNA片段的转化酵母、使用该转化酵母的酒精饮料的制造方法等。(1)多核苷酸，其选自下述(a) (f)组成的群组(a)多核苷酸，其含有具有序列号1的碱基序列的多核苷酸；(b)多核苷酸，其含有编码蛋白质的多核苷酸，所述蛋白质具有序列号2的氨基酸 序列；(c)多核苷酸，其含有编码蛋白质的多核苷酸，所述蛋白质具有在序列号2的氨基 酸序列中缺失、取代、插入及/或添加1个或多个氨基酸后的氨基酸序列，且具有赋予酵母 凝集性的活性；(d)多核苷酸，其含有编码蛋白质的多核苷酸，所述蛋白质具有与序列号2的氨基 酸序列有60%以上同一性的氨基酸序列，且具有赋予酵母凝集性的活性；(e)多核苷酸，其含有一种多核苷酸，该种多核苷酸在严格条件下与具有与序列号 1的碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸进行杂交，且编码具有赋予酵母凝集性的活性的 蛋白质；以及(f)多核苷酸，其含有一种多核苷酸，该种多核苷酸在严格条件下，与具有与编码 具有序列号2的氨基酸序列的蛋白质的多核苷酸的碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸 进行杂交，且编码具有赋予酵母凝集性的活性的蛋白质。(2)如上述⑴所述的多核苷酸，其选自下述(g) ⑴组成的群组(g)多核苷酸，其含有编码蛋白质的多核苷酸，所述蛋白质具有序列号2的氨基酸 序列或在序列号2的氨基酸序列中缺失、取代、插入及/或添加1 10个氨基酸后的氨基 酸序列，且具有赋予酵母凝集性的活性；(h)多核苷酸，其含有编码蛋白质的多核苷酸，所述蛋白质具有与序列号2的氨基 酸序列有90%以上同一性的氨基酸序列，且具有赋予酵母凝集性的活性；以及(i)多核苷酸，其含有一种多核苷酸，该种多核苷酸在高严格条件下，与具有序列 号1的碱基序列的多核苷酸或具有与序列号1的碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸进行 杂交，且编码具有赋予酵母凝集性的活性的蛋白质。(3)如上述(1)所述的多核苷酸，其含有具有序列号1的碱基序列的多核苷酸。(4)如上述(1)所述的多核苷酸，其含有编码具有序列号2的氨基酸序列的蛋白质 的多核苷酸。(5)如上述(1) (4)中任一项所述的多核苷酸，其为DNA。(6)多核苷酸，其选自下述(j) (m)组成的群组(j)多核苷酸，其编码RNA，该RNA具有与上述(5)所述的多核苷酸(DNA)的转录 产物互补的碱基序列；(k)多核苷酸，其编码RNA，该RNA通过RNAi效应抑制上述( 所述的多核苷酸 (DNA)的表达；(1)多核苷酸，其编码RNA，该RNA对上述(5)所述的多核苷酸(DNA)的转录产物 具有特异切割活性；以及，(m)多核苷酸，其编码RNA，该RNA通过共抑制效应抑制上述( 所述的多核苷酸 (DNA)的表达。(7)蛋白质，其为被上述(1) (5)中任一项所述的多核苷酸编码的蛋白质。(8)载体，其含有上述⑴ (5)中任一项所述的多核苷酸。(8a)上述(8)所述的载体，其包括表达盒，该表达盒包括下述构成要素(X) (ζ)(χ)在酵母细胞内可转录的启动子；(y)上述⑴ (5)中任一项所述的多核苷酸，其连接在该启动子的正义方向或反 义方向；以及(ζ)涉及RNA分子的转录终止及多腺苷酸化作用，并在酵母内起作用的信号。(8b)上述(8)所述的载体，其包括表达盒，该表达盒包括下述构成要素(X) (ζ)(χ)在酵母细胞内可转录的启动子；(y)上述(1) (5)中任一项所述的多核苷酸，其连接在该启动子的正义方向；以 及(ζ)涉及RNA分子的转录终止及多腺苷酸化作用，并在酵母内起作用的信号。(8c)上述(8)所述的载体，其包括表达盒，该表达盒包括下述构成要素(X) (ζ)(χ)在酵母细胞内可转录的启动子；(y)上述⑴ (5)中任一项所述的多核苷酸，其连接在该启动子的反义方向；以 及(ζ)涉及RNA分子的转录终止及多腺苷酸化作用，并在酵母内起作用的信号。(9)载体，其含有上述(6)所述的多核苷酸。(10)酵母，其为导入上述⑶ (9)中任一项所述的载体的酵母。(11)本文档来自技高网...

【技术保护点】
多核苷酸，其选自下述（ａ）～（ｆ）组成的群组：　　　　（ａ）多核苷酸，其含有具有序列号１的碱基序列的多核苷酸；　　　　（ｂ）多核苷酸，其含有编码蛋白质的多核苷酸，所述蛋白质具有序列号２的氨基酸序列；　　　　（ｃ）多核苷酸，其含有编码蛋白质的多核苷酸，所述蛋白质具有在序列号２的氨基酸序列中缺失、取代、插入及／或添加１个或多个氨基酸后的氨基酸序列，且具有赋予酵母凝集性的活性；　　　　（ｄ）多核苷酸，其含有编码蛋白质的多核苷酸，所述蛋白质具有与序列号２的氨基酸序列有６０％以上同一性的氨基酸序列，且具有赋予酵母凝集性的活性；　　　　（ｅ）多核苷酸，其含有一种多核苷酸，该种多核苷酸在严格条件下与具有与序列号１的碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸进行杂交，且编码具有赋予酵母凝集性的活性的蛋白质；以及　　　　（ｆ）多核苷酸，其含有一种多核苷酸，该种多核苷酸在严格条件下，与具有与编码具有序列号２的氨基酸序列的蛋白质的多核苷酸的碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸进行杂交，且编码具有赋予酵母凝集性的活性的蛋白质。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：中尾嘉宏，儿玉由纪子，下永朋子，
申请(专利权)人：三得利株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]